子宫内注射脐带间充质干细胞、其条件培养基和曲安奈德对瘢痕疙瘩中 1:3 型胶原比率和白细胞介素 10 水平的影响：一项随机对照试验

通过使用尺子测量瘢痕疙瘩尺寸来对患者进行筛查。 符合纳入标准的患者随后被随机分为 3 组。 使用 1 mL 注射器和 27G 针头向受试者注射每 cm3 瘢痕疙瘩体积中相同的注射量（1 ml）。 在超声引导下，通过面内技术将注射剂注射到病变中心，倾斜度为 30-45 度，确保每个受试者的压力均匀。 第 1 组给予 UC-MSC 200 万个细胞/mL/cm3，第 2 组接受 UC-CM 1mL/cm3，而第 3 组给予 TA 40 mg/mL/cm3。 为了获得 UC-MSC 和 UC-CM，将 10 cm 的脐带组织收集到含有以下物质的 50 mL 运输培养基中：两性霉素 B（最终浓度 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]）、α 最小必需培养基（MEM [GIBCO 12000-022 1]）、青霉素/链霉素（终浓度 300 U/ml [Gibco 15140-122]）。 然后在收集后 8 小时内对样本进行处理。 然后解剖脐带，用 0.5% 聚维酮碘 (聚维酮碘 ©) 和 pH 7.4 磷酸盐缓冲盐水 (PBS [Sigma P3813]) 短暂洗涤，然后在 PBS 中洗涤以除去聚维酮碘和血液。 在将脐带切碎成完全培养基之前切除脐血管。 UC-CM 使用 Alpha-MEM 和 Dulbecco 改良 Eagles 培养基 (DMEM [GIBCO 31600-034]) 创建。 最终的完全培养基含有 1% L-谷氨酰胺（Lonza 17-605C）、10% TC（印度尼西亚红十字会）、两性霉素 B（终浓度 2500 ng/ml）和青霉素/链霉素（终浓度 100 U/ml）。 在培养物中添加 10% 自体或同种异体脐带血血清和 10% 人 AB 血清 (Gibco 34005-100) 以创建 MEM。 12 孔板（生长面积为 3.8 cm2 [Biolite]）的每个孔中填充三个外植体（直径 2-5 mm）和沃顿胶，然后添加几滴完全培养基。 对每种培养基进行三次培养。 将板在 37°C 和 5% CO2 下孵育，每天观察污染或细胞生长情况，其中污染的孔被移除。 外植体附着后，添加 200-500 µL 适当的培养基。 每 2-3 天进行一次培养基更换，包括去除一半培养基和添加每种培养基的一半。 细胞在外植体之外的生长达到 90% 汇合，标志着使用 TrypLE Select (GIBCO 12563-011) 收获的活力。 使用染料排除法来计算活细胞/非活细胞产量。 每次收获后，外植体仍附着在平板上，添加新的适当培养基，并将平板在 37°C 和 5% CO2 下重新孵育。 对第二次和后续培养物重复类似的处理，从而能够从单个外植体中多次收获。 然后对瘢痕疙瘩组织进行了两次活检，一次是第一次，一次是 17 周后。 解剖病理学检查中要评估的参数是天狼星红染色以评估偏光镜下的胶原结构，以及使用ELISA方法进行体外定量检查以检查IL-10。 通过将治疗前的胶原蛋白的比率除以每次治疗后的胶原蛋白的比率来计算1型与3型胶原蛋白水平的比率的变化。 当在偏光镜下观察时，3 型胶原蛋白将呈现绿色双折射，1 型胶原蛋白将呈现黄色双折射。 胶原蛋白比率是通过在偏光镜片下天狼星红染色中除以 1 型胶原蛋白与 3 型胶原蛋白的组成来获得的。