Napanuoran mesenkymaalisten kantasolujen, sen käsitellyn elatusaineen ja triamsinoloniasetonidin intraleesisen injektion vaikutus tyypin 1:3 kollageenisuhteeseen ja interleukiini-10-tasoihin keloidissa: satunnaistettu kontrolloitu tutkimus

Potilaiden seulonta tehtiin mittaamalla keloidimitat viivaimella. Potilaat, jotka täyttivät sisällyttämiskriteerit, jaettiin sitten satunnaisesti kolmeen ryhmään. Sama injektiotilavuus (1 ml) jokaista keloiditilavuutta kohti annettiin 1 ml:n ruiskulla ja 27 G:n neulalla koehenkilöille. Ultraääniohjausta käytettiin injektioon in-plan-tekniikkaa käyttäen vaurion keskelle 30-45 asteen kaltevuuksilla, mikä varmisti tasaisen paineen jokaisessa koehenkilössä. Ryhmälle 1 annettiin UC-MSC:tä 2 miljoonaa solua/ml/cm3, ryhmälle 2 annettiin UC-CM:ää 1 ml/cm3, kun taas ryhmälle 3 annettiin TA:ta 40 mg/ml/cm3. UC-MSC:n ja UC-CM:n saamiseksi kerättiin 10 cm napanuorakudosta 50 ml:aan kuljetusalustaa, joka sisälsi seuraavat aineet: amfoterisiini B (lopullinen pitoisuus 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), alfa-minimaalinen välttämätön alusta. (MEM [GIBCO 12000-022 1]), penisilliini/streptomysiini (lopullinen pitoisuus 300 U/ml [Gibco 15140-122]). Näytteet käsiteltiin sitten 8 tunnin sisällä keräämisestä. Sen jälkeen napanuora leikattiin, pestiin lyhyesti 0,5-prosenttisessa povidonijodissa (betadiini ©) fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, jonka pH oli 7,4 (PBS [Sigma P3813]), ja pestiin sitten PBS:ssä betadiinin ja veren poistamiseksi. Napasuonet leikattiin pois ennen kuin napanuora jauhettiin täydelliseksi alustaksi. UC-CM luotiin käyttämällä Alpha-MEM:ää ja Dulbeccon modifioitua Eagles-alustaa (DMEM [GIBCO 31600-034]). Viimeistelty täydellinen alusta sisältää 1 % L-glutamiinia (Lonza 17-605C), 10 % TC:tä (Indonesian Punainen Risti), amfoterisiini B:tä (lopullinen pitoisuus 2500 ng/ml) ja penisilliini/streptomysiini (lopullinen pitoisuus 100 U/ml). Viljelmän täydentäminen 10 % autologisella tai allogeenisellä napanuoraveriseerumilla ja 10 % ihmisen AB-seerumilla (Gibco 34005-100) tehtiin MEM:n luomiseksi. Jokainen 12-kuoppaisen levyn kuoppa (kasvu on 3,8 cm2 [Biolite]) täytettiin kolmella eksplantilla (halkaisija 2-5 mm) ja Wharton's Jellyllä, minkä jälkeen lisättiin useita tippoja täydellistä alustaa. Viljelmä kolminkertaistettiin kullekin alustalle. Levyä inkuboitiin 37 °C:ssa ja 5 % C02:ssa ja tarkkailtiin päivittäin kontaminoitumisen tai solukasvun varalta, jolloin kontaminoituneet kuopat poistettiin. Kun eksplantaatti oli kiinnitetty, lisättiin 200-500 ui sopivaa alustaa. Elatusainevaihdot, joihin sisältyi puolet elatusaineesta poistaminen ja puolet kustakin alustasta lisääminen, suoritettiin 2-3 päivän välein. Solujen kasvu eksplanttien ulkopuolella 90 %:n konfluenssilla merkitsee elinkelpoisuutta TrypLE Selectin (GIBCO 12563-011) keräämistä varten. Värien poissulkemismenetelmää käytettiin elävien/epäelävien solujen saannon laskemiseen. Jokaisen sadonkorjuun jälkeen, kun eksplantti oli edelleen kiinnitettynä levyyn, lisättiin uutta sopivaa alustaa ja levyä inkuboitiin uudelleen 37 °C:ssa ja 5 % C02:ssa. Samanlainen käsittely toistettiin toiselle ja sitä seuraaville viljelmille, mikä mahdollisti useita satoja yhdestä eksplantista. Keloidikudosten biopsiat otettiin sitten kahdesti, ensimmäisessä kokouksessa ja 17 viikkoa sen jälkeen. Anatomisen patologian tutkimuksessa arvioitavia parametreja ovat Sirius-punavärjäys kollageenirakenteen arvioimiseksi polarisoivan linssin alla sekä kvantitatiivinen in vitro -tutkimus ELISA-menetelmällä IL-10:n tutkimiseksi. Tyypin 1 ja tyypin 3 kollageenitasojen suhteen muutosten laskeminen suoritettiin jakamalla kollageenin suhde ennen hoitoa kollageenin suhteesta kunkin hoidon jälkeen. Kun visualisoidaan polarisoivan linssin alla, tyypin 3 kollageeni näyttää vihreältä kahtaistaittavalta ja tyypin 1 kollageeni näyttää keltaista kahtaistaittavalta. Kollageenisuhde saatiin jakamalla tyypin 1 kollageenin koostumus tyypin 3 kollageeniin Sirius-punavärjäyksessä polarisoivien linssien alla.