Het effect van intralesiaanse injectie van mesenchymale stamcellen uit de navelstreng, het geconditioneerde medium en triamcinolonacetonide op type 1:3 collageenverhouding en interleukine-10-niveaus in keloid: een gerandomiseerde gecontroleerde studie

Screening van patiënten werd gedaan door de afmetingen van de keloïden te meten met behulp van een liniaal. Patiënten die voldeden aan de inclusiecriteria werden vervolgens willekeurig verdeeld in 3 groepen. Hetzelfde injectievolume (1 ml) in elk cm3 keloïdvolume werd gegeven met behulp van een injectiespuit van 1 ml en een 27G-naald aan de proefpersonen. Echografie werd gebruikt om de injectie toe te dienen met behulp van een in-plane techniek in het midden van de laesie, met hellingen van 30-45 graden, waardoor een uniforme druk bij elke proefpersoon werd gegarandeerd. Groep 1 kreeg UC-MSC 2 miljoen cellen/ml/cm3, groep 2 kreeg UC-CM 1 ml/cm3 terwijl groep 3 TA 40 mg/ml/cm3 kreeg. Om UC-MSC en UC-CM te verkrijgen, werd 10 cm navelstrengweefsel verzameld in 50 ml transportmedium met de volgende stoffen: amfotericine B (eindconcentratie 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), alfa minimaal essentieel medium (MEM [GIBCO 12000-022 1]), penicilline/streptomycine (eindconcentratie 300 U/ml [Gibco 15140-122]). Monsters werden vervolgens binnen 8 uur na verzameling verwerkt. De navelstreng werd vervolgens ontleed, kort gewassen in 0,5% povidon-jodium (betadine ©) met fosfaatgebufferde zoutoplossing van pH 7,4 (PBS [Sigma P3813]), en daarna gewassen in PBS om betadine en bloed te verwijderen. De navelstrengvaten werden weggesneden voordat de navelstreng tot een compleet medium werd gehakt. UC-CM is gemaakt met behulp van Alpha-MEM en Dulbecco's gemodificeerd Eagles-medium (DMEM [GIBCO 31600-034]). Het voltooide complete medium bevat 1% L-glutamine (Lonza 17-605C), 10% TC (Indonesisch Rode Kruis), amfotericine B (eindconcentratie 2500 ng/ml) en penicilline/streptomycine (eindconcentratie 100 U/ml). Suppletie van kweek met 10% autoloog of allogeen navelstrengbloedserum en 10% humaan AB-serum (Gibco 34005-100) werd gedaan om MEM te creëren. Elk putje van een plaat met 12 putjes (groei is 3,8 cm2 [Bioliet]) werd gevuld met drie explantaten (diameter 2-5 mm) en Wharton's Jelly, gevolgd door toevoeging van verschillende druppels volledig medium. Verdrievoudiging van kweek werd op elk medium uitgevoerd. De plaat werd geïncubeerd bij 37°C en 5% CO2 en dagelijks geobserveerd op verontreiniging of cellulaire groei, waarbij de verontreinigde putjes werden verwijderd. Nadat de explantaten waren bevestigd, werd 200-500 µL van geschikt medium toegevoegd. Mediumveranderingen, waarbij de helft van het medium werd verwijderd en de helft van elk medium werd toegevoegd, werden elke 2-3 dagen uitgevoerd. Groei van de cellen buiten de explantaten met 90% confluentie markeert levensvatbaarheid voor oogsten met behulp van TrypLE Select (GIBCO 12563-011). Kleurstofuitsluitingsmethode werd gebruikt om de opbrengst van levensvatbare/niet-levensvatbare cellen te tellen. Na elke oogst, met het explantaat nog aan de plaat bevestigd, werd nieuw geschikt medium toegevoegd en werd de plaat opnieuw geïncubeerd bij 37°C en 5% CO2. Soortgelijke behandeling werd herhaald voor de tweede en volgende culturen, waardoor meerdere oogsten van een enkel explantaat mogelijk waren. Biopsieën van de keloïde weefsels werden vervolgens twee keer uitgevoerd, tijdens de eerste bijeenkomst en 17 weken daarna. Parameters die moeten worden geëvalueerd bij anatomisch pathologisch onderzoek zijn Sirius-roodkleuring om de collageenstructuur onder een polariserende lens te evalueren, evenals in vitro kwantitatief onderzoek met behulp van de ELISA-methode om IL-10 te onderzoeken. Berekening van veranderingen in de verhouding van type 1 tot type 3 collageenniveaus werd uitgevoerd door de verhouding van collageen vóór behandeling te delen door de verhouding van collageen na elke behandeling. Wanneer gevisualiseerd onder een polariserende lens, zal type-3 collageen groene dubbele breking lijken en type-1 collageen zal gele dubbele breking lijken. De collageenverhouding werd verkregen door de samenstelling van collageen type 1 tot collageen type 3 te verdelen in Sirius roodkleuring onder polariserende lenzen.