El efecto de la inyección intralesiana de células madre mesenquimales del cordón umbilical, su medio acondicionado y acetónido de triamcinolona en la proporción de colágeno tipo 1:3 y los niveles de interleucina-10 en queloides: un ensayo controlado aleatorizado

El cribado de los pacientes se realizó midiendo las dimensiones de los queloides con una regla. Los pacientes que cumplían con los criterios de inclusión se dividieron aleatoriamente en 3 grupos. Se administró a los sujetos el mismo volumen de inyección (1 ml) en cada cm3 de volumen queloide utilizando una jeringa de 1 ml y una aguja de 27G. Se utilizó guía ultrasónica para administrar la inyección utilizando una técnica en plano en el centro de la lesión, con inclinaciones de 30-45 grados, asegurando una presión uniforme en cada sujeto. El grupo 1 recibió UC-MSC 2 millones de células/mL/cm3, el grupo 2 recibió UC-CM 1mL/cm3 mientras que el grupo 3 recibió TA 40 mg/mL/cm3. Para la obtención de UC-MSC y UC-CM se recogieron 10 cm de tejido de cordón umbilical en 50 mL de medio de transporte que contenía las siguientes sustancias: anfotericina B (Concentración final 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), medio esencial mínimo alfa (MEM [GIBCO 12000-022 1]), penicilina/estreptomicina (concentración final 300 U/ml [Gibco 15140-122]). Luego, las muestras se procesaron dentro de las 8 horas posteriores a la recolección. A continuación, se diseccionó el cordón umbilical, se lavó brevemente en povidona yodada al 0,5 % (betadina ©) con solución salina tamponada con fosfato de pH 7,4 (PBS [Sigma P3813]), y luego se lavó en PBS para eliminar la betadina y la sangre. Los vasos umbilicales se extirparon antes de triturar el cordón umbilical en un medio completo. UC-CM se creó usando Alpha-MEM y el medio Eagles modificado de Dulbecco (DMEM [GIBCO 31600-034]). El medio completo finalizado contiene L-glutamina al 1 % (Lonza 17-605C), TC al 10 % (Cruz Roja de Indonesia), anfotericina B (concentración final 2500 ng/ml) y penicilina/estreptomicina (concentración final 100 U/ml). Se realizó la suplementación del cultivo con suero de sangre de cordón umbilical autólogo o alogénico al 10 % y suero AB humano al 10 % (Gibco 34005-100) para crear MEM. Cada pocillo de una placa de 12 pocillos (el crecimiento es de 3,8 cm2 [biolita]) se llenó con tres explantes (diámetro 2-5 mm) y gelatina de Wharton, seguido de la adición de varias gotas de medio completo. Se realizó la triplicación del cultivo para cada medio. La placa se incubó a 37 °C y 5 % de CO2 y se observó diariamente en busca de contaminación o crecimiento celular, en el que se retiraron los pocillos contaminados. Después de unir los explantes, se agregaron 200-500 µL del medio apropiado. Los cambios de medio, que implicaban la eliminación de la mitad del medio y la adición de la mitad de cada medio, se realizaron cada 2-3 días. El crecimiento de las células más allá de los explantes con un 90 % de confluencia marca la viabilidad para la recolección utilizando TrypLE Select (GIBCO 12563-011). Se usó el método de exclusión de colorantes para contar el rendimiento de células viables/no viables. Después de cada cosecha, con el explante aún adherido a la placa, se añadió un nuevo medio apropiado y la placa se volvió a incubar a 37 °C y 5 % de CO2. Se repitió un tratamiento similar para el segundo cultivo y los subsiguientes, lo que permitió cosechas múltiples de un solo explante. Luego se realizaron dos veces biopsias de los tejidos queloides, en la primera sesión y 17 semanas después. Los parámetros que se evaluarán en el examen de anatomía patológica son la tinción con rojo de Sirio para evaluar la estructura del colágeno bajo una lente polarizadora, así como el examen cuantitativo In Vitro utilizando el método ELISA para examinar la IL-10. El cálculo de los cambios en la relación entre los niveles de colágeno tipo 1 y tipo 3 se realizó dividiendo la relación de colágeno antes del tratamiento de la relación de colágeno después de cada tratamiento. Cuando se visualiza bajo una lente polarizadora, el colágeno tipo 3 aparecerá con birrefringencia verde y el colágeno tipo 1 aparecerá con birrefringencia amarilla. La relación de colágeno se obtuvo dividiendo la composición de colágeno tipo 1 a colágeno tipo 3 en la tinción con rojo Sirius bajo lentes polarizadores.