断食を模倣した食事と歯周炎（口蹄疫） (FMD)

導入

歯周炎は、微生物によって引き起こされる歯周組織の炎症性疾患です。 歯周炎に関連した炎症は歯周組織に限定されず、体の他の部分に広範囲に影響を与える可能性があり、これは口腔微生物の全身的な広がりによって部分的に媒介されている可能性があることが示されています。 歯周治療のステップ 1 および 2 は、循環する急性期炎症マーカーの上昇を特徴とする短期的な急性期炎症反応とも関連しており、成功した場合にはこれらの分子の長期的な減少が続きます。 中期から長期的には、末梢血管の健康状態を示す他のマーカーの変化と、少なくとも 12 か月間続く代謝制御の改善が伴います。 歯周炎は、代謝障害および調節不全と双方向の関係があることが知られています。 ごく最近の研究では、血清C反応性タンパク質（CRP）レベルによって測定されるように、歯周炎が全身性炎症と関連していることが裏付けられました。 さらに、集中的な非外科的歯周炎治療（ステップ 1 および 2）により、90 日後に CRP が徐々に減少し、180 日後には中程度の増加が見られたことが報告されています。 代謝制御の改善により歯周病の症状も改善される可能性があると考えられていますが、その正確なメカニズムは完全には明らかになっていません。 歯周炎の管理に対する栄養の考えられる影響に関して、人体および実験による研究もいくつか発表されています。 サルを対象とした研究では、長期にわたる食事のカロリー制限（ビタミンやミネラルが豊富な食事）が臨床炎症を抑え、急性微生物攻撃に続発する歯周病の程度を軽減することが判明した。 しかし、サルを対象とした別の実験研究では、長期間の低カロリー食（1日のカロリー摂取量の30％削減とビタミンとミネラル）により、男性では局所炎症性メディエーターの産生と炎症性歯周病のリスクが異なって減少するようですが、女性では減少しないようです。 さらに、動物モデルに関する最近の系統的レビューでは、酸化ストレスまたは免疫系に影響を与える主要栄養素（つまり、n-3 脂肪酸）が歯周炎の予防または治療に重要であると思われると結論付けています。 人間を対象とした研究に関しては、韓国のグループが歯周病の健康な肥満者を対象に4週間の体重管理介入を行ったところ、マトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）-8、MMP-9、インターロイキン-1β（IL-1β）の減少を観察した。歯肉溝液（GCF）。 ドイツの研究チームは、低炭水化物摂取、豊富なオメガ 3 脂肪酸と繊維、より高いビタミン C と D 値、動物性タンパク質の削減、および硝酸塩を含む植物の集中的摂取からなる食事が、体重の大幅な減少につながる可能性があると報告しました。たとえ血清学的炎症パラメータや歯肉下の微生物叢は影響を受けていないようであっても、歯周および歯肉の炎症には影響を及ぼしません。 最近の研究では、西洋の食事パターン（加工肉、赤身肉、バター、高脂肪乳製品、卵、精製穀物の摂取量が多いことを特徴とする）と慎重な食事パターン（野菜、果物、豆類、全粒穀物、魚、鶏肉の摂取量が多い）および歯周炎。しかし、肥満の人だけを考慮した場合、西洋型の食事は歯周炎のリスクが高いことと関連していました。 食事性炎症指数の使用に基づいた別のごく最近の調査では、米国の一般成人において炎症促進性食事の摂取が中等度から重度の歯周炎と関連していることが示されました。 人々は通常、厳格な食事制限を長期間続けることができないため、患者のコンプライアンスを高めるために、新しい断食方法が導入されました。 特に、通常のカロリー摂取量の 30 ～ 50% を 4 ～ 7 日間連続して摂取し、その後月に 1 回自由に再摂取するという断食模倣食 (FMD) は、リスクの軽減という点で非常に有望な有益な効果を示しました。老化、糖尿病、自己免疫、心血管疾患、神経変性、癌の要因。 全体として、歯周病の臨床パラメータおよび炎症パラメータに対する定期的な絶食の潜在的な役割については、依然として不確実性が存在します。 私たちの知る限り、歯周炎治療後の全身および歯周反応に対する口蹄疫の潜在的な影響を調査した研究はありません。

目的

この研究の主な目的は、断食を模倣した食事が非外科的歯周治療後の全身および歯周反応に影響を与えるかどうかをテストすることです。 帰無仮説は、断食を模倣した食事療法は局所的および全身的な炎症性の治療後反応を変化させないということです。

研究デザイン

これは、二重盲検（結果評価者と統計学者）、多施設共同、並行グループおよび 1:1 の割り当て比率による内部パイロットによる無作為化臨床研究です。 採用されたすべての患者は、同じ歯周治療プロトコル（ステップ 1 および 2）を受けます。 1 つのグループ (テスト) は 3 サイクルの FMD を受けます。 FMD プログラムは、断食の負担と悪影響を最小限に抑えるために多量栄養素と微量栄養素の両方を提供しながら、断食のような効果を達成するように設計された植物ベースの食事プログラムです。 FMD は、一般に安全であると考えられている成分 (GRAS) を 100% 使用しており、独自の野菜ベースのスープ、エナジーバー、エナジードリンク、クラッカースナック、オリーブ、ハーブティー、サプリメントで構成されています。 1日に摂取するすべての品目は個別に箱詰めされており、被験者がいつ食べるかを選択できるとともに、翌日の成分を誤って摂取することを防ぎます。 口蹄疫は、1 日目に約 1,100 キロカロリーを摂取する 5 日間のレジメンで構成されています。 2日目から5日目までは1日あたり約750キロカロリー。 反対に、もう一方のグループ (対照) は通常の食事を続けます。

主題の選択

これは多施設共同研究です。 参加者は、カタルーニャ国際大学（UIC）、マドリード・コンプルテンセ大学（UCM）、サンティアゴ・デ・コンポステーラ大学、ムルシア大学、グラナダ大学の臨床スタッフ/学生によって、それぞれの病院に通う歯周炎患者の中からスクリーニングを受けます。 研究者らは、年間 24 人の適格な参加者が参加できると予想しており、そのうちの 70% が最初に興味を示した後、治験に参加することに同意すると想定しています。

研究手順

被験者募集

カタルーニャ国際大学、コンプルテンセ大学、サンティアゴ・デ・コンポステーラ大学、グラナダ大学の患者には、キャンパス内および歯学部内での採用について個別にアプローチされる予定だ。 最初の関心を表明した後、潜在的な参加者には情報シートが提供され、電子メールまたは電話で研究チームのメンバーに質問する機会が提供されます。 その後、参加希望を表明した場合は、スクリーニング訪問に招待されます。 各個人には、参加を希望するかどうかを決定するために少なくとも 24 時間、最大 1 週間の時間が与えられます。 個人には、研究完了時に支払いにより、その時間に対して払い戻されます。

スクリーニング手順

スクリーニング訪問時に、訓練を受けた申請者または治験歯科医によって同意が求められます。同意は、完全な治験手順を詳細に記載した書面による参加者同意書と各データ収集方法の同意チェックリストを通じて記録されます。 同意が得られると、登録された各参加者が参加者ログ フォームに記録されます。 最初のスクリーニングでは、各個人が概説された包含基準と除外基準に適合しているかどうかを確認します。 これは口腔病歴を採取することによって評価され、ハードコピーのスクリーニング ログ フォームに記録されます。 参加者は、適合性を確認するために研究歯科医による歯周検査を受ける必要があります。

ランダム化手順と割り当ての隠蔽

最初の中央ランダム化は、ガイ病院で研究に直接関与していない職員によって「密封された封筒」法を使用して行われます。 重要な影響因子 (「中心」) については、推奨に従って層別ランダム化が実行されます。 サンプルサイズが小さい場合、層別化は 1 つまたはごく少数の因子に限定されるべきであり、年齢の影響は研究デザインによって制限されており、統計分析で調整されるため、年齢による層別化は行われません。 各センターでは、研究統計学者が事前に作成したランダム化リストを使用して、患者は 2 つの治療グループのいずれかに割り当てられます。 リストはブロックされたランダム化によって生成されます。 割り当ての隠蔽を確実にするために、各センターでは密封された封筒が使用されます。 参加者は、-7/-10 日目と 0 日目の間に、テスト治療または対照治療に割り当てられます。セラピストは、治療予約の開始時に封筒を開けて治療の割り当てについて知らされます。

各訪問のスケジュール

対面でのディスカッションや広告への反応から参加にある程度の関心を示した参加者は、スクリーニング訪問に招待されます。 これは、すべての研究訪問と同様、カタルーニャ総合病院 (バルセロナ) とマドリード、サンティアゴ デ コンポステーラ、ムルシア、グラナダの歯口腔病棟 (クリニカ デ オドントロギア) で行われ、所要時間は約 45 分です。 これは、利用可能な臨床スペースの範囲内で、潜在的な参加者と研究歯科医にとって相互に都合の良い日時に行われます。 ここではまず個人情報や病歴を聞かれ、歯科検査を受けます。 資格がある場合は、調査の次の段階が開始され、調査を開始するための予約が与えられる時期が通知されます。 治療は各センターの歯周病学修士の大学院生が担当します。

1～2週間後の-7/-10日目（ベースライン予約または訪問1）に、インフォームドコンセントが与えられ、署名されます。 血液、GCF、プラーク、および便のサンプルが収集されます。 病歴、有害事象、併用薬を確認し、歯の本数と歯ごとに6箇所のプローブ深さ、後退（mm）、プローブ後の出血などの口腔検査を行います。 非常に表面的な予防法、動機付け、口腔衛生の指導が提供されます。

０日目（午前）（来院２）に、試験グループに割り当てられた患者は、連続５日間ＦＭＤを開始する。 全ての患者は全口歯肉縁下インストルメンテーション（PMPR）処置を受け、より詳細な衛生指導が強化される。 病歴、有害事象、併用薬の有無を確認し、合併症の有無を調べるために口腔検査を行います。 訓練を受けた管理栄養士（センターのいずれか）が患者と口蹄疫について話し合い、食べなかった品目や余分に摂取した食品を報告するためのアンケートも配布します。

1 日目 (v3) に、血液と GCF のサンプルが採取されます。 病歴、有害事象、併用薬の確認、合併症の有無を調べるための口腔検査が行われます。

7 日目 (v4) に、血液と GCF のサンプルが採取されます。 病歴、有害事象、併用薬の確認、合併症の有無を調べるための口腔検査が行われます。

45±5日目(v5)に、血液およびGCFのサンプルを採取する。 口腔衛生指導が強化され、研磨を伴う歯肉縁上のスケーリングセッションが提供されます。 口蹄疫の第 2 サイクルは、試験グループの患者に対して開始されます。 病歴、有害事象、併用薬の確認、合併症の有無を調べるための口腔検査が行われます。

８５±５日目（ｖ６）に、試験グループの患者において口蹄疫の第３サイクルが開始される。 病歴、有害事象、併用薬がチェックされ、口腔衛生指導が強化され、研磨を伴う歯肉縁上のスケーリングセッションが提供されます。

９０±５日目（ｖ７）に、全口歯周図測定値を記録する。 血液サンプルとGCFサンプルが採取されます。 口腔衛生指導が強化され、必要に応じて支持的な歯周療法のセッションが提供されます。 病歴、有害事象、併用薬の確認、合併症の有無を調べるための口腔検査が行われます。

180 ±10 日目 (v8) に、全口の歯周図の測定値を 1 歯あたり 6 か所で記録します: プロービングの深さ、後退 (mm)、およびプロービング後の出血。 血液、GCF、プラーク、便のサンプルが採取されます。 口腔衛生指導が強化されます。 病歴、有害事象、併用薬の確認、合併症の有無を調べるための口腔検査が行われます。

*各口蹄疫サイクル中に患者は 1 ～ 2 回電話され、すべてが適切に進行していることを確認し、問題や懸念があれば解決されます。

フォローアップ手順

参加者が複数回（2/3）の訪問を欠席した場合、その参加者は脱落者とみなされる可能性があります。 ただし、それらは治療意図分析には含まれます。

研究終了の定義

すべての参加者が臨床期間のすべての段階を終了し、生物学的物質と臨床スコアの処理/分析が実行されると、研究は完了します。

サンプル収集/ラベル付け/ロギング

サンプルは、この研究に参加するカタルーニャ国際大学、マドリードのコンプルテンセ大学、サンティアゴ・デ・コンポステーラ大学、ムルシア大学、グラナダ大学の有資格歯科医師によって、患者からの研究訪問中に収集されます。 すべての種類のサンプルの収集中、収集されたサンプルの完全性と検査官と参加者の安全を確保するために、適切な手指衛生、フィットした手袋、および滅菌済みの使い捨て検査アイテムが使用されます。 疑似匿名化されたラベル付きチューブが毎回の来院前に準備されます。ラベルは、サンプルの種類の指定を先頭に付けた参加者番号で構成されます。 GはGCF、Bは血液、Sは唾液、SubPは歯肉下のプラークなどです。サンプルの収集は、物理的な操作によってサンプル採取部位が乱されたり、歯肉に軽度の損傷が生じるのを防ぐために、臨床検査が行われる前に毎回の訪問で行われます。出血により、採取中のサンプルが汚染される可能性があります。 GCF Periopaper® ストリップ (Pro-flow Inc.、米国ニューヨーク州アミティビル) を、各象限の最も深いポケット部位 (頬側) の歯肉溝に配置します。 その後、それらは校正済みの Periotron 8000 (Pro-Flow Inc.、米国ニューヨーク州アミティビル) 電子トランスデューサーで直ちに測定され、収集された GCF の量が定量化されます。 測定後、その訪問の GCF ストリップはすべて 1 つの 2ml チューブに -80℃ で保管され、さらなる分析のためにプールされます。 4ml の静脈血が参加者の腕から Hemogard 安全閉鎖キャップ付きの真空滅菌バキュテナーに採取されます。このバキュテナーには、チューブの内面にスプレー コーティングされた EDTA (エチレンジアミン四酢酸) の抗凝固剤 K2 カリウム塩が含まれています。 サンプルは経験豊富で訓練を受けた採血医によって採取されます。 この失神のリスクを軽減するために、参加者はサンプリング中およびサンプリング後の 5 分間は半リクライニング台の上に座ります。 研究者は常に参加者に付き添い、失神した場合に転倒や怪我をしないようにします。 使用済みの針は安全な鋭利物箱に廃棄されます。 血清のサンプルは 11,000 RPM で 10 分間遠心分離され、その後すぐに 0.2ml ～ 0.5ml のアリコートに分割され、分析に必要になるまで -80°C の冷凍庫に保管されます。 歯肉下のプラークサンプルは、研究歯科医によって滅菌キュレットを使用して歯の頬側表面から、それぞれ歯肉縁の下から採取されます。 プラークは、各研究来院時に最も深いポケット部位（頬側表面）を有する歯から収集されます。 これらの歯は、臼歯と切歯のバランスが良くなるように選択されました。 これら 4 本の歯から収集した歯垢を 1 ml の滅菌 0.1x Tris-EDTA にプールし、-80 °C で保存します。 参加者には、保存液中の便をサンプリングするための家庭用採取キットが提供されます ([http://www.microbiome-standards.org])。 http://www.microbiome- 規格.org) このサンプルは収集後 7 日以内に地元の研究所に郵送されます。 実験室で便サンプルを受け取ると、サンプルは -80℃ で保管されます。すべての生物学的に汚染された使い捨てアイテムは、処理および除去のために適切な生物学的危険物箱に廃棄されます。 採取されたすべてのサンプルは、その研究訪問の参加者のハードコピー CRF に記録され、収集日時と収集した研究歯科医のイニシャルが記録されます。 これは、研究 Excel スプレッドシートにも記録されます。 その訪問時に特定のサンプルを採取できない場合は、その理由が CRF の適切な「追加メモ」セクションに記載されます。

サンプル分析手順

すべての実験は、ガイ病院のマイクロバイオームおよび唾液の研究室で行われます。 ＧＣＦサンプルを解凍し、Ｃｕｒｔｉｓ ｅｔ ａｌ． 1988年。 簡単に説明すると、ペリオペーパーストリップは、1.5mlチューブ内に保持される穴あき0.5ml微量遠心管に入れられます。 溶出バッファー (50μL) をストリップに加え、ボルテックスシェーカーに 2 分間置き、その後 11,000 rpm、4 ℃で 15 分間遠心分離します。 さらに 50 μL の溶出バッファーをストリップに加えて遠心分離を繰り返し、合計約 90 μL の溶出 GCF が得られます。 タンパク質濃度は、ウシ血清アルブミン (Sigma) で校正された LVis プレート (BMG Labtech CLARIOstar) を使用して定量されます。 選択された分析物の GCF 分析は Luminex によって実行されます。 サンプルは、KCL Center for Host-Microbiome Interactions、fl.17 Guys Tower Wing で処理されます。 歯垢と便のサンプルは、当研究室の標準的な手順に従って DNA 抽出を受け、次世代 DNA シーケンシングを使用して分析され、歯肉縁下の微生物叢を特徴づけ、主要な歯周病原菌のレベルと治療部位における微生物群集全体の変化を特定および決定します。テストプロトコルとコントロールプロトコルの両方を使用します。 血液サンプルは、ウェスタンブロットや酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）などのさまざまな技術を使用して、サイトカイン、急性期タンパク質、炎症マーカーについて検査され、血液中のこれらの存在と量が決定されます。 歯肉溝液は、やはり ELISA などの技術を使用して、炎症メディエーター、抗体、ペプチド、サイトカインについて分析されます。 口蹄疫への遵守を監視するために、IGF-1の循環レベル、空腹時血糖値、血中β-ヒドロキシ酪酸レベルが評価されます。

ELISA (高感度 2 部位酵素結合免疫吸着測定法): IL-6 検出。

Cobas Integra 700 (自動免疫比濁高感度アッセイ): HsCRP 検出。

これらの実験から生成されたデータは、唾液検査およびマイクロバイオーム研究室のコンピューターやキングスが提供する研究用ラップトップを含む、パスワードで保護された安全なキングスのコンピューターに保存されます。

保存手順例

血液、唾液、歯垢、GCF サンプルは、カタルーニャ国際大学、マドリードのコンプルテンセ大学、サンティアゴ デ コンポステーラ大学、グラナダ大学の研究室にある、安全で施錠された HTA 冷凍庫に -80°C で保管されます。 これにより、サンプル処理の準備における長期的な安定性が保証されます。 採取後、便サンプルは、スタンプを押した封筒に入れて患者によって各参加施設に送付されます。 保存する際、すべてのサンプルは物理的完全性がチェックされ、冷凍されるサンプルはパスワードで保護された安全なコンピュータ データベースにログオンされ、冷凍庫内のサンプルの場所と保存された日時が記録されます。 保存されているサンプルを記録した物理的なハードコピーも CRF に掲載されます。 提供されたサンプルの保管、輸送、使用、および最終的な廃棄は、英国の 2004 年ヒト組織法および EU の組織および細胞指令に従って行われます。 すぐに処理されないサンプルは、後日さらに分析するために擬似匿名で保存されます。 サンプルはガイズ病院の唾液検査室に移送され、完了後 10 年間保管されます。 研究の倫理承認が期限切れになった後、血液、唾液、および GCF サンプルは 2004 年ヒト組織法およびその改正に従って廃棄されるか、組織バンクに移送されます。

スペインから英国へのサンプルの発送

サンプルは、推定移動時間よりも長くサンプルが正しい温度に保たれるように、十分な氷/ドライアイスを入れることができるイグルーに置かれます。 次に、ポリスチレンイグルーの一部を氷/ドライアイスで満たし、サンプルと追加の氷を入れるスペースを確保します。 カタログ作成を容易にするために、サンプルを密閉したビニール袋に入れることができます。 その後、イグルーにはドライアイスが充填され、サンプルと発送用紙が覆われ、さらに、密閉されたプラスチックの標本袋に入った住所ラベルのコピーが同梱されます。 イグルーの上に蓋を置き、ガムテープで固定します。 その後、イグルーは茶色の丈夫な包装紙で包まれ、住所ラベルと極低温危険ラベルの両方が貼られてから配送されます。 できるだけ早く発送を完了するために、最も速い輸送手段 (飛行機など) が選択されます。

安全性の評価

これらは十分に確立された手順であるため、研究者らは、血液サンプルを含むサンプル収集に関与する参加者に対する重大なリスクを予測していません。 これまでの文献に基づくと、考えられるリスクは、口蹄疫の食事療法によって引き起こされる、疲労、脱力感、頭痛などの軽度/中度の全身性有害事象に関するものである可能性があります。 採血中または採血後に失神する危険性もわずかにあります。 このリスクを軽減するために、参加者はサンプリング中およびサンプリング後の 5 分間は半リクライニング台の上に座ります。 研究者は常に参加者に付き添い、失神した場合に転倒や怪我をしないようにします。 採血中に検者に針刺し傷害が発生した場合や、引っ掻き傷害が発生した場合には、現地での対応​​手順を実施します。 研究期間中に重篤な有害事象は発生しないと予想されます。

倫理報告

有害事象とは、研究に関連する好ましくない、意図しない兆候、症状、または疾患です。 採血中の失神などの有害事象が発生した場合、治験責任医師は治験ファイル CRF に記載するよう主任治験責任医師に通知します。 重篤な有害事象 (SAE) は、死亡を引き起こす、参加者の入院を必要とする、持続的な障害を引き起こす、または先天異常を引き起こす事象です。 このような事態が発生した場合、報告は事象を知ってから 24 時間以内に記録され、事象を知ってから 15 日以内に倫理委員会に報告されます。 フォームはタイプスクリプトで記入され、主任研究員が署名する必要があります。 主要 REC は 30 日以内に安全性報告書の受領を確認します。

遵守と撤回

主題のコンプライアンス

参加者のコンプライアンスは、各研究訪問時に評価されます。 自己申告の病歴は、参加者が何らかの行動をとっていないか（例、別の臨床試験への参加を開始したこと）、疾患を発症していないか、投薬を開始していないこと（例、治療薬の服用を開始したこと）を保証します。 抗生物質の全身投与など）は除外基準で禁止されています。 さらに、コンプライアンスは、IGF-1 の循環レベルの低下を考慮した血液検査に基づいて評価されます。 これは CRF のチェックリストに記録されます。 各患者は、試験患者の口蹄疫サイクルを含む研究全体を通して食事日記を記入する必要があります。 研究の有効性にとって食事は非常に重要であるため、食事日記を完了できなかった場合も中退として記録されます。 最後に、参加者が予期せず研究訪問に参加しなかった場合、次の可能な機会にクリニックに参加することが求められます。

科目の辞退・退学

参加者はいつでも研究から撤退することができます。 これは、参加者と研究チームのいずれかとの間の口頭での議論を通じて行われ、その決定は書面による撤回フォームに記録されます。 離脱の理由としては、身体的不快感や多大な時間の拘束などが考えられます。 データ分析が完了すると、すべての匿名化されたデータが照合され、参加者は研究からデータを撤回できなくなりますが、これは最初の募集段階で明らかになります。 この最新の日付は研究の最後に記載されています。 治験実施計画書への重大な不遵守、例えば複数回の治験来院の欠席、または除外基準を満たすその他の事象など、特定の状況では、治験チームは参加者を治験から撤退する決定を必要とする場合があります。 これには、参加者と話し合って決定を通知および説明し、その決定を書面による撤回フォームに記録することが含まれます。 治験訪問時に不遵守が明らかになった場合、CRF の「追加メモ」セクションにも記録されます。 個人が辞退した場合、対象者が置き換えられることはありません。

統計的考察

サンプルサイズの計算

歯周炎患者に口蹄疫を使用した研究は発表されていません。 したがって、実現可能性と必要なサンプルサイズに関するデータは文献にはありません。 研究の正しいサンプルサイズを推定することは非常に困難であるため、この研究は内部パイロットとして設計されています。 Browne ら (1995) は、サンプル サイズの経験則として 30 人の患者が必要であると示唆しましたが、Kieser & Wassmer (1996) は、パイロット サンプル サイズを 20 ～ 40 にすると、大規模な研究の全体的なサンプル サイズが最小限に抑えられることを発見しました。 Julious 2009 の提案に従って、この研究には研究群ごとに 12 人の患者が募集されます。

中間分析と実現可能性/進捗基準

より大規模な試験 (および相対的なサンプル サイズ) を続行するかどうかの決定は、以下の実現可能性/進行基準によって異なります。

実現可能性の側面 満たすべき進行基準

無作為化の意思がある アプローチを受けた患者の 50% 以上が同意 食事の自己申告コンプライアンス 試験群患者の 66% 以上 自己申告コンプライアンス（食事が守られなかった日が 1 日以内と定義） テストされた食事のコンプライアンス 66 以上血液検査に基づくコンプライアンスを示した試験グループ患者の割合（IGF-1 の循環レベルの 20 ～ 30% 低下と定義） (Wei 2017) 血液サンプルの受け入れ 採用された患者の 66% 以上がプロトコールに従ってすべての血液サンプルを採取されている 欠席重篤な有害事象の報告 試験食に関連する可能性のある重篤な有害事象を報告する患者はいない

上記の基準がすべて満たされた場合、24 人の「社内パイロット」患者からのデータを使用して、最大 3 か月分の既存データの分析が実行されます。 3か月後のCRP値の平均値と標準偏差は、より大規模な試験に必要なサンプルサイズを計算するために使用されます。 研究患者の追跡調査は治療後最大6か月間継続されます。 主要アウトカム（3か月時のCRP）のグループ間の差異が最小限であり、サンプルサイズが非常に大きくなった場合、より大きな患者グループの募集に進まない決定が下され、募集が中止される場合があります。 ただし、まだ研究中の患者については、最後の研究追跡調査（180日）まで追跡調査が行われます。

統計分析

この研究の主な結果は、治療後 3 か月の循環 CRP レベル (テスト vs コントロール) です。 ただし、研究の内部パイロット/実現可能性の部分は、フルパワーの研究サンプルサイズで続行するかどうかを検討する前に、まず完了する必要があります。 実現可能性の基準が満たされる場合、グループ間の治療後 3 か月の CRP レベルの差がサンプルサイズに使用され、正式な統計計画が策定されます。 さまざまな統計パッケージがさまざまな目的に使用されます。Stata 14 (StataCorp LLC、米国テキサス州カレッジステーション) がメインパッケージとなり、R (R-Studio プラグイン付き) が追加の分析に使用されます。両方とも特定のルーチンを備えています。この研究のために作成されました。 Shapiro-Wilk テストは、分析された量的変数が正規分布に従っているかどうかを検証するために適用され、正規分布に従っていない変数については対数変換が実行されます。 母集団と研究グループのプロフィールについて説明します。 質的変数の結果は比率で表され、量的変数は 95% 信頼区間を含む平均値と標準偏差として表されます。 臨床的、生化学的、微生物学的パラメータごとの母集団の分布も取得されます。 二変量分析では、カイ二乗検定を使用して、2 つの質的変数間に統計的に有意な関連があるかどうかを判断します。カイ二乗検定が妥当性条件を満たさない場合、データは分割表として表示されます。フィッシャーの直接確率検定適用されます。

グループ間分析の 2 つの独立変数の平均を比較するには、グループ内分析で対応のあるサンプルに対する Student の T 検定を考慮して、Student の T 検定が使用されます。 通常の仮定が満たされない場合は、ノーパラメトリック「マン-ホイットニー U」検定が適用されます。 グループ内分析の場合は、反復測定の ANOVA またはフリードマン検定が使用されます。 多変量解析は、多重線形回帰モデルと、それに低い有意水準 0.20 の独立変数を導入した順序ロジスティック回帰によって実行されます。 条件は、不均一分散性と線形性の残差解析によってチェックされます。 この研究の統計的有意性のレベルは p<0.05 になります。

停止/中止ルールとランダム化コードの違反

これらは十分に確立された手順であるため、研究者らはサンプル収集と口蹄疫に関連するリスクを予見していません。 したがって、研究者らは、研究のいかなる部分も中止する必要はなく、参加者の安全性への懸念を理由に試験を中止する必要もないと予測している。 ただし、口蹄疫は歯周炎患者では検査されていないため、万が一、重篤な有害事象が発生した場合には、その事象を知ってから 24 時間以内にスポンサーへの報告が記録され、15 日以内に倫理委員会への報告が記録されます。イベントの学習について。 その後、これらの機関と連携して研究を中止すべきかどうかが決定される。