Dieta napodobující půst a parodontitida (FMD) (FMD)

Úvod

Parodontitida je mikrobiálně podmíněné zánětlivé onemocnění parodontu. Ukázalo se, že zánět spojený s parodontitidou se neomezuje pouze na parodont, ale může mít dalekosáhlé důsledky ve zbytku těla a že to může být částečně zprostředkováno systémovým šířením orálních mikroorganismů. Kroky 1 a 2 periodontální terapie jsou také spojeny s krátkodobou zánětlivou reakcí akutní fáze, která je charakterizována zvýšením cirkulujících zánětlivých markerů akutní fáze, po které, je-li úspěšná, následuje dlouhodobější redukce těchto molekul. Ve střednědobém až dlouhodobém horizontu je to doprovázeno změnami dalších markerů zdraví periferních cév spolu se zlepšením metabolické kontroly trvajícím alespoň 12 měsíců. Je známo, že parodontitida má obousměrný vztah s metabolickým narušením a dysregulací. Velmi nedávná práce potvrdila, že parodontitida je spojena se systémovým zánětem měřeným hladinami C-reaktivního proteinu (CRP) v séru. Dále bylo hlášeno, že intenzivní nechirurgická léčba parodontitidy (kroky 1 a 2) vedla k progresivnímu snížení CRP po 90 dnech s mírným zvýšením po 180 dnech. Předpokládá se, že zlepšení metabolické kontroly může také zlepšit výsledky parodontu, ale přesné mechanismy pro to nejsou zcela jasné. Bylo také publikováno několik lidských a experimentálních výzkumů týkajících se možných účinků výživy na léčbu parodontitidy. Studie na opicích zjistila, že dlouhodobé dietní omezení kalorií (strava obohacená o vitamíny a minerály) tlumí klinický zánět a snižuje stupeň periodontálního rozpadu sekundárního k akutnímu mikrobiálnímu napadení. V jiné experimentální studii na opicích se však zdálo, že dlouhodobá hypokalorická dieta (o 30 % méně denního příjmu kalorií plus vitamíny a minerály) rozdílně snižuje produkci lokálních zánětlivých mediátorů a riziko zánětlivého periodontálního onemocnění u mužů, ale ne u žen. Nedávný systematický přehled na zvířecích modelech navíc dospěl k závěru, že makroživiny, které mají vliv na oxidační stres nebo imunitní systém (tj. n-3 mastné kyseliny), se zdají být důležité pro prevenci nebo léčbu parodontitidy. Pokud jde o výzkum na lidech, korejská skupina po čtyřtýdenním zásahu pro kontrolu hmotnosti u periodontálně zdravých obézních lidí pozorovala snížení matrix metaloproteinázy (MMP)-8, MMP-9 a interleukinu-1β (IL-1β) v gingivální crevikulární tekutina (GCF). Německý tým uvedl, že strava sestávající z nízkého příjmu sacharidů, bohatého na omega 3 mastné kyseliny a vlákninu, vyšších hodnot vitaminu C a D, omezení živočišných bílkovin a cíleného příjmu rostlin obsahujících dusičnany může vést k významnému snížení periodontální a gingivální zánět, i když se zdá, že sérologické zánětlivé parametry a subgingivální mikrobiom nejsou ovlivněny. Nedávno studie zjistila, že neexistuje žádná celková souvislost mezi západními stravovacími návyky (charakterizované vyšším příjmem zpracovaného masa, červeného masa, másla, vysoce tučných mléčných výrobků, vajec a rafinovaných obilovin) nebo uvážlivými stravovacími zvyklostmi (charakterizované vyšší příjem zeleniny, ovoce, luštěnin, celozrnných výrobků, ryb a drůbeže) a paradentóza; když se však uvažovalo pouze o obézních jedincích, byla západní strava spojena s vyšším rizikem paradentózy. Další velmi nedávný výzkum, založený na použití dietního zánětlivého indexu, ukázal, že konzumace prozánětlivé stravy byla spojena se středně těžkou až těžkou parodontitidou v obecné dospělé populaci USA. Za účelem zvýšení kompliance pacientů byl zaveden nový způsob hladovění, protože lidé obvykle nejsou schopni po dlouhou dobu dodržovat přísnou dietu. Zejména půst napodobující dieta (FMD), skládající se z 30–50 % normálního kalorického příjmu po dobu 4–7 po sobě jdoucích dnů, po které následuje dokrmování ad libitum jednou za měsíc, vykazovala velmi slibné příznivé účinky ve smyslu snížení rizika. faktory stárnutí, cukrovky, autoimunity, kardiovaskulárních onemocnění, neurodegenerace a rakoviny. Celkově stále panuje nejistota ohledně potenciální role periodontálního hladovění na periodontální klinické a zánětlivé parametry. Pokud je nám známo, žádné studie nezkoumaly potenciální účinek slintavky a kulhavky na systémovou a periodontální odpověď po léčbě parodontitidy.

Cíle

Hlavním cílem této studie je otestovat, zda dieta napodobující hladovění může ovlivnit systémovou a periodontální odpověď po nechirurgické parodontální terapii. Nulová hypotéza je, že dieta napodobující hladovění nemodifikuje lokální a systémovou zánětlivou odpověď po léčbě.

Studovat design

Jedná se o dvojitě zaslepenou (hodnotitel výsledku a statistik), multicentrickou, randomizovanou klinickou studii s paralelními skupinami a alokačním poměrem 1:1, s interním pilotem. Všichni přijatí pacienti obdrží stejný protokol pro periodontální terapii (kroky 1 a 2). Jedna skupina (test) bude podrobena třem cyklům FMD. Program FMD je program rostlinné stravy navržený tak, aby bylo dosaženo účinků podobných půstu a zároveň poskytoval makro- i mikroživiny, aby se minimalizovala zátěž hladověním a nežádoucí účinky. Slintavka a kulhavka se skládá ze 100 % složek, které jsou obecně považovány za bezpečné (GRAS) a zahrnuje patentované zeleninové polévky, energetické tyčinky, energetické nápoje, sušenky, olivy, bylinné čaje a doplňky stravy. Všechny položky, které mají být konzumovány za den, jsou jednotlivě zabaleny, aby si subjekty mohly vybrat, kdy jíst, a zároveň se vyhnout náhodné konzumaci složek následujícího dne. Slintavka a kulhavka sestává z 5denního režimu, který poskytuje přibližně 1 100 kilokalorií za první den; přibližně 750 kilokalorií denně druhý až pátý den. Naopak druhá skupina (kontrolní) bude pokračovat v běžné stravě.

Výběr předmětu

Jedná se o multicentrickou studii. Účastníci budou prověřováni Mezinárodní univerzitou v Katalánsku (UIC), Univerzitou Complutense v Madridu (UCM), Univerzitou v Santiagu de Compostela, Univerzitou v Murcii a klinickými pracovníky/studenty univerzity v Granadě mezi pacienty s parodontózou navštěvujícími příslušné nemocnice. Vyšetřovatelé očekávají, že bude ročně k dispozici 24 způsobilých účastníků a předpokládají, že 70 % z nich bude souhlasit s účastí ve studii po vyjádření počátečního zájmu.

Studijní postupy

Nábor předmětu

S pacienty International University of Catalunya's, Complutense University, Santiago de Compostela a Granada University se bude individuálně obracet na nábor v kampusu a na zubní fakultě. Po vyjádření počátečního zájmu bude potenciálním účastníkům poskytnut informační list a možnost klást otázky členům studijního týmu prostřednictvím e-mailu nebo telefonu. Pokud poté vyjádří přání zúčastnit se, budou pozváni na prohlídku. Každý jednotlivec bude mít nejméně 24 hodin a až týden na to, aby se rozhodl, zda se chce zúčastnit. Jednotlivcům bude proplacen jejich čas s platbou při dokončení studie.

Screeningové procedury

Při screeningové návštěvě bude vyškolený uchazeč nebo studijní zubní lékař vyžadovat souhlas, který bude zaznamenán prostřednictvím písemného formuláře souhlasu účastníka s podrobným popisem celého zkušebního postupu a kontrolního seznamu souhlasu pro každou metodu sběru dat. Po udělení souhlasu bude každý přihlášený účastník zaznamenán do formuláře pro přihlášení účastníků. Počáteční screening má zajistit, že každý jedinec splňuje nastíněná kritéria pro zařazení a vyloučení. To bude posouzeno na základě orální anamnézy a bude zaznamenáno do tištěného formuláře Screening Log. Účastníci se budou muset podrobit periodontálnímu vyšetření u studijního zubního lékaře, aby byla zajištěna vhodnost.

Randomizační procedury a alokační utajení

Počáteční centrální randomizace bude provedena pomocí metody "Sealed Envelope" personálem, který není přímo zapojen do studie, v Guy's Hospital. U důležitých ovlivňujících faktorů („střed“) bude podle doporučení provedena stratifikovaná randomizace. Nebude prováděna žádná stratifikace podle věku, protože u malých velikostí vzorků by měla být stratifikace omezena na jeden nebo velmi málo faktorů a protože vliv věku je omezen designem studie a bude upraven ve statistických analýzách. V každém centru budou pacienti rozděleni do jedné ze dvou léčebných skupin pomocí randomizačního seznamu, který byl předem připraven statistikem studie. Seznam bude generován blokovaným náhodným výběrem. V každém středisku bude použita zapečetěná obálka, aby bylo zajištěno utajení přidělení. Účastník bude přidělen k testovací nebo kontrolní léčbě mezi dny -7/-10 a dnem 0. O přidělení léčby bude terapeut informován otevřením obálky na začátku schůzky.

Rozvrh pro každou návštěvu

Účastníci, kteří projevili určitý zájem o účast z osobních diskusí nebo z odpovědí na inzeráty, budou pozváni na prohlídku. To se bude konat, stejně jako všechny studijní návštěvy, v Hospital General de Catalunya (Barcelona) a na Odontostomatologických jednotkách (Clinica de Odontologia) v Madridu, Santiagu de Compostela, Murcii a Granadě a mělo by to trvat přibližně 45 minut. To se uskuteční ve vzájemně vyhovujícím čase a datu pro potenciálního účastníka a zubního lékaře studie, v rámci možností klinického prostoru. Zde budou nejprve dotázáni na jejich osobní údaje / anamnézu a podstoupí zubní prohlídku. Jsou-li způsobilí, budou informováni, kdy bude zahájena další fáze studie, a po sjednání schůzky, aby bylo možné zahájit vyšetřování. Ošetření budou zajišťovat postgraduální studenti magistra parodontologie každého centra.

O jeden až dva týdny později v den -7/-10 (základní schůzka nebo návštěva 1) bude dán a podepsán informovaný souhlas. Budou odebrány vzorky krve, GCF, plaku a stolice. Bude zkontrolována anamnéza, nežádoucí účinky a souběžná medikace a provede se orální vyšetření včetně záznamu počtu zubů a na 6 místech na hloubku sondování zubu, recesi (mm) a krvácení po sondáži. Bude poskytnuta velmi povrchní profylaxe, motivace a pokyny pro ústní hygienu.

V den 0 (ráno) (návštěva 2) zahájí pacienti zařazení do testovací skupiny FMD po dobu 5 po sobě jdoucích dnů. Všichni pacienti podstoupí celoústní subgingivální instrumentační procedury (PMPR) a bude posílena podrobnější hygienická instruktáž. Bude zkontrolována anamnéza, nežádoucí účinky a souběžná medikace a bude provedeno orální vyšetření za účelem screeningu komplikací. Vyškolený registrovaný dietolog (z jednoho z center) bude s pacienty diskutovat o slintavce a kulhavce a také bude distribuovat průzkum k nahlášení nesnědených položek a zkonzumovaných potravin navíc.

V den 1 (v3) budou odebrány vzorky krve a GCF. Bude zkontrolována anamnéza, nežádoucí účinky a souběžná medikace, bude provedeno orální vyšetření za účelem screeningu komplikací.

V den 7 (v4) budou odebrány vzorky krve a GCF. Bude zkontrolována anamnéza, nežádoucí účinky a souběžná medikace, bude provedeno orální vyšetření za účelem screeningu komplikací.

V den 45±5 (v5) budou odebrány vzorky krve a GCF. Instrukce o ústní hygieně budou posíleny a bude poskytnuto sezení supragingiválního odlupování s leštěním. Druhý cyklus FMD bude zahájen u pacientů testovací skupiny. Bude zkontrolována anamnéza, nežádoucí účinky a souběžná medikace, bude provedeno orální vyšetření za účelem screeningu komplikací.

V den 85 ± 5 (v6) bude u pacientů testovací skupiny zahájen třetí cyklus FMD. Bude zkontrolována anamnéza, nežádoucí příhody a souběžná medikace, budou posíleny pokyny pro ústní hygienu a bude poskytnuto sezení supragingiválního škálování s leštěním.

V den 90 ± 5 (v7) budou zaznamenána měření parodontu v celých ústech. Budou odebrány vzorky krve a GCF. Budou posíleny pokyny k ústní hygieně a v případě potřeby bude zajištěno sezení podpůrné parodontologické terapie. Bude zkontrolována anamnéza, nežádoucí účinky a souběžná medikace, bude provedeno orální vyšetření za účelem screeningu komplikací.

V den 180 ± 10 (v8) budou zaznamenávána měření parodontu na 6 místech na zub: hloubka sondování, recese (mm) a krvácení po sondáži. Budou odebrány vzorky krve, GCF, plaku a stolice. Budou zpřísněny pokyny pro ústní hygienu. Bude zkontrolována anamnéza, nežádoucí účinky a souběžná medikace, bude provedeno orální vyšetření za účelem screeningu komplikací.

*Pacienti budou zavoláni jednou nebo dvakrát během každého cyklu slintavky a kulhavky, aby zkontrolovali, že vše probíhá správně, a vyřešili případné problémy nebo obavy, které mohou mít.

Následné postupy

Pokud účastník vynechá více (2/3) návštěv, může být považován za opuštěného. Budou však zahrnuty do analýzy záměru léčby.

Definice konce studia

Studie bude dokončena, jakmile všichni účastníci dokončí všechny fáze klinického období a bude provedeno zpracování/analýza biologického materiálu a klinického skóre.

Sběr vzorků/označování/protokolování

Vzorky budou odebírány během studijní návštěvy od pacienta kvalifikovanými zubními lékaři Mezinárodní univerzity v Katalánsku, Complutense University v Madridu, University of Santiago de Compostela, University of Murcia a University of Granada, kteří se této studie zúčastní. Při odběru všech typů vzorků bude použita správná hygiena rukou, nasazené rukavice a sterilní jednorázové vyšetřovací předměty, aby byla zajištěna integrita odebraných vzorků a bezpečnost zkoušejícího a účastníka. Pseudoanonymizované označené zkumavky budou připraveny před každou návštěvou, přičemž štítek se skládá z čísla účastníka s předponou typového označení vzorku, např. G pro GCF, B pro krev, S pro sliny, SubP pro subgingivální plak atd. Odběr vzorků bude probíhat při každé návštěvě před klinickým vyšetřením, aby se zabránilo fyzické manipulaci narušit místo odběru nebo způsobit mírnou gingivální krvácení, které může kontaminovat odebraný vzorek. Proužky GCF Periopaper® (Pro-flow Inc., Amityville, New York, USA) budou umístěny do gingivální štěrbiny zubů s nejhlubším místem kapsy (bukální aspekty) v každém kvadrantu. Poté budou okamžitě změřeny na kalibrovaném elektronickém převodníku Periotron 8000 (Pro-Flow Inc., Amityville, New York, USA), který bude kvantifikovat množství nasbíraného GCF. Po změření budou všechny proužky GCF pro tuto návštěvu uloženy při -80 °C v jedné zkumavce o objemu 2 ml a spojeny pro další analýzu. 4 ml žilní krve budou odebrány z paže účastníka do evakuovaných vakuových nádob s bezpečnostním uzávěrem Hemogard, obsahujících antikoagulační K2 draselnou sůl EDTA (kyselina etylendiamintetraoctová), která byla nastříkána na vnitřní povrch zkumavky. Vzorky budou odebírat zkušení a vyškolení flebotomové. Aby se snížilo toto riziko mdloby, budou účastníci po celou dobu odběru vzorků a pět minut po odběru na polosklopeném podstavci. Po celou dobu bude s účastníkem přítomen výzkumník, aby bylo zajištěno, že v případě mdloby nedojde k pádu nebo zranění. Použité jehly budou vyhozeny do bezpečné nádoby na ostré předměty. Vzorky pro sérum budou odstřeďovány po dobu 10 minut při 11 000 ot./min., poté okamžitě rozděleny na alikvoty o objemu 0,2 ml - 0,5 ml a skladovány v mrazáku při -80 °C, dokud nejsou nutné pro analýzu. Vzorky subgingiválního plaku budou odebrány z bukálního povrchu zubu studovaným zubním lékařem za použití sterilní kyrety, resp. pod okrajem dásně. Plak bude odebrán ze zubů s nejhlubším místem kapsy (bukální povrch) při každé studijní návštěvě. Tyto zuby byly vybrány tak, aby měly dobrou směs molárů a řezáků. Shromážděný plak z těchto čtyř zubů bude spojen do 1 ml sterilního 0,1x Tris-EDTA a skladován při -80ºC. Účastníkům budou poskytnuty soupravy pro domácí odběr pro odběr vzorků stolice v konzervačním roztoku ([http://www.microbiome-standards.org)] http://www.mikrobiom- standardy.org) a tento vzorek bude zaslán do místní laboratoře do 7 dnů od odběru. Po přijetí vzorků stolice do laboratoře budou vzorky uskladněny při -80 C. Všechny biologicky kontaminované jednorázové předměty budou vyhozeny do správné biologické nádoby pro zpracování a odstranění. Všechny odebrané vzorky budou zaznamenány do tištěného CRF účastníka pro tuto studijní návštěvu, přičemž bude zaznamenáno datum a čas odběru a iniciály sbírajícího studijního zubního lékaře. To bude také přihlášeno do studijní tabulky Excel. Není-li při této návštěvě možné odebrat konkrétní vzorek, důvod k tomu bude uveden v příslušné části „Doplňkové poznámky“ CRF.

Postupy analýzy vzorků

Všechny experimenty budou prováděny v laboratořích Microbiome and Salivary, Guy's Hospital. Vzorky GCF budou rozmraženy a eluovány v PBS (pH 7,2±0,2) doplněném koktejlem Easypack Protease Inhibitor Cocktail (Roche), jak je popsáno v Curtis et al. 1988. Stručně řečeno, proužky periopaperu budou umístěny do perforované 0,5ml mikrocentrifugační zkumavky, která bude držena uvnitř 1,5ml zkumavky. Na proužky se přidá eluční pufr (50 μL) a umístí se na 2 minuty do vortexové třepačky a poté se 15 minut centrifuguje při 11 000 ot./min a 4 ̊C. Centrifugace se bude opakovat s dalšími 50 μl elučního pufru přidaným na proužky, čímž se získá ~90 μl celkového eluovaného GCF. Koncentrace proteinu bude kvantifikována pomocí destičky LVis (BMG Labtech CLARIOstar) kalibrované s bovinním sérovým albuminem (Sigma). GCF analýzu pro vybrané analyty provede Luminex. Vzorky budou zpracovány v KCL Center for Host-Microbiome Interactions, fl.17 Guys Tower Wing. Vzorky plaku a stolice projdou extrakcí DNA standardními postupy v naší laboratoři a budou analyzovány pomocí sekvenování DNA nové generace k charakterizaci subgingivální mikroflóry, aby se identifikovaly a určily hladiny klíčových parodontálních bakteriálních patogenů a změny v celé mikrobiální komunitě v ošetřených místech. s testovacími i kontrolními protokoly. Krevní vzorky budou testovány na cytokiny, proteiny akutní fáze a zánětlivé markery pomocí různých technik, jako jsou Western bloty nebo enzymatické imunosorbentní testy (ELISA), které určí jejich přítomnost a množství v krvi. Gingivální crevikulární tekutina bude analyzována na zánětlivé mediátory, protilátky, peptidy a cytokiny, opět pomocí technik, jako je ELISA. Budou hodnoceny cirkulující hladiny IGF-1, hladina glukózy v krvi nalačno, hladina β-hydroxybutyrátu v krvi, aby se sledovala kompliance s FMD.

ELISA (high-sensitivity two-site enzyme-linked immunosorbent assay): detekce IL-6.

Cobas Integra 700 (automatizovaný imunoturbidimetrický vysoce citlivý test): Detekce HsCRP.

Data generovaná z těchto experimentů budou uložena na zabezpečených, heslem chráněných počítačích King's, včetně počítačů v laboratořích Sallivary a Microbiome a studijního notebooku poskytnutého společností King's.

Vzorové postupy skladování

Vzorky krve, slin, plaku a GCF budou skladovány při -80ºC v bezpečných, uzamčených mrazicích boxech HTA v laboratořích Mezinárodní univerzity v Katalánsku, Complutense University of Madrid, University of Santiago de Compostela a University of Granada. To zajistí dlouhodobou stabilitu připravenosti na zpracování vzorků. Po odběru budou vzorky stolice zaslány do každého zúčastněného centra pacienty v zapečetěných předem orazítkovaných obálkách. Po uložení bude u všech vzorků zkontrolována jejich fyzická integrita a vzorky ke zmrazení budou poté přihlášeny do zabezpečené počítačové databáze chráněné heslem, která zaznamenává jejich umístění v mrazáku a čas/datum, kdy byly uloženy. Na CRF bude také uvedena fyzická kopie zaznamenávající uložené vzorky. Skladování, přeprava, použití a konečná likvidace poskytnutého vzorku bude provedena v souladu se zákonem Spojeného království o lidských tkáních z roku 2004 a se směrnicemi EU o tkáních a buňkách. Pokud některé vzorky nebudou okamžitě zpracovány, budou pseudoanonymně uloženy pro pozdější analýzu. Vzorky budou přeneseny do slinné laboratoře, Guy's Hospital a budou archivovány po dobu 10 let po dokončení. Po vypršení etického schválení studie budou vzorky krve, slin a GCF zlikvidovány v souladu se zákonem o lidských tkáních z roku 2004 a všemi jeho dodatky nebo převedeny do tkáňové banky.

Přeprava vzorku ze Španělska do Velké Británie

Vzorky budou umístěny do iglú, které může obsahovat dostatečné množství ledu/suchého ledu, aby bylo zajištěno, že vzorky budou udržovány při správné teplotě po dobu delší, než je odhadovaná doba cesty. Poté se polystyrenové iglú částečně naplní ledem/suchým ledem, čímž se získá prostor pro vzorky a další led. Vzorky mohou být umístěny v uzavřeném plastovém sáčku pro usnadnění katalogizace. Iglú se poté naplní suchým ledem, aby pokryl vzorky a expediční formulář, a navíc je přiložena kopie adresního štítku v uzavřeném plastovém sáčku na vzorky. Na iglú bude umístěno víko a zajištěno balicí páskou. Poté je iglú zabaleno do silného hnědého balicího papíru a před dodáním je připevněn jak adresní štítek, tak štítky s nebezpečím velmi nízké teploty. Bude vybrán nejrychlejší způsob dopravy (např. letadlo), aby byla přeprava dokončena co nejrychleji.

Hodnocení bezpečnosti

Vyšetřovatelé nepředpokládají žádná významná rizika pro účastníka podílejícího se na odběru vzorků, včetně vzorků krve, protože se jedná o dobře zavedené postupy. Na základě předchozí literatury se možné riziko může týkat některých mírných/středně středních systémových nežádoucích účinků způsobených dietou slintavky a kulhavky, včetně únavy, slabosti a bolestí hlavy. Existuje také mírné riziko mdloby během odběru krve nebo po něm. Aby se toto riziko snížilo, účastníci budou po celou dobu trvání odběru vzorků a pět minut po odběru vzorků na polosklopeném podstavci. Po celou dobu bude s účastníkem přítomen výzkumník, aby bylo zajištěno, že v případě mdloby nedojde k pádu nebo zranění. Dojde-li během odběru vzorku krve k poranění zkoušejícího píchnutím jehly nebo dojde k poranění poškrábáním, zavedou se místní postupy pro reakci na takový incident. Neočekává se, že v průběhu studie nastanou žádné závažné nežádoucí účinky.

Etické hlášení

Nežádoucí příhoda je jakékoli nepříznivé a nezamýšlené příznaky, symptomy nebo onemocnění spojené se studií. Pokud dojde k nežádoucí příhodě, jako je mdloba během odběru krve, zkoušející o tom informuje hlavního zkoušejícího, aby byl zařazen do souboru studie CRF. Závažná nepříznivá událost (SAE) je událost, která způsobí smrt, vyžaduje hospitalizaci účastníka, způsobí trvalé postižení nebo způsobí vrozenou vadu. Pokud k tomu dojde, bude protokol zaprotokolován do 24 hodin od zjištění události a zpráva etické komisi do 15 dnů od zjištění události. Formulář by měl být vyplněn strojopisem a podepsán hlavním vyšetřovatelem. Hlavní REC potvrdí přijetí bezpečnostních zpráv do 30 dnů.

Dodržování a odstoupení od smlouvy

Soulad předmětu

Shoda účastníků bude hodnocena při každé studijní návštěvě. Vlastní lékařská anamnéza zajistí, že účastník neprovedl žádnou akci (např. nezačal se účastnit jiného klinického hodnocení) nebo se u něj nevyvinul stav nebo nezačal užívat léky (např. užívání systémových antibiotik), což je zakázáno kritérii vyloučení. Kromě toho bude kompliance hodnocena na základě krevního testu s přihlédnutím ke snížení cirkulujících hladin IGF-1. To bude zaznamenáno do kontrolního seznamu v CRF. Každý pacient by měl během studie vyplnit dietní deník včetně cyklů FMD pro testované pacienty. Nevyplnění dietního deníku by také bylo zaznamenáno jako předčasné ukončení, a to kvůli zásadní důležitosti stravy pro validitu studie. A konečně, pokud se účastník neočekávaně nezúčastní studijní návštěvy, bude požádán, aby navštívil kliniku při nejbližší možné příležitosti.

Odstoupení / odpadnutí předmětů

Účastníci mohou ze studie kdykoli odstoupit. Stalo by se to prostřednictvím ústní diskuse mezi účastníkem a kterýmkoli ze studijního týmu a jejich rozhodnutí by bylo zaznamenáno do písemného formuláře Odstoupení od smlouvy. Důvody pro odstoupení od smlouvy mohou být například fyzické nepohodlí nebo příliš velké časové vytížení. Po dokončení analýzy dat, kdy by byla shromážděna všechna anonymizovaná data, by účastníci již nemohli stáhnout svá data ze studie, což by bylo jasné ve fázi počátečního náboru. Nejzazší termín je na konci studie. Určité okolnosti mohou vyžadovat, aby se studijní tým rozhodl odvolat účastníky ze studie, jako je významné nedodržení protokolu, např. vynechání několika studijních návštěv nebo jiné události, které by splnily kritéria vyloučení. To by zahrnovalo hovořit s účastníkem, informovat a vysvětlit mu rozhodnutí, a rozhodnutí by bylo zaznamenáno do písemného formuláře o odstoupení od smlouvy. Pokud se při studijní návštěvě odhalí nesoulad, bude také zaznamenán v části „Dodatečné poznámky“ CRF. Subjekty nebudou nahrazeny, když jednotlivci odstoupí.

Statistické úvahy

Výpočet velikosti vzorku

Nebyly publikovány žádné studie s použitím FMD u pacientů s parodontitidou. V literatuře proto nejsou k dispozici žádné údaje o proveditelnosti a požadované velikosti vzorku. je velmi obtížné odhadnout, jaká by byla správná velikost vzorku studie, a v důsledku toho je tato studie koncipována jako interní pilotní. Zatímco Browne a spolupracovníci (1995) navrhli, aby bylo jako orientační pravidlo pro velikost vzorku vyžadováno 30 pacientů, Kieser & Wassmer (1996) zjistili, že velikost pilotního vzorku mezi 20 a 40 by minimalizovala celkovou velikost vzorku větší studie. Na základě návrhu z Julious 2009 bude pro tuto studii přijato 12 pacientů z každé větve studie.

Průběžná analýza a kritéria proveditelnosti/postupu

Rozhodnutí pokračovat ve větší studii (a relativní velikost vzorku) bude záviset na níže uvedených kritériích proveditelnosti/progrese.

ASPEKTY PROVEDITELNOSTI KRITÉRIA PROgrese, KTERÁ MUSÍ BÝT SPLNĚNA

Ochota být randomizována ≥ 50 % oslovených pacientů souhlasí Shoda s dietou sama hlášená ≥ 66 % pacientů v testované skupině sama uvádí shodu (definovaná jako ne více než 1 den, kdy nebyla dieta dodržována) Testovaná shoda s dietou ≥ 66 % pacientů v testované skupině vykazuje shodu na základě krevního testu (definováno jako 20 až 30% snížení cirkulujících hladin IGF-1) (Wei 2017) Přijetí vzorků krve ≥ 66 % přijatých pacientů má všechny krevní vzorky odebrány podle protokolu Absence závažných nežádoucích účinků Žádný pacient neuvádí závažné nežádoucí účinky, které by mohly souviset s testovanou dietou

Jsou-li splněna všechna výše uvedená kritéria, bude provedena analýza existujících údajů až za 3 měsíce s použitím údajů od 24 pacientů „interního pilotního projektu“. Pro výpočet požadované velikosti vzorku pro větší studii se použijí střední hodnoty a standardní odchylky hodnot CRP po 3 měsících. Sledování pacientů ve studii bude pokračovat až 6 měsíců po léčbě. Pokud by byl rozdíl mezi skupinami pro primární výsledek (CRP za 3 měsíce) minimální a výsledkem by byl velmi velký vzorek, může být učiněno rozhodnutí nepostoupit k náboru větší skupiny pacientů a nábor bude zastaven. Pacienti, kteří jsou stále ve studii, však budou sledováni až do posledního sledování studie (180 dní).

Statistická analýza

Primárním výsledkem studie jsou hladiny cirkulujícího CRP 3 měsíce po léčbě (test vs. kontrola). Před zvážením, zda pokračovat s plně funkční velikostí vzorku studie, však bude muset být nejprve dokončena část interní pilotní/proveditelnosti. Pokud jsou splněna kritéria proveditelnosti, rozdíl v hladinách CRP 3 měsíce po léčbě mezi skupinami bude použit k velikosti vzorku a bude formulován formální statistický plán. Pro různé účely budou použity různé statistické balíčky, Stata 14 (StataCorp LLC, College Station, Texas, USA) bude hlavním balíčkem a R (s pluginem R-Studio), bude použit pro dodatečné analýzy, oba se specifickými rutinami. vytvořené pro tuto studii. Shapiro-Wilkův test bude použit k ověření, zda analyzované kvantitativní proměnné sledují normální rozdělení a logaritmická transformace bude provedena u těch, které se neřídí. Bude popsán profil populace a studovaných skupin. Výsledky kvalitativních proměnných budou vyjádřeny v proporcích a kvantitativní proměnné budou vyjádřeny jako průměr a směrodatná odchylka, včetně 95% intervalů spolehlivosti. Bude také získáno rozložení populace pro každý z klinických, biochemických a mikrobiologických parametrů. Pro bivariační analýzu bude použit chí-kvadrát test ke zjištění, zda existuje statisticky významná asociace mezi dvěma kvalitativními proměnnými, data budou prezentována jako kontingenční tabulky, pokud Chi-kvadrát test nesplňuje podmínky platnosti Fisherův exaktní test bude uplatněno.

Pro porovnání průměrů dvou nezávislých proměnných pro meziskupinové analýzy bude použit Studentův T-test, uvažující Studentův T-test pro párové vzorky v rámci skupinových analýz. Pokud nejsou splněny normální předpoklady, použije se bez parametrického testu "Mann-Whitney U". Pro vnitroskupinové analýzy se použije ANOVA pro opakovaná měření nebo Friedmanův test. Vícerozměrná analýza bude provedena pomocí vícenásobného lineárního regresního modelu a ordinální logistické regrese zavádějící do něj nezávislé proměnné s nižší hladinou významnosti 0,20. Podmínky budou ověřeny reziduální analýzou heteroskedasticity a linearity. Hladina statistické významnosti pro tuto studii bude p<0,05.

Pravidla zastavení / přerušení a porušení randomizačního kódu

Vyšetřovatelé nepředpokládají žádná rizika spojená s odběrem vzorků a slintavkou a kulhavkou, protože se jedná o dobře zavedené postupy. Zkoušející proto předpokládají, že by žádná část studie neměla být přerušena a studie by neměla být zastavena kvůli obavám o bezpečnost účastníků. Protože však slintavka a kulhavka nebyla testována u pacientů s parodontitidou, v nepravděpodobném případě, že dojde k závažné nežádoucí příhodě, bude hlášení sponzorovi zaznamenáno do 24 hodin od zjištění příhody a hlášení etické komisi do 15 dnů. poučení o události. Poté bude rozhodnuto, zda by se studie měla zastavit ve spojení s těmito orgány.