Paastoa jäljittelevä ruokavalio ja parodontiitti (FMD) (FMD)

Johdanto

Parodontiitti on mikrobien aiheuttama periodontiumin tulehduksellinen sairaus. On osoitettu, että parodontiittiin liittyvä tulehdus ei rajoitu parodontiumiin, vaan sillä voi olla kauaskantoisia seurauksia muuhun kehoon ja että tämä voi osittain johtua suun mikro-organismien systeemisestä leviämisestä. Parodontaalihoidon vaiheet 1 ja 2 liittyvät myös lyhytaikaiseen akuutin vaiheen tulehdusvasteeseen, jolle on tunnusomaista verenkierrossa olevien akuutin vaiheen tulehdusmarkkerien kohoaminen, jota vuorostaan ​​seuraa, mikäli se onnistuu, näiden molekyylien pitempiaikainen väheneminen. Keskipitkällä ja pitkällä aikavälillä tähän liittyy muutoksia muissa perifeeristen verisuonten terveyden merkkiaineissa sekä aineenvaihdunnan hallinnan parantuminen, joka kestää vähintään 12 kuukautta. Parodontiittilla tiedetään olevan kaksisuuntainen suhde aineenvaihduntahäiriöihin ja säätelyhäiriöihin. Hiljattain tehty tutkimus vahvisti, että parodontiitti liittyy systeemiseen tulehdukseen seerumin C-reaktiivisen proteiinin (CRP) tasoilla mitattuna. Lisäksi on raportoitu, että intensiivinen ei-kirurginen parodontiittihoito (vaiheet 1 ja 2) johti CRP:n asteittaiseen laskuun 90 päivän jälkeen ja kohtalaiseen nousuun 180 päivän kohdalla. Uskotaan, että aineenvaihdunnan hallinnan parannukset voivat myös parantaa parodontiitin tuloksia, mutta tämän tarkat mekanismit eivät ole täysin selviä. Ravinnon mahdollisista vaikutuksista parodontiitin hoitoon on myös julkaistu useita ihmis- ja kokeellisia tutkimuksia. Apinoilla tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että pitkäaikainen ruokavalion kalorirajoitus (vitamiinien ja kivennäisaineiden rikastettu ruokavalio) vaimentaa kliinistä tulehdusta ja vähentää akuutin mikrobialtistuksen aiheuttamaa periodontaalisen hajoamisen astetta. Toisessa apinoilla tehdyssä kokeellisessa tutkimuksessa pitkäaikainen vähäkalorinen ruokavalio (30 % vähemmän päivittäistä kalorien saantia sekä vitamiineja ja kivennäisaineita) näytti kuitenkin vähentävän paikallisten tulehdusvälittäjien tuotantoa ja tulehduksellisten parodontaalisairauksien riskiä miehillä mutta ei naisilla. Lisäksi äskettäin tehdyssä systemaattisessa eläinmalleissa tehdyssä katsauksessa pääteltiin, että makroravinteet, joilla on vaikutusta oksidatiiviseen stressiin tai immuunijärjestelmään (eli n-3-rasvahappo), näyttävät olevan tärkeitä parodontiitin ehkäisyssä tai hoidossa. Mitä tulee ihmistutkimukseen, korealainen ryhmä havaitsi neljä viikkoa kestäneen painonhallintatoimenpiteen jälkeen periodontaalisesti terveillä lihavilla ihmisillä matriisin metalloproteinaasin (MMP)-8:n, MMP-9:n ja interleukiini-1β:n (IL-1β) vähenemisen ienpoistoneste (GCF). Saksalainen tutkimusryhmä raportoi, että ruokavalio, joka koostuu vähäisestä hiilihydraattien saannista, omega-3-rasvahappojen ja kuidun runsaudesta, korkeammista C- ja D-vitamiiniarvoista, eläinproteiinien vähentämisestä ja keskittyneestä nitraattia sisältävien kasvien saannista saattaa vähentää merkittävästi parodontaali- ja ientulehdus, vaikka serologiset tulehdusparametrit ja subgingivaalinen mikrobiomi eivät näytä muuttuvan. Äskettäin tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että länsimaisten ruokavaliomallien (joille on ominaista lihajalostetun lihan, punaisen lihan, voin, runsasrasvaisten maitotuotteiden, kananmunien ja jalostettujen viljojen suurempi saanti) tai varovaisten ruokavaliomallien välillä (joille on ominaista vihannesten, hedelmien, palkokasvien, täysjyväviljojen, kalan ja siipikarjan suurempi saanti) ja parodontiitti; Kuitenkin, kun tarkasteltiin vain lihavia henkilöitä, länsimainen ruokavalio liittyi suurempaan parodontiittiriskiin. Toinen aivan tuore tutkimus, joka perustui ruokavalion tulehdusindeksiin, osoitti, että tulehdusta edistävän ruokavalion nauttiminen liittyi keskivaikeaan tai vaikeaan parodontiittiin Yhdysvaltain aikuisväestössä. Uusi paastotapa on otettu käyttöön potilaan myöntymisen lisäämiseksi, koska ihmiset eivät yleensä pysty noudattamaan tiukkaa ruokavaliota pitkään aikaan. Erityisesti paastoa jäljittelevä ruokavalio (FMD), joka koostuu 30–50 prosentista normaalista kalorien saannista 4–7 peräkkäisenä päivänä, jota seurasi ad libitum -ruokintajakso kerran kuukaudessa, osoitti erittäin lupaavia hyödyllisiä vaikutuksia riskin pienentämisen kannalta. ikääntymisen, diabeteksen, autoimmuniteetin, sydän- ja verisuonitautien, hermoston rappeutumisen ja syövän tekijät. Kaiken kaikkiaan on edelleen epävarmuutta säännöllisen paaston mahdollisesta roolista parodontaalin kliinisissä ja tulehdusparametreissa. Tietojemme mukaan missään tutkimuksessa ei ole tutkittu suu- ja sorkkataudin mahdollista vaikutusta systeemiseen ja parodontaalivasteeseen parodontiittihoidon jälkeen.

Tavoitteet

Tämän tutkimuksen päätavoitteena on testata, voiko paastoa jäljittelevä ruokavalio vaikuttaa systeemiseen ja parodontaalivasteeseen ei-kirurgisen parodontaalihoidon jälkeen. Nollahypoteesi on, että paastoa jäljittelevä ruokavalio ei muuta paikallista ja systeemistä tulehduksellista vastetta hoidon jälkeen.

Opintojen suunnittelu

Tämä on kaksoissokkoutettu (tuloksen arvioija ja tilastotieteilijä), monikeskusinen, satunnaistettu kliininen tutkimus rinnakkaisilla ryhmillä ja 1:1 jakoannoksella, sisäisellä pilotilla. Kaikki värvätyt potilaat saavat saman protokollan parodontaalihoitoa varten (vaiheet 1 ja 2). Yhdelle ryhmälle (testille) suoritetaan kolme suu- ja sorkkatautisykliä. Suu- ja sorkkatautiohjelma on kasvipohjainen ruokavalio-ohjelma, joka on suunniteltu saavuttamaan paaston kaltaisia ​​vaikutuksia samalla kun se tarjoaa sekä makro- että mikroravinteita paaston ja haittavaikutusten minimoimiseksi. Suu- ja sorkkatauti koostuu 100 % ainesosista, joita pidetään yleisesti turvallisina (GRAS), ja se sisältää kasvipohjaisia ​​keittoja, energiapatukoita, energiajuomia, keksejä, oliiveja, yrttiteetä ja lisäravinteita. Kaikki päivässä syötävät tuotteet on pakattu yksitellen, jotta koehenkilöt voivat valita, milloin syövät, välttäen samalla seuraavan päivän osien vahingossa syömistä. Suu- ja sorkkatauti koostuu 5 päivän hoito-ohjelmasta, joka tarjoaa noin 1 100 kilokaloria ensimmäisenä päivänä; noin 750 kilokaloria päivässä toisesta viidenteen päivään. Päinvastoin, toinen ryhmä (kontrolli) jatkaa normaalilla ruokavaliollaan.

Aiheen valinta

Tämä on monikeskustutkimus. Katalonian kansainvälinen yliopisto (UIC), Complutense University of Madrid (UCM), Santiago de Compostelan yliopisto, Murcian yliopisto ja Granadan yliopiston kliininen henkilökunta/opiskelijat seulovat osallistujat kyseisissä sairaaloissa käyvien parodontiittipotilaiden joukossa. Tutkijat odottavat 24 osallistujaa vuodessa ja olettavat, että 70 prosenttia heistä suostuu osallistumaan tutkimukseen, kun he ovat ilmaisseet kiinnostuksensa.

Opiskelumenettelyt

Aiheen rekrytointi

Katalonian kansainvälisen yliopiston, Complutensen yliopiston, Santiago de Compostelan ja Granadan yliopistojen potilaita lähestytään yksilöllisesti rekrytointia varten kampuksella ja hammaslääketieteellisessä tiedekunnassa. Alkuperäisen kiinnostuksen ilmaisun jälkeen mahdolliset osallistujat saavat tietolomakkeen ja mahdollisuuden esittää kysymyksiä tutkimusryhmän jäsenille sähköpostitse tai puhelimitse. Jos he sitten ilmaisevat haluavansa osallistua, heidät kutsutaan seulontakäynnille. Jokaiselle henkilölle annetaan vähintään 24 tuntia ja enintään viikko aikaa päättää, haluavatko he osallistua. Henkilöille korvataan heidän aikansa suorittamalla maksu tutkimuksen päätyttyä.

Seulontamenettelyt

Seulontakäynnillä koulutettu hakija tai opintohammaslääkäri pyytää suostumuksen, joka kirjataan osallistujan kirjalliseen suostumuslomakkeeseen, jossa on yksityiskohtaiset tiedot täydellisestä koemenettelystä ja sopimusten tarkistuslista jokaisesta tiedonkeruumenetelmästä. Kun suostumus on annettu, jokainen ilmoittautunut osallistuja kirjataan osallistujalokilomakkeelle. Alkutarkastuksella varmistetaan, että jokainen yksilö noudattaa hahmoteltuja sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerejä. Tämä arvioidaan ottamalla suullinen historia ja kirjataan paperiversiolle seulontalokilomakkeelle. Osallistujien on käyvä periodontaalisessa tutkimuksessa opiskeluhammaslääkäriltä sopivuuden varmistamiseksi.

Satunnaistusmenettelyt ja allokoinnin piilottaminen

Ensimmäinen keskitetty satunnaistaminen tehdään "Sinetöity kirjekuori" -menetelmällä Guyn sairaalan henkilöstön toimesta, joka ei ole suoraan mukana tutkimuksessa. Tärkeille vaikuttaville tekijöille ("keskus") suoritetaan ositettu satunnaistaminen suosituksen mukaisesti. Ikäkohtaista kerrostumista ei tehdä, koska pienten otoskokojen kohdalla ositus tulisi rajoittaa yhteen tai hyvin harvoihin tekijöihin ja koska iän vaikutusta rajoittaa tutkimussuunnitelma ja sitä mukautetaan tilastollisissa analyyseissä. Jokaisen keskuksen potilaat jaetaan toiseen kahdesta hoitoryhmästä käyttämällä tutkimustilastomiehen aiemmin laatimaa satunnaisluetteloa. Luettelo luodaan estetty satunnaistaminen. Jokaisessa keskuksessa käytetään sinetöityä kirjekuorta allokoinnin piilottamisen varmistamiseksi. Osallistuja määrätään testi- tai kontrollihoitoon päivien -7/-10 ja 0 välisenä aikana. Hoidon jakamisesta tiedotetaan terapeutille avaamalla kirjekuori hoitoajan alussa.

Aikataulu jokaiselle vierailulle

Osallistujat, jotka ovat ilmaisseet kiinnostuksensa osallistua kasvokkain käydyistä keskusteluista tai vastauksista mainoksiin, kutsutaan seulontavierailulle. Tämä tapahtuu, kuten kaikki opintovierailut, Hospital General de Catalunyassa (Barcelona) ja Odontostomatologian yksiköissä (Clinica de Odontologia) Madridissa, Santiago de Compostelassa, Murciassa ja Granadassa, ja tämän pitäisi kestää noin 45 minuuttia. Tämä tapahtuu molemmille osapuolille sopivana ajankohtana ja päivämääränä mahdolliselle osallistujalle ja tutkimushammaslääkärille kliinisen tilan saatavuuden rajoissa. Täällä heiltä kysytään aluksi heidän henkilötietojaan / sairaushistoriaansa ja he käyvät hammastarkastuksessa. Mikäli he ovat kelvollisia, heille ilmoitetaan tutkimuksen seuraavan vaiheen alkamisesta ja sovitaan tapaaminen tutkimuksen aloittamiseksi. Hoidosta vastaavat kunkin keskuksen parodontologian maisterin jatko-opiskelijat.

Viikkoa-kaksi myöhemmin päivänä -7/-10 (perusaika tai käynti 1) annetaan ja allekirjoitetaan tietoinen suostumus. Veri-, GCF-, plakki- ja ulostenäytteet kerätään. Sairaushistoria, haittatapahtumat ja samanaikaiset lääkkeet tarkastetaan ja suun tutkimus, jossa kirjataan hampaiden lukumäärä ja 6 kohtaa per hampaan mittaussyvyys, taantuma (mm) ja verenvuoto mittauksen jälkeen. Tarjolla on hyvin pinnallinen ennaltaehkäisy, motivaatio ja suuhygieniaohjeet.

Päivänä 0 (aamu) (käynti 2) testiryhmään määrätyt potilaat aloittavat suu- ja sorkkataudin 5 peräkkäisenä päivänä. Kaikille potilaille tehdään full-mouth subgingival instrumentation (PMPR) -toimenpiteet ja tarkempaa hygieniaohjeistusta tehostetaan. Sairaushistoria, haittatapahtumat ja samanaikaiset lääkkeet tarkistetaan ja suun tutkimus tehdään komplikaatioiden seulomiseksi. Koulutettu rekisteröity ravitsemusterapeutti (yhdestä keskuksista) keskustelee suu- ja sorkkataudista potilaiden kanssa ja jakaa myös kyselyn raportoidakseen syömättä jääneistä kohteista ja ylimääräisestä kulutetusta ruoasta.

Päivänä 1 (v3) otetaan veri- ja GCF-näytteet. Sairaushistoria, haittatapahtumat ja samanaikaiset lääkkeet tarkistetaan, suun tutkimus tehdään komplikaatioiden seulomiseksi.

Päivänä 7 (v4) otetaan veri- ja GCF-näytteet. Sairaushistoria, haittatapahtumat ja samanaikaiset lääkkeet tarkistetaan, suun tutkimus tehdään komplikaatioiden seulomiseksi.

Päivänä 45±5 (v5) otetaan veri- ja GCF-näytteet. Suuhygieniaohjeita vahvistetaan ja järjestetään supragingivaalinen hilseily ja kiillotus. Suu- ja sorkkataudin toinen sykli aloitetaan testiryhmän potilailla. Sairaushistoria, haittatapahtumat ja samanaikaiset lääkkeet tarkistetaan, suun tutkimus tehdään komplikaatioiden seulomiseksi.

Päivänä 85 ±5 (v6) aloitetaan kolmas suu- ja sorkkataudin sykli testiryhmän potilailla. Sairaushistoria, haittatapahtumat ja samanaikaiset lääkkeet tarkistetaan, suun hygieniaohjeita vahvistetaan ja järjestetään supragingivaalinen hilseily ja kiillotus.

Päivänä 90 ±5 (v7) koko suun parodontaalimittaukset tallennetaan. Otetaan verinäytteitä ja GCF-näytteet. Suuhygieniaohjeita vahvistetaan ja tarvittaessa järjestetään tuki parodontaalihoitoon. Sairaushistoria, haittatapahtumat ja samanaikaiset lääkkeet tarkistetaan, suun tutkimus tehdään komplikaatioiden seulomiseksi.

Päivänä 180 ±10 (v8) koko suun parodontaalikartoitusmittaukset tallennetaan 6 kohdasta hammasta kohti: mittaussyvyys, taantuma (mm) ja verenvuoto koettamisen jälkeen. Otetaan veri-, GCF-, plakki- ja ulostenäytteet. Suuhygieniaohjeita tehostetaan. Sairaushistoria, haittatapahtumat ja samanaikaiset lääkkeet tarkistetaan, suun tutkimus tehdään komplikaatioiden seulomiseksi.

*Potilaita kutsutaan yksi tai kaksi kertaa jokaisen suu- ja sorkkatautijakson aikana tarkistaakseen, että kaikki etenee oikein, ja ratkaistakseen mahdolliset ongelmat tai huolenaiheet.

Seurantamenettelyt

Jos osallistuja jättää väliin useita (2/3) käyntejä, sitä voidaan pitää keskeyttäjänä. Ne kuitenkin sisällytetään käsittelyaikomusanalyysiin.

Opintojen lopun määritelmä

Tutkimus valmistuu, kun kaikki osallistujat ovat saaneet päätökseen kliinisen jakson kaikki vaiheet ja biologisen materiaalin ja kliinisten tulosten käsittely/analyysi on suoritettu.

Näytteenotto/merkintä/lokikirjaus

Näytteet keräävät potilaalta tutkimuskäynnin aikana Katalonian kansainvälisen yliopiston, Madridin Complutensen yliopiston, Santiago de Compostelan yliopiston, Murcian yliopiston ja Granadan yliopiston pätevät hammaslääkärit, jotka osallistuvat tähän tutkimukseen. Kaikentyyppisten näytteiden keräämisen aikana noudatetaan asianmukaista käsihygieniaa, istuvia käsineitä ja steriilejä kertakäyttöisiä tutkimusvälineitä kerättyjen näytteiden eheyden sekä tutkijan ja osallistujan turvallisuuden varmistamiseksi. Pseudoanonymisoidut leimatut putket valmistetaan ennen jokaista käyntiä, ja etiketti koostuu osallistujanumerosta, johon on liitetty näytetyyppimerkintä esim. G GCF:lle, B verelle, S syljelle, SubP ienalaiselle plakille jne. Näytteet kerätään jokaisella käynnillä ennen kliinistä tutkimusta, jotta fyysinen manipulointi ei häiritse näytteenottopaikkaa tai aiheuta lievää ienvaurioita verenvuoto, joka voi saastuttaa kerättävän näytteen. GCF Periopaper® Strips (Pro-flow Inc., Amityville, New York, USA) sijoitetaan hampaiden ienrakoon kussakin kvadrantissa syvimmällä taskukohdalla (bukkaaliset näkökohdat). Sitten ne mitataan välittömästi kalibroidulla Periotron 8000 (Pro-Flow Inc., Amityville, New York, USA) elektronisella muuntimella, joka kvantifioi kerätyn GCF:n määrän. Kun GCF-liuskat on mitattu tätä käyntiä varten, ne säilytetään -80 ºC:ssa yhdessä 2 ml:n putkessa ja yhdistetään jatkoanalyysiä varten. 4 ml laskimoverta kerätään osallistujan käsivarresta Hemogardin turvasuljettuihin, steriileihin tyhjiintymiin, jotka sisältävät EDTA:n (etyleenidiamiinitetraetikkahappo) antikoagulanttia K2-kaliumsuolaa, joka on suihkutettu putken sisäpinnalle. Kokeneet ja koulutetut flebotomistit ottavat näytteet. Tämän pyörtymisriskin vähentämiseksi osallistujat ovat puoliksi kallistetulla sokkelilla koko näytteenoton ajan ja viisi minuuttia näytteenoton jälkeen. Tutkija on koko ajan läsnä osallistujan kanssa varmistaakseen, että pyörtyessä ei putoa tai vammoja. Käytetyt neulat hävitetään turvalliseen terävien esineiden roskakoriin. Seeruminäytteitä sentrifugoidaan 10 minuuttia nopeudella 11 000 rpm, sitten jaetaan välittömästi 0,2–0,5 ml:n eriin ja säilytetään pakastimessa -80 °C:ssa, kunnes niitä tarvitaan analyysiin. Tutkimushammaslääkäri ottaa ienalaiset plakkinäytteet hampaan poskipinnalta steriiliä kyrettiä käyttäen vastaavasti ienreunan alapuolelta. Plakki kerätään jokaisella tutkimuskäynnillä hampaista, joissa on syvin taskukohta (bukkaalin pinta). Nämä hampaat valittiin siten, että niissä on hyvä sekoitus poskihampaat ja etuhampaat. Näistä neljästä hampaasta kerätty plakki yhdistetään 1 ml:aan steriiliä 0,1 x Tris-EDTA:ta ja säilytetään -80 ºC:ssa. Osallistujille toimitetaan kotikeräyssarjat säilöntäliuoksessa olevien ulosteiden näytteenottoa varten ([http://www.microbiome-standards.org)] http://www.mikrobiomi- standards.org) ja tämä näyte lähetetään paikalliseen laboratorioon 7 päivän kuluessa keräämisestä. Kun ulostenäytteet vastaanotetaan laboratorioon, näytteet säilytetään -80 C:ssa. Kaikki biologisesti saastuneet kertakäyttötavarat heitetään oikeaan biologisten vaarojen säiliöön käsittelyä ja poistoa varten. Kaikki otetut näytteet kirjataan osallistujan paperiversioon CRF:lle kyseistä opintokäyntiä varten, ja keräyspäivämäärä ja -aika kirjataan sekä keräävän tutkimushammaslääkärin nimikirjaimet. Tämä kirjataan myös tutkimuksen Excel-taulukkoon. Jos tiettyä näytettä ei voida ottaa kyseisellä käynnillä, syy tähän mainitaan CRF:n asianmukaisessa "Lisähuomautuksia"-osiossa.

Näytteiden analyysimenettelyt

Kaikki kokeet suoritetaan Guy's Hospitalin Microbiome- ja Salivary-laboratorioissa. GCF-näytteet sulatetaan ja eluoidaan PBS:ssä (pH 7,2 ± 0,2), jota on täydennetty Easypack Protease Inhibitor Cocktaililla (Roche), kuten on kuvattu julkaisussa Curtis et ai. 1988. Lyhyesti sanottuna periopaperiliuskat asetetaan rei'itettyyn 0,5 ml:n mikrosentrifugiputkeen, jota pidetään 1,5 ml:n putken sisällä. Eluutiopuskuri (50 µl) lisätään liuskoille ja asetetaan vortex-ravistimeen 2 minuutiksi ennen sentrifugointia 15 minuuttia nopeudella 11 000 rpm ja 4 ̊C. Sentrifugointi toistetaan lisäämällä vielä 50 µl eluointipuskuria liuskoille, jolloin saadaan ~90 µl eluoitunutta GCF:ää. Proteiinipitoisuus määritetään käyttämällä LVis-levyä (BMG Labtech CLARIOstar), joka on kalibroitu naudan seerumialbumiinilla (Sigma). Luminex suorittaa valituille analyyteille GCF-analyysin. Näytteet käsitellään KCL Center for Host-Microbiome Interactions, fl.17 Guys Tower Wing. Plakki- ja ulostenäytteistä tehdään DNA-uutto laboratoriomme standardimenetelmien mukaisesti, ja ne analysoidaan seuraavan sukupolven DNA-sekvensoinnilla subgingivaalisen mikrobiston karakterisoimiseksi, jotta voidaan tunnistaa ja määrittää tärkeimpien parodontaalibakteeripatogeenien tasot ja mikrobiyhteisön laajuiset muutokset hoidetuissa paikoissa. sekä testi- että ohjausprotokollien kanssa. Verinäytteistä testataan sytokiinit, akuutin vaiheen proteiinit ja tulehdusmerkkiaineet käyttämällä erilaisia ​​tekniikoita, kuten Western blot -testiä tai entsyymi-immunosorbenttimäärityksiä (ELISA), jotka määrittävät näiden esiintymisen ja määrän veressä. Gingival Crevicular Fluidista analysoidaan tulehdusvälittäjät, vasta-aineet, peptidit ja sytokiinit, jälleen käyttämällä tekniikoita, kuten ELISA. Veren IGF-1:n tasot, paastoveren glukoositaso ja veren β-hydroksibutyraattitaso arvioidaan suu- ja sorkkataudin noudattamisen valvomiseksi.

ELISA (korkean herkkyyden kahden paikan entsyymiin linkitetty immunosorbenttimääritys): IL-6:n havaitseminen.

Cobas Integra 700 (automaattinen immunoturbidimetrinen korkean herkkyyden määritys): HsCRP-tunnistus.

Näistä kokeista saadut tiedot tallennetaan suojattuihin, salasanalla suojattuihin Kingin tietokoneisiin, mukaan lukien Salivar- ja Microbiome-laboratorioiden tietokoneet ja King'sin toimittama tutkimustietokone.

Esimerkki säilytysmenettelyistä

Veri-, sylki-, plakki- ja GCF-näytteet säilytetään -80 ºC:ssa turvallisissa, lukituissa HTA-pakastimissa Catalunyan kansainvälisen yliopiston, Madridin Complutensen yliopiston, Santiago de Compostelan yliopiston ja Granadan yliopiston laboratorioissa. Tämä varmistaa pitkän aikavälin vakauden valmiudessa näytteen käsittelyyn. Keräyksen jälkeen potilaat lähettävät ulostenäytteet jokaiseen osallistuvaan keskukseen suljetuissa esileimatuissa kirjekuorissa. Kun niitä säilytetään, kaikkien näytteiden fyysinen eheys tarkistetaan ja pakastettavat näytteet kirjataan sitten salasanalla suojattuun, suojattuun tietokonetietokantaan, joka tallentaa niiden sijainnin pakastimessa ja säilytysajan/päivämäärän. CRF:ssä on myös fyysinen paperikopio, joka tallentaa tallennettavat näytteet. Toimitetun näytteen varastointi, kuljetus, käyttö ja lopullinen hävittäminen tapahtuu Yhdistyneen kuningaskunnan vuoden 2004 ihmiskudoslain ja EU:n kudos- ja soludirektiivien mukaisesti. Jos näytteitä ei käsitellä välittömästi, ne tallennetaan pseudo-anonyymisti myöhempää analysointia varten. Näytteet siirretään Salivaryn laboratorioon, Guy's Hospitaliin, ja niitä säilytetään 10 vuoden ajan valmistumisen jälkeen. Kun tutkimuksen eettinen hyväksyntä on umpeutunut, veri-, sylki- ja GCF-näytteet hävitetään Human Tissue Act 2004 -lain ja siihen tehtyjen muutosten mukaisesti tai siirretään kudospankkiin.

Näytteen toimitus Espanjasta Isoon-Britanniaan

Näytteet sijoitetaan igluun, jossa on riittävästi jäätä/kuivajäätä, jotta näytteet säilyvät oikeassa lämpötilassa arvioitua matka-aikaa pidempään. Sitten polystyreeni-iglu täytetään osittain jäällä/kuivajäällä, jolloin jää tilaa näytteille ja ylimääräiselle jäälle. Näytteet voidaan laittaa suljettuun muovipussiin luetteloinnin helpottamiseksi. Iglu täytetään sitten kuivajäällä näytteen ja lähetyslomakkeen peittämiseksi, ja lisäksi mukana tulee kopio osoitetarrasta suljetussa muovisessa näytepussissa. Iglulle laitetaan kansi ja kiinnitetään pakkausteipillä. Tämän jälkeen iglu kääritään vahvaan ruskeaan käärepaperiin ja sekä osoitetarra että erittäin alhaisen lämpötilan vaaratarrat kiinnitetään ennen toimitusta. Se valitaan nopeimmaksi kuljetusvälineeksi (esim. lentokone), jotta lähetys saadaan valmiiksi mahdollisimman nopeasti.

Turvallisuuden arviointi

Tutkijat eivät ennakoi merkittäviä riskejä näytteenottoon, mukaan lukien verinäytteeseen, osallistuvalle osallistujalle, koska nämä ovat vakiintuneita menettelyjä. Aiemman kirjallisuuden perusteella mahdollinen riski saattaa koskea joitain lieviä/kohtalaisia ​​systeemisiä haittavaikutuksia, jotka johtuvat suu- ja sorkkataudin ruokavaliosta, mukaan lukien väsymys, heikkous ja päänsärky. Verinäytteenoton aikana tai sen jälkeen on myös pieni pyörtymisriski. Tämän riskin vähentämiseksi osallistujat ovat puoliksi kallistetulla jalustalla koko näytteenoton ajan ja viisi minuuttia näytteenoton jälkeen. Tutkija on koko ajan läsnä osallistujan kanssa varmistaakseen, että pyörtyessä ei putoa tai vammoja. Jos tutkijalle sattuu neulanpistovamma verinäytteen ottamisen aikana tai naarmuuntuminen tapahtuu, paikallisia toimenpiteitä toteutetaan tällaiseen tapaukseen reagoimiseksi. Vakavia haittatapahtumia ei odoteta tapahtuvan tutkimuksen aikana.

Eettinen raportointi

Haittatapahtuma on mikä tahansa tutkimukseen liittyvä epäsuotuisa ja tahaton merkki, oire tai sairaus. Jos haittatapahtuma ilmenee, kuten pyörtyminen verenoton aikana, tutkija ilmoittaa asiasta päätutkijalle, jotta se voidaan sisällyttää tutkimustiedostoon CRF. Vakava haittatapahtuma (SAE) on tapahtuma, joka aiheuttaa kuoleman, vaatii osallistujan sairaalahoitoa, aiheuttaa jatkuvan vamman tai synnynnäisen epämuodostuman. Jos näin tapahtuu, raportti kirjataan 24 tunnin kuluessa tapahtumasta ja eettiselle toimikunnalle 15 päivän kuluessa tapahtumasta. Lomake on täytettävä koneella ja päätutkijan allekirjoitettava. Pääasiallinen REC kuittaa turvallisuusraporttien vastaanottamisesta 30 päivän kuluessa.

Vaatimustenmukaisuus ja peruuttaminen

Aiheen noudattaminen

Osallistujien vaatimustenmukaisuus arvioidaan jokaisella opintokäynnillä. Itse ilmoittama sairaushistoria varmistaa, että osallistuja ei ole ryhtynyt toimiin (esim. aloittanut osallistumisen toiseen kliiniseen tutkimukseen) tai kehittynyt sairauteen tai aloittanut lääkityksen (esim. systeemisten antibioottien ottaminen), joka on kielletty poissulkemiskriteereillä. Lisäksi hoitomyöntyvyys arvioidaan verikokeen perusteella ottaen huomioon verenkierron IGF-1-tasojen lasku. Tämä kirjataan CRF:n tarkistuslistalle. Jokaisen potilaan tulee täyttää ruokavaliopäiväkirjaa koko tutkimuksen ajan, mukaan lukien suu- ja sorkkatautisyklit testipotilaille. Ruokavaliopäiväkirjan täyttämättä jättäminen kirjattaisiin myös keskeyttämiseen, koska ruokavaliolla on ratkaiseva merkitys tutkimuksen pätevyyden kannalta. Lopuksi, jos osallistuja ei yllättäen pääse opintovierailulle, häntä pyydetään saapumaan klinikalle heti seuraavan mahdollisen tilaisuuden tullen.

Aiheiden vetäytyminen / keskeyttäminen

Osallistujat voivat vetäytyä tutkimuksesta milloin tahansa. Tämä tapahtuisi osallistujan ja minkä tahansa tutkimusryhmän jäsenen välisen suullisen keskustelun kautta, ja heidän päätöksensä kirjattaisiin kirjalliseen peruutuslomakkeeseen. Peruuttamisen syyt voivat olla esimerkiksi fyysinen epämukavuus tai liian suuri ajankäyttö. Kun data-analyysi on saatu päätökseen, jolloin kaikki anonymisoidut tiedot koottaisiin yhteen, osallistujat eivät enää voisi vetää tietojaan tutkimuksesta, mikä selvitettäisiin rekrytoinnin alussa. Viimeisin päivämäärä tälle on tutkimuksen lopussa. Tietyt olosuhteet voivat vaatia tutkimusryhmää päättämään osallistujien poistamisesta tutkimuksesta, kuten merkittävä tutkimussuunnitelman noudattamatta jättäminen, esimerkiksi useiden tutkimuskäyntien puuttuminen tai muut tapahtumat, jotka täyttäisivät poissulkemiskriteerit. Tämä tarkoittaisi keskustelua osallistujan kanssa, jotta hänelle kerrotaan ja selitetään päätös, ja päätös kirjataan kirjalliseen peruutuslomakkeeseen. Jos vaatimustenvastaisuus paljastuu opintokäynnillä, se kirjataan myös CRF:n Lisähuomautuksia-osioon. Kohteita ei vaihdeta henkilöiden vetäytyessä.

Tilastolliset näkökohdat

Otoskoon laskeminen

Suu- ja sorkkataudin käytöstä parodontiittipotilailla ei ole julkaistu tutkimuksia. Siksi kirjallisuudessa ei ole saatavilla tietoja toteutettavuudesta ja vaaditusta otoskoosta. on erittäin vaikea arvioida, mikä olisi oikea tutkimusotoskoko, ja siksi tämä tutkimus on suunniteltu sisäiseksi pilotiksi. Vaikka Browne ja työtoverit (1995) ehdottivat, että 30 potilasta vaadittaisiin peukalosääntönä otoskoon määrittämiseen, Kieser & Wassmer (1996) havaitsivat, että pilottinäytteen koko 20 ja 40 välillä minimoisi suuremman tutkimuksen kokonaisotoskoon. Julious 2009:n ehdotuksen mukaisesti tähän tutkimukseen rekrytoidaan 12 potilasta tutkimusryhmää kohden.

Välianalyysi ja toteutettavuus/etenemiskriteerit

Päätös edetä suuremmalla kokeella (ja suhteellisella otoskokolla) riippuu alla olevista toteutettavuus/etenemiskriteereistä.

TOTEUTETTAVUUSNÄKÖKOHDAT EDISTYMISKRITEERIT TÄYTYY

Halukkuus satunnaistetuiksi ≥ 50 % lähestytyistä potilaista samaa mieltä Oma itsensä ilmoittama ruokavalion noudattaminen ≥ 66 % testiryhmän potilaista ilmoittaa itse noudattamisesta (määritelty enintään 1 päiväksi, jona ruokavaliota ei noudatettu) Testattu ruokavalion noudattaminen ≥ 66 % testiryhmän potilaista osoittaa hoitomyöntyvyyttä verikokeen perusteella (määritelty 20–30 %:n laskuksi verenkierrossa IGF-1:n tasoissa) (Wei 2017) Verinäytteiden hyväksyminen ≥ 66 %:lta rekrytoiduista potilaista on otettu kaikki verinäytteet protokollan mukaisesti Poissaolo vakavista haittatapahtumista Yksikään potilas ei ole ilmoittanut vakavista haittatapahtumista, jotka voisivat liittyä testiruokavalioon

Jos kaikki yllä olevat kriteerit täyttyvät, olemassa olevien tietojen analysointi suoritetaan enintään 3 kuukauden ajalta käyttämällä 24 "sisäisen pilotti"-potilaan tietoja. CRP-arvojen keskiarvoja ja keskihajontoja 3 kuukauden kohdalla käytetään vaaditun otoskoon laskemiseen suurempaa koetta varten. Tutkimuspotilaiden seurantaa jatketaan 6 kuukautta hoidon jälkeen. Jos ryhmien välinen ero primaarituloksessa (CRP 3 kuukauden kohdalla) on minimaalinen, mikä johtaa erittäin suureen otoskokoon, voidaan tehdä päätös olla rekrytoimatta suurempaa potilasryhmää ja rekrytointi lopetetaan. Tutkimuksessa edelleen olevia potilaita seurataan kuitenkin viimeiseen tutkimusseurantaan asti (180 päivää).

Tilastollinen analyysi

Tutkimuksen ensisijainen tulos on verenkierron CRP-tasot 3 kuukautta hoidon jälkeen (testi vs. kontrolli). Tutkimuksen sisäinen pilotti-/toteutettavuusosa on kuitenkin suoritettava ensin, ennen kuin harkitaan, edetäänkö täysin toimivan tutkimuksen otoskoon kanssa. Jos toteutettavuuskriteerit täyttyvät, ryhmien välistä CRP-tasojen eroa 3 kuukauden kuluttua käsittelystä käytetään otoskokoon ja laaditaan virallinen tilastosuunnitelma. Erilaisia ​​tilastopaketteja käytetään eri tarkoituksiin, Stata 14 (StataCorp LLC, College Station, Texas, USA) on pääpaketti ja R (R-Studio-laajennuksella) käytetään lisäanalyyseihin, molemmissa tietyillä rutiinilla. luotu tätä tutkimusta varten. Shapiro-Wilk-testiä käytetään sen varmistamiseksi, noudattavatko analysoidut kvantitatiiviset muuttujat normaalijakaumaa, ja logaritminen muunnos suoritetaan niille, jotka eivät noudata sitä. Yleisön ja tutkimusryhmien profiili kuvataan. Laadullisten muuttujien tulokset ilmaistaan ​​suhteina ja kvantitatiiviset muuttujat keskiarvoina ja keskihajonnana, mukaan lukien 95 %:n luottamusvälit. Populaation jakautuminen kullekin kliiniselle, biokemialliselle ja mikrobiologiselle parametrille saadaan myös. Kaksimuuttujaanalyysissä käytetään khin neliötestiä sen selvittämiseen, onko kahden kvalitatiivisen muuttujan välillä tilastollisesti merkitsevä yhteys, tiedot esitetään kontingenssitaulukoina, kun Chi-neliö-testi ei täytä validiteettiehtoja Fisherin tarkka testi. sovelletaan.

Kahden riippumattoman muuttujan keskiarvojen vertailuun ryhmien välisissä analyyseissä käytetään Studentin T-testiä ottaen huomioon Studentin T-testi parinäytteisiin ryhmän sisäisissä analyyseissä. Jos normaalit oletukset eivät täyty, No Parametric "Mann-Whitney U" -testiä sovelletaan. Ryhmän sisäisissä analyyseissä käytetään ANOVAa toistuville mittauksille tai Friedman-testiä. Monimuuttujaanalyysi suoritetaan moninkertaisen lineaarisen regression mallin ja ordinaalisen logistisen regression avulla, jolloin siihen sisällytetään riippumattomat muuttujat, joiden merkitsevyystaso on 0,20. Olosuhteet tarkistetaan heteroskedastisuuden ja lineaarisuuden jäännösanalyysillä. Tämän tutkimuksen tilastollinen merkitsevyystaso on p<0,05.

Pysäytys-/keskeytyssäännöt ja satunnaiskoodin rikkominen

Tutkijat eivät ennakoi näytteenottoa ja suu- ja sorkkatautia koskevia riskejä, koska nämä ovat vakiintuneita menettelyjä. Siksi tutkijat ennakoivat, että mitään tutkimuksen osaa ei tarvitse keskeyttää eikä tutkimusta tarvitse keskeyttää osallistujien turvallisuussyistä. Koska suu- ja sorkkatautia ei kuitenkaan ole testattu parodontiittipotilailla, siinä epätodennäköisessä tapauksessa, että kyseessä on vakava haittatapahtuma, raportti sponsorille kirjataan 24 tunnin kuluessa tapahtumasta saatuaan ja raportti eettiselle toimikunnalle 15 päivän kuluessa. tapahtuman oppimisesta. Tämän jälkeen tehdään päätös siitä, lopetetaanko tutkimus näiden elinten kanssa vai ei.