Fastenähnliche Ernährung und Parodontitis (MKS) (FMD)

Einführung

Parodontitis ist eine mikrobiell bedingte entzündliche Erkrankung des Zahnhalteapparates. Es hat sich gezeigt, dass die Parodontitis-assoziierte Entzündung nicht auf das Parodontium beschränkt ist, sondern weitreichende Folgen im Rest des Körpers haben kann und dass dies teilweise durch die systemische Ausbreitung oraler Mikroorganismen vermittelt werden kann. Die Schritte 1 und 2 der Parodontaltherapie sind auch mit einer kurzfristigen Entzündungsreaktion in der akuten Phase verbunden, die durch eine Erhöhung der zirkulierenden Entzündungsmarker in der akuten Phase gekennzeichnet ist, worauf wiederum, wenn erfolgreich, eine längerfristige Reduktion dieser Moleküle folgt. Mittel- bis längerfristig geht dies mit Veränderungen anderer Marker der peripheren Gefäßgesundheit sowie Verbesserungen der Stoffwechselkontrolle einher, die mindestens 12 Monate anhalten. Es ist bekannt, dass Parodontitis einen bidirektionalen Zusammenhang mit Stoffwechselstörungen und Dysregulation hat. Eine aktuelle Arbeit bestätigte, dass Parodontitis mit einer systemischen Entzündung verbunden ist, gemessen anhand der Serumspiegel des C-reaktiven Proteins (CRP). Darüber hinaus wurde berichtet, dass eine intensive nicht-chirurgische Parodontitisbehandlung (Schritte 1 und 2) zu einer progressiven Reduzierung des CRP nach 90 Tagen mit einem moderaten Anstieg nach 180 Tagen führte. Es wird angenommen, dass eine Verbesserung der Stoffwechselkontrolle auch die parodontalen Ergebnisse verbessern kann, die genauen Mechanismen hierfür sind jedoch nicht vollständig geklärt. Es wurden auch mehrere menschliche und experimentelle Untersuchungen zu den möglichen Auswirkungen der Ernährung auf die Behandlung von Parodontitis veröffentlicht. Eine Studie an Affen ergab, dass eine langfristige kalorienreduzierte Ernährung (mit Vitaminen und Mineralstoffen angereicherte Ernährung) klinische Entzündungen dämpft und das Ausmaß des parodontalen Abbaus infolge einer akuten mikrobiellen Belastung verringert. In einer anderen experimentellen Studie an Affen schien jedoch eine langfristige hypokalorische Ernährung (30 % weniger der täglichen Kalorienaufnahme plus Vitamine und Mineralien) die Produktion lokaler Entzündungsmediatoren und das Risiko für entzündliche Parodontitis bei Männern, nicht aber bei Frauen, unterschiedlich zu verringern. Darüber hinaus kam eine kürzlich durchgeführte systematische Überprüfung von Tiermodellen zu dem Schluss, dass Makronährstoffe, die einen Einfluss auf oxidativen Stress oder das Immunsystem haben (d. h. n-3-Fettsäuren), für die Vorbeugung oder Behandlung von Parodontitis wichtig zu sein scheinen. Was die Humanforschung betrifft, beobachtete eine koreanische Gruppe nach einer vierwöchigen Intervention zur Gewichtskontrolle bei parodontal gesunden adipösen Menschen eine Verringerung der Matrixmetalloproteinase (MMP)-8, MMP-9 und Interleukin-1β (IL-1β) in Zahnfleischspaltflüssigkeit (GCF). Ein deutsches Team berichtete, dass eine Diät, die aus einer geringen Kohlenhydrataufnahme, einem hohen Anteil an Omega-3-Fettsäuren und Ballaststoffen, höheren Vitamin-C- und D-Werten, einer Reduzierung tierischer Proteine ​​und einer gezielten Aufnahme nitrathaltiger Pflanzen besteht, zu einer deutlichen Reduzierung führen könnte parodontale und gingivale Entzündungen, auch wenn serologische Entzündungsparameter und das subgingivale Mikrobiom unbeeinflusst zu sein scheinen. In einer neueren Studie wurde festgestellt, dass kein allgemeiner Zusammenhang zwischen westlichen Ernährungsgewohnheiten (gekennzeichnet durch eine höhere Aufnahme von verarbeitetem Fleisch, rotem Fleisch, Butter, fettreichen Milchprodukten, Eiern und raffiniertem Getreide) und umsichtigen Ernährungsgewohnheiten (gekennzeichnet durch a) besteht höhere Aufnahme von Gemüse, Obst, Hülsenfrüchten, Vollkornprodukten, Fisch und Geflügel) und Parodontitis; Betrachtet man jedoch ausschließlich übergewichtige Personen, war eine westliche Ernährung mit einem höheren Parodontitisrisiko verbunden. Eine weitere sehr aktuelle Untersuchung, die auf der Verwendung eines ernährungsbedingten Entzündungsindex basierte, zeigte, dass der Verzehr einer entzündungsfördernden Ernährung bei der US-amerikanischen Erwachsenenbevölkerung mit mittelschwerer bis schwerer Parodontitis verbunden war. Um die Compliance der Patienten zu erhöhen, wurde eine neuartige Fastenform eingeführt, da Menschen in der Regel nicht in der Lage sind, eine strenge Diät über einen längeren Zeitraum einzuhalten. Insbesondere die Fasten-Mimik-Diät (FMD), die aus 30–50 % der normalen Kalorienaufnahme an 4–7 aufeinanderfolgenden Tagen besteht, gefolgt von einer Ad-libitum-Ernährungsphase einmal im Monat, zeigte vielversprechende positive Auswirkungen im Hinblick auf die Risikominderung Faktoren für Alterung, Diabetes, Autoimmunität, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Neurodegeneration und Krebs. Insgesamt besteht immer noch Unsicherheit über die mögliche Rolle des periodischen Fastens auf parodontale klinische und entzündliche Parameter. Unseres Wissens gibt es keine Studien, die die möglichen Auswirkungen von MKS auf die systemische und parodontale Reaktion nach einer Parodontitisbehandlung untersucht haben.

Ziele

Das Hauptziel dieser Studie besteht darin, zu testen, ob eine Fasten-ähnliche Diät die systemische und parodontale Reaktion nach einer nicht-chirurgischen Parodontaltherapie beeinflussen kann. Die Nullhypothese besagt, dass eine Fasten-ähnliche Diät die lokale und systemische Entzündungsreaktion nach der Behandlung nicht verändert.

Studiendesign

Dies ist eine doppelblinde (Ergebnisbeurteiler und Statistiker), multizentrische, randomisierte klinische Studie mit parallelen Gruppen und einem 1:1-Zuteilungsverhältnis mit internem Pilot. Alle rekrutierten Patienten erhalten das gleiche Protokoll zur Parodontaltherapie (Schritte 1 und 2). Eine Gruppe (Test) wird drei MKS-Zyklen unterzogen. Das FMD-Programm ist ein pflanzliches Diätprogramm, das darauf abzielt, fastenähnliche Effekte zu erzielen und gleichzeitig sowohl Makro- als auch Mikronährstoffe bereitzustellen, um die Belastung durch das Fasten und Nebenwirkungen zu minimieren. Das FMD besteht zu 100 % aus Zutaten, die allgemein als sicher gelten (GRAS) und umfasst proprietäre Suppen auf Gemüsebasis, Energieriegel, Energiegetränke, Cracker-Snacks, Oliven, Kräutertees und Nahrungsergänzungsmittel. Alle pro Tag zu verzehrenden Artikel sind einzeln verpackt, damit die Probanden selbst entscheiden können, wann sie essen möchten, und gleichzeitig vermeiden, dass sie versehentlich Bestandteile des folgenden Tages verzehren. Die FMD besteht aus einer 5-Tage-Kur, die am ersten Tag etwa 1.100 Kilokalorien liefert; etwa 750 Kilokalorien pro Tag für den zweiten bis fünften Tag. Im Gegenteil, die andere Gruppe (Kontrolle) wird ihre normale Ernährung fortsetzen.

Themenauswahl

Es handelt sich um eine multizentrische Studie. Die Teilnehmer werden von klinischen Mitarbeitern/Studenten der Internationalen Universität Katalonien (UIC), der Complutense-Universität Madrid (UCM), der Universität Santiago de Compostela, der Universität Murcia und der Universität Granada unter Parodontitispatienten untersucht, die die jeweiligen Krankenhäuser aufsuchen. Die Forscher gehen davon aus, dass pro Jahr 24 teilnahmeberechtigte Teilnehmer zur Verfügung stehen, und gehen davon aus, dass 70 % von ihnen nach anfänglichem Interesse einer Teilnahme an der Studie zustimmen werden.

Studienabläufe

Themenrekrutierung

Patienten der International University of Catalunya, der Complutense University, der Universitäten Santiago de Compostela und Granada werden individuell für die Rekrutierung auf dem Campus und innerhalb der zahnmedizinischen Fakultät angesprochen. Nach der ersten Interessenbekundung erhalten potenzielle Teilnehmer ein Informationsblatt und die Möglichkeit, den Mitgliedern des Studienteams per E-Mail oder Telefon Fragen zu stellen. Wenn sie dann den Wunsch zur Teilnahme äußern, werden sie zu einem Screening-Besuch eingeladen. Jeder Einzelne hat mindestens 24 Stunden und bis zu einer Woche Zeit, um zu entscheiden, ob er teilnehmen möchte. Einzelpersonen erhalten nach Abschluss der Studie eine Vergütung für ihre Zeit.

Screening-Verfahren

Beim Screening-Besuch wird die Einwilligung des geschulten Bewerbers oder Studienzahnarztes eingeholt. Dies wird durch ein schriftliches Einverständnisformular des Teilnehmers dokumentiert, in dem der gesamte Studienablauf und eine Vereinbarungscheckliste für jede Datenerfassungsmethode aufgeführt sind. Sobald die Einwilligung erteilt wurde, wird jeder angemeldete Teilnehmer in einem Teilnehmerprotokollformular erfasst. Beim ersten Screening soll sichergestellt werden, dass jeder Einzelne die dargelegten Einschluss- und Ausschlusskriterien erfüllt. Dies wird anhand einer mündlichen Anamnese beurteilt und auf einem Screening-Protokollformular in Papierform festgehalten. Um die Eignung sicherzustellen, müssen sich die Teilnehmer einer parodontalen Untersuchung durch den Studienzahnarzt unterziehen.

Randomisierungsverfahren und Allokationsverheimlichung

Die anfängliche zentrale Randomisierung erfolgt mithilfe der „Sealed Envelope“-Methode durch Personal, das nicht direkt an der Studie beteiligt ist, im Guy's Hospital. Für wichtige Einflussfaktoren („Mitte“) wird wie empfohlen eine stratifizierte Randomisierung durchgeführt. Auf eine Stratifizierung nach Alter wird verzichtet, da sich die Stratifizierung bei kleinen Stichprobengrößen auf einen oder sehr wenige Faktoren beschränken sollte und der Einfluss des Alters durch das Studiendesign begrenzt ist und in statistischen Analysen berücksichtigt wird. Für jedes Zentrum werden die Patienten mithilfe einer zuvor vom Studienstatistiker erstellten Randomisierungsliste einer der beiden Behandlungsgruppen zugeordnet. Die Liste wird durch blockierte Randomisierung generiert. In jedem Zentrum wird ein versiegelter Umschlag verwendet, um die Geheimhaltung der Zuteilung zu gewährleisten. Dem Teilnehmer wird eine Test- oder Kontrollbehandlung zwischen den Tagen -7/-10 und Tag 0 zugewiesen. Der Therapeut wird über die Behandlungszuteilung informiert, indem er den Umschlag zu Beginn des Behandlungstermins öffnet.

Zeitplan für jeden Besuch

Teilnehmer, die durch persönliche Gespräche oder Reaktionen auf Anzeigen ein gewisses Interesse an einer Teilnahme bekundet haben, werden zu einem Screening-Besuch eingeladen. Dies findet, wie alle Studienbesuche, im Hospital General de Catalunya (Barcelona) und in den Odontostomatologischen Abteilungen (Clinica de Odontologia) von Madrid, Santiago de Compostela, Murcia und Granada statt und sollte etwa 45 Minuten dauern. Dies erfolgt zu einem für beide Seiten günstigen Zeitpunkt und Datum für den potenziellen Teilnehmer und den Studienzahnarzt im Rahmen der verfügbaren klinischen Räumlichkeiten. Hier werden sie zunächst zu ihren persönlichen Daten/Anamnese befragt und einer zahnärztlichen Untersuchung unterzogen. Wenn sie geeignet sind, werden sie darüber informiert, wann die nächste Phase der Studie beginnt, und es wird ein Termin für den Beginn der Untersuchung vereinbart. Die Behandlung wird von den Postgraduiertenstudenten des Masterstudiengangs Parodontologie jedes Zentrums durchgeführt.

Ein bis zwei Wochen später, am Tag -7/-10 (Basistermin oder Besuch 1), wird die Einverständniserklärung abgegeben und unterschrieben. Es werden Blut-, GCF-, Plaque- und Stuhlproben entnommen. Anamnese, unerwünschte Ereignisse und Begleitmedikamente werden überprüft und eine mündliche Untersuchung durchgeführt, einschließlich der Erfassung der Anzahl der Zähne und an 6 Stellen pro Zahn, Sondierungstiefe, Rezession (mm) und Blutung nach der Sondierung. Es wird eine sehr oberflächliche Prophylaxe-, Motivations- und Mundhygieneanleitung gegeben.

Am Tag 0 (Morgen) (Besuch 2) beginnen die der Testgruppe zugeordneten Patienten an 5 aufeinanderfolgenden Tagen mit der FMD. Bei allen Patienten werden PMPR-Verfahren (Full-Mouth-Subgingival-Instrumentierung) durchgeführt und es werden detailliertere Hygieneanweisungen erteilt. Anamnese, unerwünschte Ereignisse und Begleitmedikamente werden überprüft und eine mündliche Untersuchung durchgeführt, um auf Komplikationen zu prüfen. Ein ausgebildeter, registrierter Ernährungsberater (aus einem der Zentren) wird mit den Patienten MKS besprechen und auch eine Umfrage verteilen, um nicht verzehrte und zusätzlich verzehrte Lebensmittel zu melden.

Am ersten Tag (v3) werden Blut- und GCF-Proben entnommen. Anamnese, unerwünschte Ereignisse und Begleitmedikamente werden überprüft, eine mündliche Untersuchung wird durchgeführt, um auf Komplikationen zu prüfen.

Am 7. Tag (v4) werden Blut- und GCF-Proben entnommen. Anamnese, unerwünschte Ereignisse und Begleitmedikamente werden überprüft, eine mündliche Untersuchung wird durchgeführt, um auf Komplikationen zu prüfen.

Am Tag 45 ± 5 (v5) werden Blut- und GCF-Proben entnommen. Die Anweisungen zur Mundhygiene werden verstärkt und es wird eine Sitzung zur supragingivalen Zahnsteinentfernung mit Polieren angeboten. Bei Patienten der Testgruppe wird mit dem zweiten MKS-Zyklus begonnen. Anamnese, unerwünschte Ereignisse und Begleitmedikamente werden überprüft, eine mündliche Untersuchung wird durchgeführt, um auf Komplikationen zu prüfen.

Am Tag 85 ±5 (v6) wird bei Patienten der Testgruppe mit dem dritten MKS-Zyklus begonnen. Die Krankengeschichte, unerwünschte Ereignisse und Begleitmedikamente werden überprüft, die Anweisungen zur Mundhygiene werden verschärft und eine Sitzung zur supragingivalen Zahnsteinentfernung mit Polieren wird angeboten.

Am Tag 90 ±5 (v7) werden parodontale Diagrammmessungen im gesamten Mund aufgezeichnet. Es werden Blutproben und GCF-Proben entnommen. Die Anweisungen zur Mundhygiene werden verstärkt und bei Bedarf wird eine Sitzung zur unterstützenden Parodontaltherapie angeboten. Anamnese, unerwünschte Ereignisse und Begleitmedikamente werden überprüft, eine mündliche Untersuchung wird durchgeführt, um auf Komplikationen zu prüfen.

Am Tag 180 ±10 (v8) werden parodontale Diagrammmessungen im gesamten Mund an 6 Stellen pro Zahn aufgezeichnet: Sondierungstiefe, Rezession (mm) und Blutung nach der Sondierung. Es werden Blut-, GCF-, Plaque- und Stuhlproben entnommen. Die Anweisungen zur Mundhygiene werden verstärkt. Anamnese, unerwünschte Ereignisse und Begleitmedikamente werden überprüft, eine mündliche Untersuchung wird durchgeführt, um auf Komplikationen zu prüfen.

*Die Patienten werden während jedes FMD-Zyklus ein- oder zweimal angerufen, um zu überprüfen, ob alles ordnungsgemäß verläuft, und um etwaige Probleme oder Bedenken zu lösen.

Folgemaßnahmen

Wenn ein Teilnehmer mehrere (2/3) Besuche versäumt, kann er als Aussteiger betrachtet werden. Sie werden jedoch in die Intention-to-Treat-Analyse einbezogen.

Definition des Studienendes

Die Studie wird abgeschlossen sein, sobald alle Teilnehmer alle Phasen des klinischen Zeitraums abgeschlossen haben und die Verarbeitung/Analyse des biologischen Materials und der klinischen Ergebnisse durchgeführt wurde.

Probenentnahme/Kennzeichnung/Protokollierung

Die Proben werden während des Studienbesuchs vom Patienten durch qualifizierte Zahnärzte der Internationalen Universität Katalonien, der Complutense-Universität Madrid, der Universität Santiago de Compostela, der Universität Murcia und der Universität Granada entnommen, die an dieser Studie teilnehmen werden. Bei der Entnahme aller Probentypen werden angemessene Händehygiene, passende Handschuhe und sterile Einweg-Untersuchungsartikel verwendet, um die Integrität der gesammelten Proben und die Sicherheit des Prüfers und Teilnehmers zu gewährleisten. Vor jedem Besuch werden pseudoanonymisierte, etikettierte Röhrchen vorbereitet, wobei das Etikett aus der Teilnehmernummer mit vorangestellter Probentypbezeichnung besteht, z. B. G für GCF, B für Blut, S für Speichel, SubP für subgingivale Plaque usw. Die Entnahme von Proben erfolgt bei jedem Besuch vor der klinischen Untersuchung, um zu verhindern, dass die Probenahmestelle durch die körperliche Manipulation gestört wird oder leichte Zahnfleischschäden entstehen Blutungen, die die entnommene Probe kontaminieren können. GCF Periopaper® Strips (Pro-flow Inc., Amityville, New York, USA) werden in den Zahnfleischspalt der Zähne mit der tiefsten Taschenstelle (bukkale Aspekte) in jedem Quadranten platziert. Sie werden dann sofort auf einem kalibrierten elektronischen Wandler Periotron 8000 (Pro-Flow Inc., Amityville, New York, USA) gemessen, der die Menge des gesammelten GCF quantifiziert. Nach der Messung werden alle GCF-Streifen für diesen Besuch bei -80 °C in einem einzigen 2-ml-Röhrchen gelagert und zur weiteren Analyse gepoolt. 4 ml venöses Blut werden aus dem Arm des Teilnehmers in evakuierten, sterilen Vacutainern mit Sicherheitsverschluss von Hemogard gesammelt, die das gerinnungshemmende K2-Kaliumsalz von EDTA (Ethylendiamintetraessigsäure) enthalten, das auf die Innenfläche des Röhrchens aufgesprüht wurde. Die Probenentnahme erfolgt durch erfahrene und geschulte Phlebotomiker. Um das Risiko einer Ohnmacht zu verringern, werden die Teilnehmer während der gesamten Dauer der Probenahme und fünf Minuten nach der Probenahme auf einer halb zurückgelehnten Unterlage sitzen. Ein Forscher wird jederzeit bei dem Teilnehmer anwesend sein, um sicherzustellen, dass es im Falle einer Ohnmacht nicht zu Stürzen oder Verletzungen kommt. Gebrauchte Nadeln werden in einem sicheren Behälter für scharfe Gegenstände entsorgt. Die Serumproben werden 10 Minuten lang bei 11.000 U/min zentrifugiert, dann sofort in Aliquots von 0,2 ml bis 0,5 ml aufgeteilt und in einem Gefrierschrank bei -80 °C gelagert, bis sie für die Analyse benötigt werden. Subgingivale Plaqueproben werden vom Studienzahnarzt mit einer sterilen Kürette von der bukkalen Oberfläche des Zahns entnommen, jeweils unterhalb des Zahnfleischrandes. Die Plaque wird bei jedem Studienbesuch von den Zähnen mit der tiefsten Taschenstelle (bukkale Oberfläche) gesammelt. Diese Zähne wurden ausgewählt, um eine gute Mischung aus Backenzähnen und Schneidezähnen zu haben. Der gesammelte Zahnbelag dieser vier Zähne wird in 1 ml sterilem 0,1x Tris-EDTA gepoolt und bei -80 °C gelagert. Den Teilnehmern werden Heimsammelsets zur Probenahme von Stuhlproben in Konservierungslösung zur Verfügung gestellt ([http://www.microbiome-standards.org)] http://www.microbiome- (standards.org) und diese Probe wird innerhalb von 7 Tagen nach der Entnahme an das örtliche Labor geschickt. Nach Eingang der Stuhlproben im Labor werden die Proben bei -80 °C gelagert. Alle biologisch kontaminierten Einwegartikel werden zur Verarbeitung und Entfernung in den richtigen Behälter für biologische Gefahren entsorgt. Alle entnommenen Proben werden für diesen Studienbesuch auf dem gedruckten CRF des Teilnehmers protokolliert, wobei Datum und Uhrzeit der Entnahme sowie die Initialen des sammelnden Studienzahnarztes aufgezeichnet werden. Dies wird auch in der Excel-Tabelle der Studie protokolliert. Wenn eine bestimmte Probe bei diesem Besuch nicht entnommen werden kann, wird der Grund dafür im entsprechenden Abschnitt „Zusätzliche Hinweise“ des CRF angegeben.

Probenanalyseverfahren

Alle Experimente werden in den Mikrobiom- und Speichellabors des Guy's Hospital durchgeführt. GCF-Proben werden aufgetaut und in PBS (pH 7,2 ± 0,2) eluiert, ergänzt mit Easypack Protease Inhibitor Cocktail (Roche), wie in Curtis et al. beschrieben. 1988. Kurz gesagt, die Periopapierstreifen werden in ein perforiertes 0,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen gegeben, das in einem 1,5-ml-Röhrchen gehalten wird. Der Elutionspuffer (50 μl) wird auf die Streifen gegeben und 2 Minuten lang in einen Vortexschüttler gegeben, bevor 15 Minuten lang bei 11.000 U/min und 4 °C zentrifugiert wird. Die Zentrifugation wird mit weiteren 50 μl Elutionspuffer auf den Streifen wiederholt, um etwa 90 μl des gesamten eluierten GCF zu erhalten. Die Proteinkonzentration wird mithilfe einer LVis-Platte (BMG Labtech CLARIOstar) quantifiziert, die mit Rinderserumalbumin (Sigma) kalibriert ist. Die GCF-Analyse für ausgewählte Analyten wird von Luminex durchgeführt. Die Proben werden im KCL Center for Host-Microbiome Interactions, fl.17 Guys Tower Wing, verarbeitet. Plaque- und Stuhlproben werden nach Standardverfahren in unserem Labor einer DNA-Extraktion unterzogen und mithilfe der DNA-Sequenzierung der nächsten Generation analysiert, um die subgingivale Mikrobiota zu charakterisieren und die Konzentration wichtiger parodontaler bakterieller Krankheitserreger und mikrobieller gemeinschaftsweiter Veränderungen an den behandelten Stellen zu identifizieren und zu bestimmen mit Test- und Kontrollprotokollen. Blutproben werden mithilfe verschiedener Techniken wie Western Blots oder Enzymimmunoassays (ELISA) auf Zytokine, Akute-Phase-Proteine ​​und Entzündungsmarker getestet, um deren Vorhandensein und Menge im Blut zu bestimmen. Zahnfleischspaltflüssigkeit wird auf Entzündungsmediatoren, Antikörper, Peptide und Zytokine analysiert, wiederum mithilfe von Techniken wie ELISA. Die zirkulierenden IGF-1-Spiegel, der Nüchternblutzuckerspiegel und der β-Hydroxybutyrat-Blutspiegel werden beurteilt, um die Einhaltung der MKS zu überwachen.

ELISA (hochempfindlicher Two-Site-Enzyme-Linked-Immunosorbent-Assay): IL-6-Nachweis.

Cobas Integra 700 (automatisierter immunturbidimetrischer hochempfindlicher Assay): HsCRP-Nachweis.

Die aus diesen Experimenten generierten Daten werden auf sicheren, passwortgeschützten King's-Computern gespeichert, einschließlich der Computer in den Speichel- und Mikrobiomlabors sowie auf dem von King's bereitgestellten Studien-Laptop.

Verfahren zur Probenlagerung

Blut-, Speichel-, Plaque- und GCF-Proben werden bei -80 °C in sicheren, verschlossenen HTA-Gefrierschränken in den Labors der Internationalen Universität Katalonien, der Complutense-Universität Madrid, der Universität Santiago de Compostela und der Universität Granada gelagert. Dies gewährleistet eine langfristige Stabilität der Vorbereitung auf die Probenverarbeitung. Nach der Entnahme werden die Stuhlproben von den Patienten in versiegelten, vorfrankierten Umschlägen an jedes teilnehmende Zentrum geschickt. Während der Lagerung werden alle Proben auf ihre physische Unversehrtheit überprüft und die einzufrierenden Proben werden dann in einer passwortgeschützten, sicheren Computerdatenbank gespeichert, in der ihr Standort im Gefrierschrank sowie die Uhrzeit und das Datum der Lagerung aufgezeichnet werden. Im CRF wird auch eine physische Hardcopy-Aufzeichnung der gespeicherten Proben enthalten sein. Die Lagerung, der Transport, die Verwendung und die endgültige Entsorgung der bereitgestellten Probe erfolgen in Übereinstimmung mit dem britischen Human Tissue Act 2004 und den EU-Gewebe- und Zellrichtlinien. Sollten Proben nicht sofort verarbeitet werden, werden sie zur weiteren Analyse zu einem späteren Zeitpunkt pseudoanonym gespeichert. Die Proben werden an das Speichellabor des Guy's Hospital übertragen und nach Abschluss 10 Jahre lang archiviert. Nach Ablauf der Ethikgenehmigung für die Studie werden die Blut-, Speichel- und GCF-Proben gemäß dem Human Tissue Act 2004 und etwaigen Änderungen daran entsorgt oder an eine Gewebebank übertragen.

Versand der Probe von Spanien nach Großbritannien

Die Proben werden in einem Iglu platziert, das ausreichend Eis/Trockeneis enthalten kann, um sicherzustellen, dass die Proben länger als die geschätzte Reisezeit auf der richtigen Temperatur gehalten werden. Anschließend wird das Styropor-Iglu teilweise mit Eis/Trockeneis gefüllt, um Platz für Proben und zusätzliches Eis zu schaffen. Um die Katalogisierung zu erleichtern, können Proben in einem versiegelten Plastikbeutel aufbewahrt werden. Das Iglu wird dann mit Trockeneis gefüllt, um die Proben abzudecken, und ein Versandformular sowie eine Kopie des Adressetiketts in einem versiegelten Plastikprobenbeutel liegen bei. Auf das Iglu wird ein Deckel aufgesetzt und mit Paketband gesichert. Anschließend wird das Iglu in starkes braunes Geschenkpapier eingewickelt und vor der Lieferung sowohl ein Adressetikett als auch Etiketten für Gefahren bei sehr niedrigen Temperaturen angebracht. Es wird das schnellste Transportmittel (z.B. Flugzeug) ausgewählt, um den Versand schnellstmöglich abzuwickeln.

Bewertung der Sicherheit

Die Forscher sehen keine erheblichen Risiken für den Teilnehmer, der an der Probenentnahme, einschließlich Blutproben, beteiligt ist, da es sich um etablierte Verfahren handelt. Basierend auf früherer Literatur könnte ein mögliches Risiko einige leichte/mittelschwere systemische Nebenwirkungen betreffen, die durch die MKS-Diät verursacht werden, einschließlich Müdigkeit, Schwäche und Kopfschmerzen. Es besteht auch ein geringes Risiko einer Ohnmacht während oder nach der Blutentnahme. Um dieses Risiko zu verringern, befinden sich die Teilnehmer während der gesamten Dauer der Probenahme und fünf Minuten nach der Probenahme auf einem halb zurückgelehnten Sockel. Ein Forscher wird jederzeit bei dem Teilnehmer anwesend sein, um sicherzustellen, dass es im Falle einer Ohnmacht nicht zu Stürzen oder Verletzungen kommt. Wenn der Untersucher während der Entnahme der Blutprobe eine Nadelstichverletzung oder eine Kratzverletzung erleidet, werden örtliche Maßnahmen ergriffen, um auf einen solchen Vorfall zu reagieren. Im Verlauf der Studie sind keine schwerwiegenden unerwünschten Ereignisse zu erwarten.

Ethik-Berichterstattung

Ein unerwünschtes Ereignis sind alle ungünstigen und unbeabsichtigten Anzeichen, Symptome oder Krankheiten, die mit der Studie verbunden sind. Sollte ein unerwünschtes Ereignis auftreten, wie z. B. Ohnmacht während der Blutentnahme, wird der Prüfer den leitenden Prüfer informieren, damit er in die Studienakte CRF aufgenommen wird. Ein schwerwiegendes unerwünschtes Ereignis (SAE) ist ein Ereignis, das zum Tod führt, den Krankenhausaufenthalt des Teilnehmers erforderlich macht, eine dauerhafte Behinderung verursacht oder einen Geburtsfehler verursacht. Sollte dies geschehen, wird innerhalb von 24 Stunden nach Kenntnisnahme des Ereignisses ein Bericht protokolliert und innerhalb von 15 Tagen nach Kenntnisnahme des Ereignisses ein Bericht an die Ethikkommission übermittelt. Das Formular sollte maschinenschriftlich ausgefüllt und vom leitenden Ermittler unterzeichnet werden. Der Haupt-REC bestätigt den Erhalt der Sicherheitsberichte innerhalb von 30 Tagen.

Compliance und Rückzug

Betreffkonformität

Die Compliance der Teilnehmer wird bei jedem Studienbesuch beurteilt. Eine selbstberichtete Krankengeschichte stellt sicher, dass der Teilnehmer keine Maßnahmen ergriffen hat (z. B. begonnen hat, an einer anderen klinischen Studie teilzunehmen) oder eine Krankheit entwickelt hat oder mit der Einnahme von Medikamenten begonnen hat (z. B. Einnahme systemischer Antibiotika), was durch die Ausschlusskriterien verboten ist. Darüber hinaus wird die Compliance anhand einer Blutuntersuchung unter Berücksichtigung der Verringerung der zirkulierenden IGF-1-Spiegel bewertet. Dies wird in einer Checkliste im CRF festgehalten. Jeder Patient sollte während der gesamten Studie ein Ernährungstagebuch führen, einschließlich der FMD-Zyklen für Testpatienten. Das Versäumnis, das Ernährungstagebuch auszufüllen, würde aufgrund der entscheidenden Bedeutung der Ernährung für die Gültigkeit der Studie ebenfalls als Studienabbrecher gewertet. Wenn ein Teilnehmer schließlich unerwartet nicht an einem Studienbesuch teilnehmen kann, wird er gebeten, zum nächstmöglichen Zeitpunkt die Klinik aufzusuchen.

Rücktritt/Abbruch von Fächern

Teilnehmer können jederzeit von der Studie zurücktreten. Dies würde durch eine mündliche Diskussion zwischen dem Teilnehmer und einem Mitglied des Studienteams geschehen und ihre Entscheidung würde auf einem schriftlichen Widerrufsformular protokolliert. Gründe für einen Entzug können beispielsweise körperliche Beschwerden oder ein zu großer Zeitaufwand sein. Nach Abschluss der Datenanalyse, bei der alle anonymisierten Daten gesammelt würden, könnten die Teilnehmer ihre Daten nicht mehr aus der Studie zurückziehen, was bereits in der ersten Rekrutierungsphase klargestellt würde. Der späteste Termin hierfür ist am Ende der Studie. Bestimmte Umstände können es erforderlich machen, dass das Studienteam beschließt, Teilnehmer aus der Studie auszuschließen, z. B. bei erheblicher Nichteinhaltung des Protokolls, z. B. dem Versäumen mehrerer Studienbesuche, oder anderen Ereignissen, die die Ausschlusskriterien erfüllen würden. Dies würde ein Gespräch mit dem Teilnehmer beinhalten, um ihn über die Entscheidung zu informieren und zu erklären, und die Entscheidung in einem schriftlichen Rücktrittsformular protokollieren. Wenn bei einem Studienbesuch eine Nichteinhaltung festgestellt wird, wird diese ebenfalls im Abschnitt „Zusätzliche Hinweise“ des CRF protokolliert. Die Probanden werden nicht ersetzt, wenn Einzelpersonen ausscheiden.

Statistische Überlegungen

Berechnung der Stichprobengröße

Es wurden keine Studien zur MKS bei Parodontitispatienten veröffentlicht. Daher sind in der Literatur keine Daten zur Machbarkeit und erforderlichen Stichprobengröße verfügbar. Es ist sehr schwierig, die korrekte Stichprobengröße der Studie abzuschätzen. Aus diesem Grund ist diese Studie als interne Pilotstudie konzipiert. Während Browne und Mitarbeiter (1995) vorschlugen, dass 30 Patienten als Faustregel für die Stichprobengröße erforderlich wären, stellten Kieser & Wassmer (1996) fest, dass eine Pilotstichprobengröße zwischen 20 und 40 die Gesamtstichprobengröße der größeren Studie minimieren würde. Dem Vorschlag von Julious 2009 folgend werden für diese Studie 12 Patienten pro Studienarm rekrutiert.

Zwischenanalyse und Machbarkeits-/Fortschrittskriterien

Die Entscheidung, mit der größeren Studie fortzufahren (und der relativen Stichprobengröße), hängt von den unten aufgeführten Machbarkeits-/Fortschrittskriterien ab.

MACHBARKEITSASPEKTE FORTSCHRITTSKRITERIEN, DIE ERFÜLLT WERDEN MÜSSEN

Bereitschaft zur Randomisierung ≥ 50 % der angesprochenen Patienten stimmen zu Selbstberichtete Einhaltung der Diät ≥ 66 % der Patienten in der Testgruppe berichten selbst über Einhaltung (definiert als nicht mehr als 1 Tag, an dem die Diät nicht befolgt wurde) Getestete Einhaltung der Diät ≥ 66 % der Patienten der Testgruppe zeigen Compliance basierend auf Bluttests (definiert als 20 bis 30 % Reduzierung der zirkulierenden IGF-1-Spiegel) (Wei 2017) Akzeptanz von Blutproben ≥ 66 % der rekrutierten Patienten lassen alle Blutproben gemäß Protokoll entnehmen. Abwesenheit schwerwiegender unerwünschter Ereignisse Kein Patient berichtet über schwerwiegende unerwünschte Ereignisse, die mit der Testdiät in Zusammenhang stehen könnten

Wenn alle oben genannten Kriterien erfüllt sind, wird eine Analyse der vorhandenen Daten bis zu 3 Monaten durchgeführt, wobei die Daten der 24 Patienten des „internen Piloten“ verwendet werden. Mittelwerte und Standardabweichungen der CRP-Werte nach 3 Monaten werden verwendet, um die erforderliche Stichprobengröße für den größeren Versuch zu berechnen. Die Nachbeobachtung der Studienpatienten wird bis zu 6 Monate nach der Behandlung fortgesetzt. Sollte der Unterschied zwischen den Gruppen hinsichtlich des primären Ergebnisses (CRP nach 3 Monaten) minimal sein, was zu einer sehr großen Stichprobengröße führt, wird möglicherweise entschieden, nicht mit der Rekrutierung einer größeren Patientengruppe fortzufahren, und die Rekrutierung wird gestoppt. Die Patienten, die sich noch in der Studie befinden, werden jedoch bis zum letzten Follow-up der Studie (180 Tage) nachbeobachtet.

statistische Analyse

Das primäre Ergebnis der Studie sind die zirkulierenden CRP-Werte 3 Monate nach der Behandlung (Test vs. Kontrolle). Allerdings muss zunächst der interne Pilot-/Machbarkeitsteil der Studie abgeschlossen werden, bevor überlegt wird, ob mit einer vollständig aussagekräftigen Stichprobengröße fortgefahren werden soll. Wenn Machbarkeitskriterien erfüllt sind, wird der Unterschied in den CRP-Werten 3 Monate nach der Behandlung zwischen den Gruppen zur Stichprobengröße herangezogen und ein formeller statistischer Plan erstellt. Für unterschiedliche Zwecke werden verschiedene Statistikpakete verwendet, Stata 14 (StataCorp LLC, College Station, Texas, USA) wird das Hauptpaket sein und R (mit R-Studio-Plugin) wird für zusätzliche Analysen verwendet, beide mit spezifischen Routinen für diese Studie erstellt. Der Shapiro-Wilk-Test wird angewendet, um zu überprüfen, ob die analysierten quantitativen Variablen einer Normalverteilung folgen, und bei denen, die dieser nicht folgen, wird eine logarithmische Transformation durchgeführt. Das Profil der Bevölkerung und der Studiengruppen wird beschrieben. Die Ergebnisse der qualitativen Variablen werden in Anteilen ausgedrückt und die quantitativen Variablen werden als Mittelwert und Standardabweichung ausgedrückt, einschließlich der 95 %-Konfidenzintervalle. Außerdem wird die Verteilung der Bevölkerung für jeden der klinischen, biochemischen und mikrobiologischen Parameter ermittelt. Für die bivariate Analyse wird der Chi-Quadrat-Test verwendet, um festzustellen, ob ein statistisch signifikanter Zusammenhang zwischen zwei qualitativen Variablen besteht. Die Daten werden als Kontingenztabellen dargestellt, wenn der Chi-Quadrat-Test die Gültigkeitsbedingungen des exakten Fisher-Tests nicht erfüllt Wird angewendet werden.

Um die Mittelwerte zweier unabhängiger Variablen für Intergruppenanalysen zu vergleichen, wird der Student-T-Test verwendet, wobei der Student-T-Test für gepaarte Stichproben in gruppeninternen Analysen berücksichtigt wird. Wenn die normalen Annahmen nicht erfüllt sind, wird der „Mann-Whitney U“-Test ohne Parametrierung angewendet. Für gruppeninterne Analysen wird die ANOVA für repetitive Messungen oder der Friedman-Test verwendet. Die multivariate Analyse wird mithilfe eines multiplen linearen Regressionsmodells und einer ordinalen logistischen Regression durchgeführt, in die unabhängige Variablen mit einem niedrigeren Signifikanzniveau von 0,20 eingeführt werden. Die Bedingungen werden durch eine Residualanalyse der Heteroskedastizität und Linearität überprüft. Das statistische Signifikanzniveau für diese Studie liegt bei p<0,05.

Stopp-/Abbruchregeln und Brechen des Randomisierungscodes

Die Forscher sehen keine Risiken im Zusammenhang mit der Probenentnahme und der MKS, da es sich um etablierte Verfahren handelt. Daher gehen die Forscher davon aus, dass kein Teil der Studie abgebrochen werden muss und die Studie nicht aufgrund von Sicherheitsbedenken der Teilnehmer abgebrochen werden muss. Da MKS jedoch nicht bei Parodontitispatienten getestet wurde, wird im unwahrscheinlichen Fall, dass es zu einem schwerwiegenden unerwünschten Ereignis kommt, innerhalb von 24 Stunden nach Kenntnisnahme des Ereignisses eine Meldung an den Sponsor und innerhalb von 15 Tagen eine Meldung an die Ethikkommission protokolliert des Erlernens der Veranstaltung. Anschließend wird gemeinsam mit diesen Gremien entschieden, ob die Studie eingestellt werden soll oder nicht.