Dieta que imita jejum e periodontite (FMD) (FMD)

Introdução

A periodontite é uma doença inflamatória do periodonto causada por micróbios. Foi demonstrado que a inflamação associada à periodontite não se limita ao periodonto, mas pode ter consequências de longo alcance no resto do corpo, e que isto pode ser parcialmente mediado pela disseminação sistémica de microrganismos orais. As etapas 1 e 2 da terapia periodontal também estão associadas a uma resposta inflamatória de fase aguda de curto prazo, caracterizada pela elevação dos marcadores inflamatórios de fase aguda circulantes, que por sua vez é seguida, se bem-sucedida, por uma redução de longo prazo nessas moléculas. A médio e longo prazo, isto é acompanhado por alterações noutros marcadores da saúde vascular periférica, juntamente com melhorias no controlo metabólico que duram pelo menos 12 meses. Sabe-se que a periodontite tem uma relação bidirecional com perturbações e desregulações metabólicas. Um trabalho muito recente corroborou que a periodontite está associada à inflamação sistêmica medida pelos níveis séricos de proteína C reativa (PCR). Além disso, foi relatado que o tratamento intensivo não cirúrgico da periodontite (etapas 1 e 2) levou a uma redução progressiva da PCR após 90 dias com um aumento moderado aos 180 dias. Pensa-se que melhorias no controlo metabólico também podem melhorar os resultados periodontais, mas os mecanismos exatos para isso não são totalmente claros. Várias investigações humanas e experimentais também foram publicadas sobre os possíveis efeitos da nutrição no tratamento da periodontite. Um estudo em macacos descobriu que a restrição calórica dietética a longo prazo (dieta enriquecida com vitaminas e minerais) amortece a inflamação clínica e reduz o grau de degradação periodontal secundária ao desafio microbiano agudo. No entanto, num outro estudo experimental em macacos, a dieta hipocalórica a longo prazo (30% menos da ingestão diária de calorias mais vitaminas e minerais) pareceu reduzir diferencialmente a produção de mediadores inflamatórios locais e o risco de doença periodontal inflamatória entre homens, mas não entre mulheres. Além disso, uma recente revisão sistemática em modelos animais concluiu que os macronutrientes que têm efeito sobre o estresse oxidativo ou o sistema imunológico (isto é, ácido graxo n-3) parecem ser importantes para a prevenção ou tratamento da periodontite. Em termos de pesquisa em humanos, um grupo coreano, após uma intervenção de controle de peso de quatro semanas em pessoas obesas periodontalmente saudáveis, observou uma redução da metaloproteinase da matriz (MMP)-8, MMP-9 e interleucina-1β (IL-1β) em fluido crevicular gengival (FGC). Uma equipe alemã relatou que uma dieta que consiste em baixa ingestão de carboidratos, riqueza em ácidos graxos ômega 3 e fibras, valores mais elevados de vitamina C e D, redução de proteínas animais e ingestão concentrada de plantas contendo nitrato pode levar a uma redução significativa na inflamação periodontal e gengival, embora os parâmetros inflamatórios sorológicos e o microbioma subgengival pareçam não ser afetados. Mais recentemente, um estudo concluiu que não havia associação global entre padrões alimentares ocidentais (caracterizados por uma maior ingestão de carne processada, carne vermelha, manteiga, produtos lácteos ricos em gordura, ovos e cereais refinados) ou padrões alimentares prudentes (caracterizados por uma maior consumo de vegetais, frutas, legumes, grãos integrais, peixes e aves) e periodontite; no entanto, quando foram considerados apenas indivíduos obesos, uma dieta ocidental foi relacionada a um maior risco de periodontite. Outra investigação muito recente, baseada na utilização de um índice inflamatório dietético, mostrou que o consumo de uma dieta pró-inflamatória estava associado à periodontite moderada a grave na população adulta geral dos EUA. Um novo modo de jejum foi introduzido para aumentar a adesão do paciente, devido ao fato de que as pessoas geralmente não conseguem seguir uma dieta rigorosa por um longo período. Em particular, a dieta que imita o jejum (FMD), que consiste em 30-50% da ingestão calórica normal durante 4-7 dias consecutivos, seguida de um período de realimentação ad libitum uma vez por mês, mostrou efeitos benéficos muito promissores em termos de redução do risco fatores de envelhecimento, diabetes, autoimunidade, doenças cardiovasculares, neurodegeneração e câncer. No geral, ainda há incerteza sobre o papel potencial do jejum periódico nos parâmetros clínicos e inflamatórios periodontais. Até onde sabemos, nenhum estudo investigou o efeito potencial da febre aftosa na resposta sistêmica e periodontal após o tratamento da periodontite.

Objetivos

O objetivo principal deste estudo é testar se uma dieta que imita o jejum pode influenciar a resposta sistêmica e periodontal após terapia periodontal não cirúrgica. A hipótese nula é que uma dieta que imita o jejum não modifica a resposta inflamatória local e sistêmica pós-tratamento.

Design de estudo

Este é um estudo clínico duplo-cego (avaliador de resultados e estatístico), multicêntrico e randomizado com grupos paralelos e uma ração de alocação 1:1, com piloto interno. Todos os pacientes recrutados receberão o mesmo protocolo de terapia periodontal (etapas 1 e 2). Um grupo (teste) será submetido a três ciclos de febre aftosa. O programa de febre aftosa é um programa de dieta baseado em vegetais projetado para obter efeitos semelhantes aos do jejum, ao mesmo tempo que fornece macro e micronutrientes para minimizar a carga do jejum e os efeitos adversos. A FMD consiste em ingredientes 100% geralmente considerados seguros (GRAS) e compreende sopas exclusivas à base de vegetais, barras energéticas, bebidas energéticas, biscoitos, azeitonas, chás de ervas e suplementos. Todos os itens a serem consumidos por dia são embalados individualmente para permitir que os sujeitos escolham quando comer, evitando consumir acidentalmente componentes do dia seguinte. O FMD consiste em um regime de 5 dias que fornece aproximadamente 1.100 quilocalorias no primeiro dia; aproximadamente 750 quilocalorias por dia do segundo ao quinto dia. Pelo contrário, o outro grupo (controle) continuará com a alimentação normal.

Seleção de assunto

Este é um estudo multicêntrico. Os participantes serão selecionados pela Universidade Internacional da Catalunha (UIC), Universidade Complutense de Madrid (UCM), Universidade de Santiago de Compostela, Universidade de Múrcia e corpo clínico/alunos da Universidade de Granada entre pacientes com periodontite atendidos nos respectivos hospitais. Os investigadores esperam 24 participantes elegíveis disponíveis por ano e assumem que 70% deles concordarão em participar do estudo após expressarem interesse inicial.

Procedimentos de estudo

Recrutamento de assuntos

Os pacientes da Universidade Internacional da Catalunha, da Universidade Complutense, das Universidades de Santiago de Compostela e de Granada serão abordados individualmente para recrutamento no campus e na faculdade de Odontologia. Depois de expressarem um interesse inicial, os potenciais participantes receberão uma ficha informativa e a oportunidade de fazer perguntas aos membros da equipe de estudo por e-mail ou telefone. Se expressarem o desejo de participar, serão convidados para uma visita de triagem. Cada indivíduo terá pelo menos 24 horas e até uma semana para decidir se deseja participar. Os indivíduos serão reembolsados ​​pelo seu tempo com um pagamento na conclusão do estudo.

Procedimentos de triagem

Na visita de triagem, o consentimento será solicitado pelo candidato treinado ou dentista do estudo, que será registrado por meio de um formulário de consentimento por escrito do participante detalhando o procedimento completo do estudo e uma lista de verificação de acordo para cada método de coleta de dados. Assim que o consentimento for dado, cada participante inscrito será registrado em um formulário de registro do participante. A triagem inicial será para garantir que cada indivíduo esteja em conformidade com os critérios de inclusão e exclusão descritos. Isso será avaliado por meio de uma história oral e será registrado em um formulário impresso de Registro de Triagem. Os participantes precisarão se submeter a um exame periodontal do dentista do estudo para garantir a adequação.

Procedimentos de randomização e ocultação de alocação

A randomização central inicial será feita pelo método "Sealed Envelope" por pessoal não diretamente envolvido no estudo, no Guy's Hospital. Para fatores de influência importantes ('centro'), a randomização estratificada será realizada conforme recomendado. Nenhuma estratificação por idade será realizada, porque para amostras pequenas, a estratificação deve ser limitada a um ou muito poucos fatores e porque a influência da idade é limitada pelo desenho do estudo e será ajustada nas análises estatísticas. Para cada centro, os pacientes serão alocados em um dos dois grupos de tratamento usando uma lista de randomização previamente preparada pelo estatístico do estudo. A lista será gerada por randomização bloqueada. Envelope lacrado será usado em cada centro para garantir a ocultação da alocação. O participante será designado para tratamento de teste ou controle entre os dias -7/-10 e o dia 0. O terapeuta será informado sobre a alocação do tratamento abrindo o envelope no início da consulta de tratamento.

Agendamento para cada visita

Os participantes que manifestaram algum interesse em participar através de discussões presenciais ou de respostas a anúncios serão convidados para uma visita de triagem. Isto acontecerá, como todas as visitas de estudo, no Hospital General de Catalunya (Barcelona) e nas Unidades de Odontoestomatologia (Clínica de Odontologia) de Madrid, Santiago de Compostela, Múrcia e Granada, e deverá durar aproximadamente 45 minutos. Isso ocorrerá em horário e data mutuamente convenientes para o potencial participante e o dentista do estudo, dentro dos limites da disponibilidade de espaço clínico. Aqui eles serão inicialmente questionados sobre suas informações pessoais/histórico médico e serão submetidos a um exame odontológico. Se forem elegíveis, serão informados quando a próxima etapa do estudo terá início e após será marcada uma consulta para início da investigação. O tratamento será ministrado pelos alunos de pós-graduação do Mestrado em Periodontia de cada centro.

Uma a duas semanas depois, no Dia -7/-10 (consulta inicial ou visita 1), o consentimento informado será dado e assinado. Amostras de sangue, GCF, placa e fezes serão coletadas. Histórico médico, eventos adversos e medicamentos concomitantes serão verificados e um exame oral será realizado incluindo registro do número de dentes e em 6 locais por dente profundidade de sondagem, recessão (mm) e sangramento após sondagem. Serão fornecidas instruções muito superficiais de profilaxia, motivação e higiene oral.

No Dia 0 (manhã) (visita 2), os pacientes designados para o grupo de teste iniciarão o FMD por 5 dias consecutivos. Todos os pacientes serão submetidos a procedimentos de instrumentação subgengival de boca inteira (PMPR) e instruções de higiene mais detalhadas serão reforçadas. Histórico médico, eventos adversos e medicamentos concomitantes serão verificados, e um exame oral será realizado para triagem de complicações. Um nutricionista treinado e registrado (de um dos centros) discutirá a febre aftosa com os pacientes e também distribuirá pesquisas para relatar itens não consumidos e alimentos extras consumidos.

No dia 1 (v3), serão coletadas amostras de sangue e GCF. Serão verificados histórico médico, eventos adversos e medicamentos concomitantes, um exame oral será realizado para triagem de complicações.

No dia 7 (v4), serão coletadas amostras de sangue e GCF. Serão verificados histórico médico, eventos adversos e medicamentos concomitantes, um exame oral será realizado para triagem de complicações.

No dia 45±5 (v5), serão coletadas amostras de sangue e GCF. Serão reforçadas as instruções de higiene oral e será ministrada uma sessão de raspagem supragengival com polimento. O segundo ciclo de febre aftosa será iniciado nos pacientes do grupo teste. Serão verificados histórico médico, eventos adversos e medicamentos concomitantes, um exame oral será realizado para triagem de complicações.

No dia 85 ±5 (v6), o terceiro ciclo de febre aftosa será iniciado nos pacientes do grupo teste. Serão verificados histórico médico, eventos adversos e medicamentos concomitantes, instruções de higiene oral serão reforçadas e será realizada uma sessão de raspagem supragengival com polimento.

No dia 90 ±5 (v7), as medições do gráfico periodontal de boca inteira serão registradas. Amostras de sangue e amostras GCF serão coletadas. As instruções de higiene oral serão reforçadas e, se necessário, será disponibilizada uma sessão de terapia periodontal de suporte. Serão verificados histórico médico, eventos adversos e medicamentos concomitantes, um exame oral será realizado para triagem de complicações.

No dia 180 ±10 (v8), as medições do gráfico periodontal de boca inteira serão registradas em 6 locais por dente: profundidade de sondagem, recessão (mm) e sangramento após sondagem. Amostras de sangue, GCF, placa e fezes serão coletadas. As instruções de higiene oral serão reforçadas. Serão verificados histórico médico, eventos adversos e medicamentos concomitantes, um exame oral será realizado para triagem de complicações.

*Os pacientes serão chamados uma ou duas vezes durante cada ciclo de febre aftosa para verificar se tudo está indo bem e para resolver quaisquer problemas ou preocupações que possam ter.

Procedimentos de acompanhamento

Se um participante faltar a múltiplas (2/3) visitas, poderá ser considerado um desistente. No entanto, eles serão incluídos na análise de intenção de tratar.

Definição de fim de estudo

O estudo estará concluído quando todos os participantes tiverem finalizado todas as fases do período clínico e realizado o processamento/análise do material biológico e dos escores clínicos.

Coleta/rotulagem/registro de amostras

As amostras serão coletadas durante a visita de estudo do paciente por dentistas qualificados da Universidade Internacional da Catalunha, Universidade Complutense de Madrid, Universidade de Santiago de Compostela, Universidade de Múrcia e Universidade de Granada que participarão deste estudo. Durante a coleta de todos os tipos de amostras, serão utilizadas higiene adequada das mãos, luvas ajustadas e itens de exame estéreis de uso único para garantir a integridade das amostras coletadas e a segurança do examinador e do participante. Tubos rotulados pseudo-anonimizados serão preparados antes de cada visita, com o rótulo consistindo no número do participante prefixado com a designação do tipo de amostra, por exemplo. G para GCF, B para sangue, S para saliva, SubP para placa subgengival, etc. A coleta de amostras ocorrerá em cada visita antes do exame clínico, para evitar que a manipulação física perturbe o local de amostragem ou cause leve gengival sangramento que pode contaminar a amostra coletada. As tiras GCF Periopaper® (Pro-flow Inc., Amityville, Nova York, EUA) serão colocadas na fenda gengival dos dentes com o local da bolsa mais profunda (aspectos vestibulares) em cada quadrante. Eles serão então medidos imediatamente em um transdutor eletrônico calibrado Periotron 8000 (Pro-Flow Inc., Amityville, Nova York, EUA), que quantificará a quantidade de GCF coletada. Uma vez medidas, as tiras GCF daquela visita serão todas armazenadas a -80ºC em um único tubo de 2ml e agrupadas para análise posterior. 4ml de sangue venoso serão coletados do braço do participante em vacutainers estéreis evacuados com tampa de segurança Hemogard, contendo o anticoagulante K2 Sal de potássio de EDTA (ácido etilenodiamino tetra acético) que foi revestido por spray na superfície interna do tubo. As amostras serão coletadas por flebotomistas experientes e treinados. Para reduzir o risco de desmaio, os participantes ficarão em um pedestal semi-reclinado durante toda a amostragem e por cinco minutos após a amostragem. Um pesquisador estará presente com o participante o tempo todo para garantir que não haja quedas ou ferimentos em caso de desmaio. As agulhas usadas serão descartadas em uma lixeira segura para objetos cortantes. As amostras de soro serão centrifugadas por 10 minutos a 11.000 RPM e imediatamente divididas em alíquotas de 0,2ml - 0,5ml e armazenadas em freezer a -80°C, até serem necessárias para análise. Amostras de placa subgengival serão coletadas da superfície bucal do dente pelo dentista do estudo usando uma cureta estéril, abaixo da margem gengival, respectivamente. A placa será coletada dos dentes com a bolsa mais profunda (superfície bucal) em cada visita do estudo. Esses dentes foram selecionados para terem uma boa mistura de molares e incisivos. A placa coletada desses quatro dentes será reunida em 1ml de Tris-EDTA 0,1x estéril e armazenada a -80ºC. Os participantes receberão kits de coleta domiciliar para amostragem de fezes em solução preservadora ([http://www.microbiome-standards.org)] http://www.microbiome- padrões.org) e esta amostra será enviada ao laboratório local dentro de 7 dias após a coleta. Ao receber amostras de fezes no laboratório, as amostras serão armazenadas a -80 C. Todos os itens descartáveis ​​biologicamente contaminados serão descartados na lixeira correta para risco biológico para processamento e remoção. Todas as amostras coletadas serão registradas no CRF impresso do participante para aquela visita do estudo, com a data e hora da coleta registradas e as iniciais do dentista do estudo que fez a coleta. Isso também será registrado na planilha Excel do estudo. Se uma determinada amostra não puder ser colhida nessa visita, a razão para tal será indicada na secção apropriada de “Notas adicionais” do CRF.

Procedimentos de análise de amostras

Todos os experimentos serão realizados nos laboratórios de Microbioma e Salivar do Guy's Hospital. As amostras GCF serão descongeladas e eluídas em PBS (pH 7,2±0,2) suplementado com Easypack Protease Inhibitor Cocktail (Roche) conforme descrito em Curtis et al. 1988. Resumidamente, as tiras de periopaper serão colocadas em um tubo de microcentrífuga perfurado de 0,5ml que será mantido dentro de um tubo de 1,5ml. O tampão de eluição (50μL) será adicionado às tiras e colocado em agitador vórtice por 2 minutos antes da centrifugação por 15 minutos a 11.000 rpm e 4 ̊C. A centrifugação será repetida com mais 50μL do tampão de eluição adicionados às tiras, para produzir ~90μL do total de GCF eluído. A concentração de proteína será quantificada utilizando uma placa LVis (BMG Labtech CLARIOstar) calibrada com Albumina de Soro Bovino (Sigma). A análise GCF para analitos selecionados será realizada pela Luminex. As amostras serão processadas no KCL Center for Host-Microbiome Interactions, fl.17 Guys Tower Wing. Amostras de placa e fezes serão submetidas à extração de DNA seguindo procedimentos padrão em nosso laboratório e serão analisadas usando sequenciamento de DNA de próxima geração para caracterizar a microbiota subgengival, a fim de identificar e determinar os níveis dos principais patógenos bacterianos periodontais e alterações microbianas em toda a comunidade nos locais tratados com protocolos de teste e controle. Amostras de sangue serão testadas para citocinas, proteínas de fase aguda e marcadores inflamatórios usando diversas técnicas, como Western blots ou ensaios imunoenzimáticos (ELISA), que determinarão a presença e quantidade destes no sangue. O fluido crevicular gengival será analisado quanto a mediadores inflamatórios, anticorpos, peptídeos e citocinas, novamente usando técnicas como ELISA. Níveis circulantes de IGF-1, nível de glicemia em jejum e nível de β-hidroxibutirato no sangue serão avaliados para monitorar a conformidade com a febre aftosa.

ELISA (ensaio imunoenzimático de dois locais de alta sensibilidade): detecção de IL-6.

Cobas Integra 700 (ensaio imunoturbidimétrico automatizado de alta sensibilidade): detecção de HsCRP.

Os dados gerados a partir desses experimentos serão armazenados em computadores King's seguros e protegidos por senha, incluindo aqueles nos laboratórios salivares e de microbioma e no laptop de estudo fornecido pela King's.

Procedimentos de armazenamento de amostras

Amostras de sangue, saliva, placa e GCF serão armazenadas a -80ºC em freezers HTA seguros e trancados nos laboratórios da Universidade Internacional da Catalunha, Universidade Complutense de Madrid, Universidade de Santiago de Compostela e Universidade de Granada. Isto garantirá estabilidade a longo prazo na preparação para processamento de amostras. Após a coleta, as amostras de fezes serão enviadas a cada centro participante pelos pacientes em envelopes lacrados e pré-selados. À medida que são armazenadas, todas as amostras terão sua integridade física verificada e as amostras a serem congeladas serão então registradas em um banco de dados de computador seguro e protegido por senha, que registra sua localização no freezer e a hora/data em que foram armazenadas. Uma cópia física registrando as amostras armazenadas também será incluída no CRF. O armazenamento, transporte, utilização e eliminação final da amostra fornecida serão realizados em conformidade com a Lei de Tecidos Humanos do Reino Unido de 2004 e com as Diretivas de Tecidos e Células da UE. Se alguma amostra não for processada imediatamente, ela será armazenada de forma pseudo-anônima para análise posterior. As amostras serão transferidas para o laboratório salivar, Guy's Hospital e serão arquivadas por 10 anos após a conclusão. Depois que a aprovação ética para o estudo expirar, as amostras de sangue, saliva e GCF serão descartadas de acordo com a Lei de Tecido Humano de 2004 e quaisquer alterações à mesma, ou transferidas para um banco de tecidos.

Envio de amostra de Espanha para Reino Unido

As amostras serão colocadas em um iglu que pode conter gelo/gelo seco suficiente para garantir que as amostras sejam mantidas na temperatura correta por mais tempo do que o tempo estimado de viagem. Em seguida, o iglu de poliestireno é parcialmente preenchido com gelo/gelo seco, permitindo espaço para amostras e gelo extra. As amostras podem ser colocadas em um saco plástico lacrado para auxiliar na catalogação. O iglu é então preenchido com gelo seco para cobrir as amostras e um formulário de envio e, adicionalmente, uma cópia da etiqueta de endereço em um saco plástico selado para amostras é incluída. Uma tampa será colocada no iglu e fixada com fita adesiva. Depois disso, o iglu é embrulhado em papel de embrulho marrom resistente e uma etiqueta de endereço e etiquetas de perigo de temperatura muito baixa são anexadas antes da entrega. Será selecionado o meio de transporte mais rápido (ex. avião) para concluir o envio o mais rápido possível.

Avaliação de Segurança

Os investigadores não prevêem quaisquer riscos significativos para o participante envolvido na coleta de amostras, incluindo amostras de sangue, por se tratarem de procedimentos bem estabelecidos. Com base na literatura anterior, um possível risco pode dizer respeito a alguns eventos adversos sistémicos ligeiros/moderados causados ​​pelo regime alimentar para a febre aftosa, incluindo fadiga, fraqueza e dores de cabeça. Existe também um ligeiro risco de desmaio durante ou após a colheita de sangue. Para reduzir este risco, os participantes ficarão em um pedestal semi-reclinado durante toda a amostragem e por cinco minutos após a amostragem. Um pesquisador estará presente com o participante o tempo todo para garantir que não haja quedas ou ferimentos em caso de desmaio. Se ocorrer uma lesão por picada de agulha no examinador durante a coleta da amostra de sangue, ou ocorrer uma lesão por arranhão, procedimentos locais serão implementados para responder a tal incidente. Não se espera que ocorram eventos adversos graves durante o curso do estudo.

Relatórios de Ética

Um Evento Adverso é qualquer sinal, sintoma ou doença desfavorável e não intencional associado ao estudo. Caso ocorra um Evento Adverso, como desmaio durante a coleta de sangue, o investigador informará o Investigador Chefe, para inclusão no arquivo do estudo CRF. Um Evento Adverso Grave (EAG) é um evento que causa a morte, requer a hospitalização do participante, causa incapacidade persistente ou causa um defeito de nascença. Caso isso ocorra, um relatório será registrado dentro de 24 horas após o conhecimento do evento e um relatório ao comitê de ética dentro de 15 dias após o conhecimento do evento. O formulário deverá ser preenchido datilografado e assinado pelo investigador-chefe. O REC principal acusará o recebimento dos relatórios de segurança no prazo de 30 dias.

Conformidade e retirada

Conformidade do assunto

A conformidade do participante será avaliada em cada visita de estudo. Um histórico médico auto-relatado garantirá que o participante não tomou nenhuma ação (por exemplo, começou a participar de outro ensaio clínico) ou desenvolveu uma condição ou começou a tomar medicação (por exemplo, tomando antibióticos sistêmicos) o que é proibido pelos critérios de exclusão. Além disso, a adesão será avaliada com base em exames de sangue levando em consideração as reduções nos níveis circulantes de IGF-1. Isso será registrado em uma lista de verificação no CRF. Cada paciente deve preencher um diário de dieta durante todo o estudo, incluindo ciclos de febre aftosa para pacientes de teste. O não preenchimento do diário alimentar também seria registrado como desistência, devido à importância crucial da dieta para a validade do estudo. Por último, se um participante falhar inesperadamente em comparecer a uma visita de estudo, ele será solicitado a comparecer à clínica na próxima oportunidade possível.

Desistência/abandono de disciplinas

Os participantes poderão desistir do estudo a qualquer momento. Isso seria feito por meio de uma discussão verbal entre o participante e qualquer membro da equipe do estudo, e sua decisão seria registrada em um formulário de retirada por escrito. As razões para a retirada podem ser devido a desconforto físico ou a um grande comprometimento de tempo, por exemplo. Após a conclusão da análise dos dados, onde todos os dados anonimizados seriam recolhidos, os participantes não poderiam mais retirar os seus dados do estudo, o que seria esclarecido na fase inicial de recrutamento. A última data para isso está no final do estudo. Certas circunstâncias podem exigir que a equipe do estudo decida retirar os participantes do ensaio, como o não cumprimento significativo do protocolo, por exemplo, a falta de múltiplas visitas do estudo ou outros eventos que preencheriam os critérios de exclusão. Isto envolveria falar com o participante para informar e explicar-lhe a decisão, e a decisão seria registada num formulário de Retirada por escrito. Se a não conformidade for revelada numa visita de estudo, também será registada na secção “Notas Adicionais” do CRF. Os assuntos não serão substituídos quando os indivíduos se retirarem.

Considerações estatísticas

Cálculo do tamanho da amostra

Nenhum estudo foi publicado utilizando a febre aftosa em pacientes com periodontite. Portanto, nenhum dado sobre viabilidade e tamanho de amostra necessário está disponível na literatura. é muito difícil estimar qual seria o tamanho correto da amostra do estudo e, como consequência, este estudo foi concebido como um piloto interno. Enquanto Browne e colaboradores (1995) sugeriram que seriam necessários 30 pacientes como regra geral para o tamanho da amostra, Kieser & Wassmer (1996) descobriram que um tamanho de amostra piloto entre 20 e 40 minimizaria o tamanho geral da amostra do estudo maior. Seguindo a sugestão de Julious 2009, 12 pacientes por braço do estudo serão recrutados para este estudo.

Análise provisória e critérios de viabilidade/progressão

A decisão de avançar com o ensaio maior (e o tamanho relativo da amostra) dependerá dos critérios de viabilidade/progressão abaixo.

ASPECTOS DE VIABILIDADE CRITÉRIOS DE PROGRESSÃO A SER SATISFEITO

Disponibilidade para serem randomizados ≥ 50% dos pacientes abordados concordam Conformidade autorrelatada com a dieta ≥ 66% dos pacientes do grupo de teste autorrelatam adesão (definida como não mais de 1 dia em que a dieta não foi seguida) Conformidade testada com a dieta ≥ 66 % de pacientes do grupo de teste mostram adesão com base em exames de sangue (definidos como reduções de 20 a 30% nos níveis circulantes de IGF-1) (Wei 2017) Aceitação de amostras de sangue ≥ 66% dos pacientes recrutados têm todas as amostras de sangue coletadas de acordo com o protocolo Ausência de eventos adversos graves Nenhum paciente relata eventos adversos graves que possam estar relacionados à dieta teste

Se todos os critérios acima forem atendidos, será realizada a análise dos dados existentes até 3 meses, utilizando dados dos 24 pacientes do 'piloto interno'. Médias e desvios padrão dos valores de PCR em 3 meses serão usados ​​para calcular o tamanho da amostra necessário para o ensaio maior. O acompanhamento dos pacientes do estudo continuará até 6 meses após o tratamento. Se a diferença entre os grupos para o resultado primário (PCR aos 3 meses) for mínima, resultando num tamanho de amostra muito grande, pode ser tomada a decisão de não avançar para o recrutamento de um grupo maior de pacientes e o recrutamento será interrompido. Porém, os pacientes ainda no estudo serão acompanhados até o último acompanhamento do estudo (180 dias).

Análise estatística

O resultado primário do estudo são os níveis circulantes de PCR 3 meses após o tratamento (teste vs. controle). No entanto, a parte piloto interna/de viabilidade do estudo precisará ser concluída primeiro antes de considerar se deve prosseguir com um tamanho de amostra de estudo totalmente desenvolvido. Se os critérios de viabilidade forem atendidos, a diferença nos níveis de PCR 3 meses após o tratamento entre os grupos será usada para o tamanho da amostra, e um plano estatístico formal será formulado. Diferentes pacotes estatísticos serão utilizados para diferentes finalidades, Stata 14 (StataCorp LLC, College Station, Texas, EUA) será o pacote principal e R (com plugin R-Studio), será utilizado para análises adicionais, ambos com rotinas específicas criado para este estudo. Será aplicado o Teste Shapiro-Wilk para verificar se as variáveis ​​quantitativas analisadas seguem distribuição normal e será realizada transformação logarítmica naquelas que não a seguem. Será descrito o perfil da população e dos grupos de estudo. Os resultados das variáveis ​​qualitativas serão expressos em proporções e as variáveis ​​quantitativas serão expressas como médias e desvio padrão, incluindo os intervalos de confiança de 95%. Também será obtida a distribuição da população para cada um dos parâmetros clínicos, bioquímicos e microbiológicos. Para a análise bivariada será utilizado o teste qui-quadrado para determinar se existe associação estatisticamente significativa entre duas variáveis ​​qualitativas, os dados serão apresentados em forma de tabelas de contingência, quando o teste qui-quadrado não atender às condições de validade Teste exato de Fisher Serão aplicados.

Para comparar as médias de duas variáveis ​​independentes para análises intergrupos, será utilizado o teste T de Student, considerando o teste T de Student para amostras pareadas em análises intragrupo. Caso os pressupostos normais não sejam atendidos, será aplicado o teste Não Paramétrico “Mann-Whitney U”. Para análises intragrupos será utilizada ANOVA para medidas repetitivas ou teste de Friedman. A análise multivariada será realizada por meio de modelo de regressão linear múltipla e regressão logística ordinal introduzindo nele as variáveis ​​independentes com nível de significância menor de 0,20. As condições serão verificadas por análise residual de heterocedasticidade e linearidade. O nível de significância estatística para este estudo será p<0,05.

Regras de interrupção/descontinuação e quebra do código de randomização

Os investigadores não prevêem quaisquer riscos envolvidos na coleta de amostras e na febre aftosa, pois são procedimentos bem estabelecidos. Portanto, os investigadores prevêem que nenhuma parte do estudo precise ser interrompida e o ensaio não precise ser interrompido devido a questões de segurança dos participantes. No entanto, como a febre aftosa não foi testada em pacientes com periodontite, no caso improvável de ocorrer um Evento Adverso Grave, um relatório ao Patrocinador será registrado dentro de 24 horas após o conhecimento do evento e um relatório ao comitê de ética dentro de 15 dias. de aprendizagem do evento. Será então tomada uma decisão se o estudo deve ou não ser interrompido em conjunto com esses órgãos.