Böjt utánzó diéta és parodontitis (FMD) (FMD)

Bevezetés

A parodontitis a parodontium mikrobiális eredetű gyulladásos betegsége. Kimutatták, hogy a fogágygyulladással összefüggő gyulladás nem korlátozódik a parodontiumra, hanem messzemenő következményekkel járhat a szervezet többi részén, és ezt részben a szájüregi mikroorganizmusok szisztémás terjedése közvetítheti. A parodontális terápia 1. és 2. lépése rövid távú akut fázisú gyulladásos válaszreakcióval is társul, amelyet a keringő akut fázisú gyulladásos markerek emelkedése jellemez, amit viszont, ha sikeres, e molekulák hosszabb távú csökkenése követ. Közepes és hosszabb távon ez a perifériás érrendszeri egészség egyéb markereinek változásaival, valamint az anyagcsere-szabályozás legalább 12 hónapig tartó javulásával jár együtt. Ismeretes, hogy a parodontitis kétirányú kapcsolatban áll az anyagcsere zavarokkal és szabályozási zavarokkal. Egy nagyon friss munka megerősítette, hogy a parodontitis a szérum C-reaktív fehérje (CRP) szintjével mérve szisztémás gyulladással jár. Ezenkívül arról számoltak be, hogy az intenzív, nem sebészeti parodontitis kezelés (1. és 2. lépés) a CRP fokozatos csökkenéséhez vezetett 90 nap után, 180 nap után pedig mérsékelt növekedéshez. Úgy gondolják, hogy az anyagcsere-szabályozás javulása javíthatja a parodontális kimeneteleket is, ennek pontos mechanizmusa azonban nem teljesen világos. Számos humán és kísérleti vizsgálat is megjelent a táplálkozás lehetséges hatásairól a parodontitis kezelésére. Egy majmokon végzett tanulmány megállapította, hogy a hosszú távú étrendi kalóriakorlátozás (vitaminokkal és ásványi anyagokkal dúsított étrend) csillapítja a klinikai gyulladást, és csökkenti az akut mikrobiális fertőzés következtében fellépő periodontális károsodás mértékét. Egy másik majmokon végzett kísérletben azonban úgy tűnt, hogy a hosszú távú alacsony kalóriatartalmú étrend (30%-kal kevesebb napi kalóriabevitel, valamint vitaminok és ásványi anyagok) eltérő módon csökkenti a helyi gyulladásos mediátorok termelődését és a gyulladásos fogágybetegség kockázatát a hímeknél, de nem a nőstényeknél. Ezen túlmenően egy állatmodellekről készült közelmúltbeli szisztematikus áttekintés arra a következtetésre jutott, hogy az oxidatív stresszre vagy az immunrendszerre ható makrotápanyagok (azaz az n-3 zsírsav) fontosnak tűnnek a parodontitis megelőzésében vagy kezelésében. Ami a humán kutatást illeti, egy koreai csoport négyhetes testsúlykontroll beavatkozást követően periodontálisan egészséges elhízott embereken a mátrix metalloproteináz (MMP)-8, MMP-9 és interleukin-1β (IL-1β) csökkenését figyelte meg gingival crevicular fluid (GCF). Egy német kutatócsoport arról számolt be, hogy az alacsony szénhidrátbevitelt, az omega-3 zsírsavakban és rostokban gazdag étrendet, a magasabb C- és D-vitamin-értékeket, az állati fehérjék csökkentését és a nitráttartalmú növények célzott bevitelét jelentős mértékben csökkentheti periodontális és ínygyulladás, bár a szerológiai gyulladásos paraméterek és a szubgingivális mikrobiom látszólag változatlanok. A közelmúltban egy tanulmány megállapította, hogy nincs általános összefüggés a nyugati táplálkozási minták (amelyeket a feldolgozott hús, a vörös hús, a vaj, a magas zsírtartalmú tejtermékek, a tojás és a finomított gabonafélék nagyobb bevitele jellemez) vagy a körültekintő táplálkozási minták között (amelyre egy zöldségek, gyümölcsök, hüvelyesek, teljes kiőrlésű gabonák, hal és baromfi nagyobb bevitele) és a fogágygyulladás; ha azonban kizárólag elhízott egyéneket vettünk figyelembe, a nyugati étrend a parodontitis nagyobb kockázatával volt összefüggésben. Egy másik, az étrendi gyulladásos indexen alapuló vizsgálat kimutatta, hogy a gyulladást elősegítő étrend fogyasztása mérsékelten súlyos fogágygyulladással járt az Egyesült Államok felnőtt lakosságában. A böjt újszerű módját vezették be a betegek együttműködésének fokozása érdekében, mivel az emberek általában nem képesek hosszú ideig betartani a szigorú diétát. Különösen a böjt utánzó diéta (FMD), amely a normál kalóriabevitel 30-50%-át tartalmazza 4-7 egymást követő napon, majd havonta egyszer ad libitum újraetetést mutatott, igen ígéretes jótékony hatásokat mutatott a kockázat csökkentése tekintetében. az öregedés, a cukorbetegség, az autoimmunitás, a szív- és érrendszeri betegségek, a neurodegeneráció és a rák tényezői. Összességében továbbra is bizonytalan az időszakos koplalás potenciális szerepe a parodontális klinikai és gyulladásos paraméterekben. Tudomásunk szerint egyetlen tanulmány sem vizsgálta az FMD lehetséges hatását a periodontitis kezelés utáni szisztémás és parodontális válaszreakcióra.

Célok

A tanulmány fő célja annak tesztelése, hogy az éhgyomorra utánzó diéta befolyásolhatja-e a szisztémás és a parodontális választ a nem sebészeti parodontális terápia után. A nullhipotézis az, hogy az éhezést utánzó diéta nem módosítja a lokális és szisztémás gyulladásos kezelés utáni választ.

Dizájnt tanulni

Ez egy kettős vak (eredményértékelő és statisztikus), többközpontú, randomizált klinikai vizsgálat párhuzamos csoportokkal és 1:1 arányú kiosztással, belső pilottal. Minden felvett beteg ugyanazt a protokollt kapja a parodontális terápia során (1. és 2. lépés). Egy csoportot (tesztet) három FMD-ciklusnak vetnek alá. Az FMD program egy növényi alapú diétás program, amelynek célja a böjthöz hasonló hatások elérése, miközben makro- és mikrotápanyagokat is biztosít a böjtölés és a káros hatások minimalizálása érdekében. Az FMD 100%-ban olyan összetevőket tartalmaz, amelyeket általában biztonságosnak (GRAS) tekintenek, és szabadalmaztatott zöldségalapú leveseket, energiaszeleteket, energiaitalokat, ropogtatnivalót, olajbogyót, gyógyteát és kiegészítőket tartalmaznak. A naponta elfogyasztandó termékek mindegyike külön dobozban van, hogy az alanyok megválaszthassák, mikor étkeznek, miközben elkerülik a következő napi összetevők véletlen elfogyasztását. Az FMD egy 5 napos kezelésből áll, amely körülbelül 1100 kilokalóriát biztosít az első napon; körülbelül 750 kilokalória naponta a másodiktól az ötödik napig. Éppen ellenkezőleg, a másik csoport (kontroll) folytatja a szokásos étrendjét.

Tárgyválasztás

Ez egy többközpontú tanulmány. A résztvevőket a Catalunya Nemzetközi Egyetem (UIC), a Madridi Complutense Egyetem (UCM), a Santiago de Compostelai Egyetem, a Murciai Egyetem és a Granada Egyetem klinikai személyzete/hallgatói szűrik a megfelelő kórházakba járó parodontitis betegek körében. A nyomozók évente 24 jogosult résztvevőt várnak, és feltételezik, hogy 70%-uk beleegyezik a tárgyalásba, miután kezdeti érdeklődését fejezte ki.

Tanulmányi eljárások

Tantárgy-toborzás

A Katalóniai Nemzetközi Egyetem, a Complutense Egyetem, a Santiago de Compostela és a Granada Egyetem pácienseit egyénileg keresik meg a toborzás érdekében az egyetemen és a fogorvosi karon belül. A kezdeti érdeklődés kifejezése után a potenciális résztvevők tájékoztató lapot kapnak, és lehetőséget kapnak arra, hogy kérdéseket tegyenek fel a vizsgálati csoport tagjainak e-mailben vagy telefonon. Ha ezután kifejezik részvételi szándékukat, meghívást kapnak egy szűrési látogatásra. Mindenkinek legalább 24 óra, de legfeljebb egy hét áll rendelkezésére, hogy eldöntse, kíván-e részt venni. A magánszemélyek idejüket a tanulmány befejezésekor fizetett összeggel térítik meg.

Szűrési eljárások

A szűrőlátogatás alkalmával a képzett jelentkező vagy tanulmányozó fogorvos beleegyezését kéri, amelyet a résztvevő írásbeli hozzájárulási űrlapján rögzít, amely részletezi a teljes vizsgálati eljárást és az egyes adatgyűjtési módszerekre vonatkozó megállapodás-ellenőrző listát. A beleegyezés megadása után minden regisztrált résztvevő rögzítésre kerül a Résztvevői napló űrlapon. A kezdeti szűrés célja annak biztosítása, hogy minden egyén megfeleljen a vázolt felvételi és kizárási kritériumoknak. Ezt szóbeli előzmények felvételével értékelik, és egy nyomtatott szűrési napló űrlapon rögzítik. A résztvevőknek alá kell vetniük egy parodontológiai vizsgálatot a vizsgálati fogorvostól az alkalmasság biztosítása érdekében.

Randomizálási eljárások és kiosztás elrejtése

A kezdeti központi randomizálást a "Sealed Envelope" módszerrel végzik el a vizsgálatban közvetlenül nem érintett személyzet a Guy's Hospitalban. A fontos befolyásoló tényezők („központ”) esetében az ajánlásoknak megfelelően rétegzett randomizációt kell végezni. Életkor szerinti rétegzésre nem kerül sor, mivel kis mintaméretek esetén a rétegzést egy vagy nagyon kevés tényezőre kell korlátozni, és mivel az életkor befolyását a vizsgálati terv korlátozza, és a statisztikai elemzések során ki kell igazítani. Mindegyik központban a betegeket a két kezelési csoport egyikébe kell besorolni a vizsgálati statisztikus által korábban elkészített randomizációs lista alapján. A lista blokkolt véletlenszerűsítéssel jön létre. Minden központban lezárt borítékot használnak a kiosztás elrejtése érdekében. A résztvevőt a -7/-10. nap és a 0. nap közötti teszt- vagy kontrollkezelésre osztják be. A kezelés kiosztásáról a terapeuta a boríték felnyitásával kap tájékoztatást a kezelési időpont elején.

Minden látogatás ütemezése

Azokat a résztvevőket, akik a személyes megbeszélések vagy a hirdetésekre adott válaszok alapján jelezték érdeklődésüket a részvétel iránt, meghívást kapnak egy átvilágítási látogatásra. Erre, mint minden tanulmányi látogatásra, a Hospital General de Catalunya (Barcelona) és a madridi, Santiago de Compostela, Murcia és Granada odontostomatológiai osztályain (Clinica de Odontologia) kerül sor, és ez körülbelül 45 percet vesz igénybe. Erre a potenciális résztvevő és a vizsgálat fogorvosa számára kölcsönösen megfelelő időpontban és időpontban kerül sor, a rendelkezésre álló klinikai tér keretein belül. Itt először megkérdezik személyes adataikat/kórtörténetüket, és fogorvosi vizsgálaton esnek át. Ha jogosultak, tájékoztatják őket, hogy mikor kezdődik a vizsgálat következő szakasza, és időpontot egyeztetnek a vizsgálat megkezdésére. A kezelést az egyes központok parodontológiai mesterszakának posztgraduális hallgatói látják el.

Egy-két héttel később a -7/-10. napon (alapidőpont vagy 1. látogatás) tájékoztatáson alapuló beleegyezést adnak és írnak alá. Vér-, GCF-, plakk- és székletmintákat vesznek. Ellenőrzik a kórelőzményt, a nemkívánatos eseményeket és az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket, és szájvizsgálatot végeznek, beleértve a fogak számát és fogonként 6 helyen a szondázási mélységet, a recessziót (mm) és a szondázás utáni vérzést. Nagyon felületes profilaxist, motivációt és szájhigiénés utasításokat adunk.

A 0. napon (reggel) (2. vizit) a tesztcsoportba rendelt betegek 5 egymást követő napon át kezdik el az FMD-t. Minden páciens teljes szájú szubgingivális műszeres (PMPR) eljáráson esik át, és megerősítik a részletesebb higiéniai utasításokat. Ellenőrzik a kórelőzményt, a nemkívánatos eseményeket és az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket, valamint szájüregi vizsgálatot végeznek a szövődmények kiszűrése érdekében. Egy képzett, regisztrált dietetikus (az egyik központból) megvitatja a száj- és körömfájást a betegekkel, és felmérést is küld az el nem fogyasztott termékekről és az elfogyasztott extra élelmiszerekről.

Az 1. napon (v3) vér- és GCF-mintákat vesznek. Ellenőrzik a kórelőzményt, a nemkívánatos eseményeket és az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket, szájüregi vizsgálatot végeznek a szövődmények kiszűrése érdekében.

A 7. napon (v4) vér- és GCF-mintákat vesznek. Ellenőrzik a kórelőzményt, a nemkívánatos eseményeket és az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket, szájüregi vizsgálatot végeznek a szövődmények kiszűrése érdekében.

A 45±5. napon (v5) vér- és GCF-mintákat vesznek. Megerősítik a szájhigiénés utasításokat, és biztosítják a supragingivális hámlást polírozással. Az FMD második ciklusát a tesztcsoportba tartozó betegeknél kezdik meg. Ellenőrzik a kórelőzményt, a nemkívánatos eseményeket és az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket, szájüregi vizsgálatot végeznek a szövődmények kiszűrése érdekében.

A 85. ±5. napon (v6) megkezdődik az FMD harmadik ciklusa a tesztcsoportba tartozó betegeknél. Ellenőrzik a kórelőzményt, a nemkívánatos eseményeket és az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket, megerősítik a szájhigiénés utasításokat, és gondoskodnak a supragingivális hámlásról polírozással.

A 90. ±5. napon (v7) a teljes szájú periodontális térképezési méréseket rögzítik. Vérmintákat és GCF mintákat vesznek. Megerősítik a szájhigiénés utasításokat, és szükség esetén szupportív parodontális kezelést is végzünk. Ellenőrzik a kórelőzményt, a nemkívánatos eseményeket és az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket, szájüregi vizsgálatot végeznek a szövődmények kiszűrése érdekében.

A 180 ± 10. napon (v8) fogonként 6 helyen a teljes szájú periodontális diagramméréseket rögzítik: szondázási mélység, recesszió (mm) és vérzés a szondázás után. Vér-, GCF-, plakk- és székletmintákat vesznek. Megerősítik a szájhigiénés utasításokat. Ellenőrzik a kórelőzményt, a nemkívánatos eseményeket és az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket, szájüregi vizsgálatot végeznek a szövődmények kiszűrése érdekében.

*Minden FMD-ciklus során egy-két alkalommal felhívják a betegeket, hogy ellenőrizzék, minden megfelelően halad-e, és megoldják az esetleges problémáikat vagy aggályaikat.

Nyomon követési eljárások

Ha egy résztvevő több (2/3) látogatást kihagy, lemorzsolódásnak tekinthető. A kezelési szándék elemzésében azonban szerepelni fognak.

A tanulmány végének meghatározása

A vizsgálat akkor fejeződik be, ha minden résztvevő befejezte a klinikai időszak összes fázisát, és a biológiai anyag és a klinikai pontszámok feldolgozása/elemzése megtörtént.

Mintagyűjtés/címkézés/naplózás

A vizsgálati látogatás során a mintákat a Katalóniai Nemzetközi Egyetem, a Madridi Complutense Egyetem, a Santiago de Compostelai Egyetem, a Murciai Egyetem és a Granadai Egyetem szakképzett fogorvosai fogják gyűjteni a pácienstől, akik részt vesznek ebben a vizsgálatban. Valamennyi mintatípus gyűjtése során megfelelő kézhigiéniát, illesztett kesztyűt és steril, egyszer használatos vizsgálati eszközöket kell alkalmazni a minták sértetlenségének, valamint a vizsgáló és a résztvevő biztonságának biztosítása érdekében. Az ál-anonimizált címkés csöveket minden látogatás előtt elkészítjük, a címkén a résztvevő számból áll, és a mintatípus megjelölésével pl. G a GCF, B a vér, S a nyál, SubP az íny alatti plakk stb. A mintavétel minden vizit alkalmával történik a klinikai vizsgálat előtt, hogy a fizikai manipuláció ne zavarja meg a mintavételi helyet, vagy ne okozzon enyhe fogínygyulladást vérzés, amely szennyezheti a begyűjtött mintát. A GCF Periopaper® csíkokat (Pro-flow Inc., Amityville, New York, USA) a fogak ínyrésébe kell helyezni, a legmélyebb zsebbel (bukkális szempontok) minden kvadránsban. Ezután azonnal megmérik őket egy kalibrált Periotron 8000 (Pro-Flow Inc., Amityville, New York, USA) elektronikus jelátalakítón, amely számszerűsíti az összegyűjtött GCF mennyiségét. A mérést követően az adott látogatáshoz használt GCF csíkokat -80 ºC-on tárolják egyetlen 2 ml-es csőben, és összegyűjtik a további elemzéshez. A résztvevő karjából 4 ml vénás vért gyűjtenek a Hemogard biztonsági zárókupakkal ellátott, evakuált steril vákuumtartályokba, amelyek az EDTA (etilén-diamin-tetraecetsav) alvadásgátló K2 káliumsóját tartalmazzák, amelyet a tubus belső felületére permeteznek be. A mintákat tapasztalt és képzett phlebotomisták veszik. Az ájulás kockázatának csökkentése érdekében a résztvevők a mintavétel teljes időtartama alatt és a mintavétel után öt percig félig dőlt lábazaton kell lenniük. Egy kutató mindig a résztvevővel van jelen, hogy ne essen el vagy ne szenvedjen sérülést ájulás esetén. A használt tűket egy biztonságos, éles tárgyakat tartalmazó szemetesbe kell dobni. A szérummintákat 10 percig centrifugálják 11 000 RPM-en, majd azonnal 0,2–0,5 ml-es aliquot részekre osztják, és -80 °C-on fagyasztószekrényben tárolják, amíg szükségessé válik az elemzés. A fogíny alatti plakkmintákat a vizsgáló fogorvos a fog bukkális felszínéről gyűjti steril küret segítségével, a fogíny széle alól. A lepedéket minden vizsgálati látogatás alkalmával a legmélyebb zseb helyén (bukkális felületen) lévő fogakról gyűjtik össze. Ezeket a fogakat úgy választottuk ki, hogy jó keverékük legyen az őrlőfogak és a metszőfogak között. A négy fogról összegyűjtött lepedéket 1 ml steril 0,1x Tris-EDTA-ba egyesítik, és -80 °C-on tárolják. A résztvevők otthoni gyűjtőkészleteket kapnak a konzerváló oldatban lévő székletmintavételhez ([http://www.microbiome-standards.org)] http://www.mikrobiome- standards.org) és ezt a mintát a begyűjtést követő 7 napon belül postára adjuk a helyi laboratóriumba. A székletminták laboratóriumba történő átvételekor a mintákat -80 C-on tárolják. Minden biológiailag szennyezett eldobható tárgyat a megfelelő biológiailag veszélyes hulladékgyűjtőbe kell dobni feldolgozás és eltávolítás céljából. Az összes vett mintát rögzítik a résztvevő nyomtatott CRF-jén az adott tanulmányi látogatás során, rögzítve a gyűjtés dátumát és időpontját, valamint a gyűjtő fogorvos kezdőbetűit. Ez is be lesz jelentkezve a tanulmányi Excel táblázatba. Ha egy adott minta nem vehető azon a látogatáson, ennek okát a CRF megfelelő „További megjegyzések” részében közöljük.

Mintaelemzési eljárások

Minden kísérletet a Guy's Hospital Microbiome és Salivary laboratóriumában fognak végezni. A GCF-mintákat felengedjük és PBS-ben (pH 7,2±0,2) eluáljuk, amelyet Easypack Protease Inhibitor Cocktail-lel (Roche) egészítünk ki, Curtis és mtsai. 1988. Röviden, a periopapír csíkokat egy perforált 0,5 ml-es mikrocentrifugacsőbe helyezzük, amelyet egy 1,5 ml-es csőben tartunk. Az elúciós puffert (50 μL) a csíkokra adjuk, és vortex rázógépbe helyezzük 2 percre, majd 15 percig centrifugáljuk 11 000 fordulat/perc mellett 4 ̊C-on. A centrifugálást megismételjük további 50 µl elúciós pufferrel a csíkokhoz, hogy kb. 90 µl teljes eluált GCF-et kapjunk. A fehérjekoncentrációt szarvasmarha-szérumalbuminnal (Sigma) kalibrált LVis lemez (BMG Labtech CLARIOstar) segítségével határozzuk meg. A kiválasztott analitok GCF-elemzését a Luminex végzi el. A mintákat a KCL Host-Microbiome Interactions Központban dolgozzák fel, a Guys Tower Wing 17. f. A plakk- és székletmintákból DNS-kivonást végeznek laboratóriumunkban szokásos eljárások szerint, és következő generációs DNS-szekvenálással elemezzük a szubgingivális mikrobióta jellemzésére, hogy azonosítsuk és meghatározzuk a kulcsfontosságú periodontális bakteriális kórokozók szintjét és a mikrobiális közösség egészét érintő változásokat a kezelt helyeken. teszt- és vezérlőprotokollokkal egyaránt. A vérmintákat citokinekre, akut fázisú fehérjékre és gyulladásos markerekre vizsgálják különféle technikákkal, mint például Western blot vagy enzim-linked immunosorbent assay (ELISA), amelyek meghatározzák ezek jelenlétét és mennyiségét a vérben. A Gingival Crevicular Fluidot gyulladásos mediátorok, antitestek, peptidek és citokinek szempontjából elemzik, ismét olyan technikák alkalmazásával, mint például az ELISA. A keringő IGF-1 szintjét, az éhgyomri vércukorszintet és a vér β-hidroxibutirát szintjét értékelik az FMD-nek való megfelelés ellenőrzése érdekében.

ELISA (nagy érzékenységű kétoldali enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat): IL-6 kimutatás.

Cobas Integra 700 (automatikus immunturbidimetriás nagy érzékenységű vizsgálat): HsCRP kimutatás.

Az ezekből a kísérletekből származó adatokat biztonságos, jelszóval védett King's számítógépeken tárolják, beleértve a Salivary és Microbiome laboratóriumokban lévőket, valamint a King's által biztosított tanulmányozó laptopot.

Mintatárolási eljárások

A vér-, nyál-, plakk- és GCF-mintákat -80°C-on, biztonságos, zárt HTA-fagyasztókban tárolják a Katalóniai Nemzetközi Egyetem, a Madridi Complutense Egyetem, a Santiago de Compostelai Egyetem és a Granadai Egyetem laboratóriumaiban. Ez biztosítja a mintafeldolgozásra való felkészültség hosszú távú stabilitását. A gyűjtést követően a székletmintákat a betegek lezárt, előre lebélyegzett borítékban küldik el minden résztvevő központba. Tárolásuk során minden minta fizikai épségét ellenőrzik, majd a lefagyasztandó mintákat egy jelszóval védett, biztonságos számítógépes adatbázisba bejelentkeztetik, amely rögzíti a fagyasztóban való elhelyezkedésüket és a tárolás idejét/dátumát. A tárolt mintákat rögzítő fizikai nyomtatott példány is megjelenik a CRF-en. A minta tárolása, szállítása, felhasználása és végső ártalmatlanítása az Egyesült Királyság 2004. évi emberi szöveti törvényének és az EU szövetekről és sejtekről szóló irányelveinek megfelelően történik. Ha bármely mintát nem dolgoznak fel azonnal, azokat álnévtelenül tárolják további elemzés céljából egy későbbi időpontban. A mintákat a Salivary laboratóriumba, a Guy's Hospitalba szállítják, és a befejezést követően 10 évig archiválják. A vizsgálat etikai engedélyének lejárta után a vér-, nyál- és GCF-mintákat a 2004-es Human Tissue Act-nek és annak bármely módosításának megfelelően megsemmisítik, vagy egy szövetbankba továbbítják.

Minta szállítása Spanyolországból az Egyesült Királyságba

A mintákat egy jégkunyhóban helyezik el, amely elegendő jeget/szárazjeget tartalmaz annak biztosítására, hogy a mintákat a becsült szállítási időnél tovább tartsák a megfelelő hőmérsékleten. Ezután a polisztirol jégkunyhót részben megtöltik jéggel/szárazjéggel, így helyet biztosítanak a mintáknak és az extra jégnek. A minták lezárt műanyag zacskóba helyezhetők a katalogizálás megkönnyítése érdekében. A jégkunyhót ezután szárazjéggel töltik meg, hogy befedjék a mintákat, és egy feladási űrlapot, valamint a címke egy példányát egy lezárt műanyag mintazsákban. Az iglura fedelet helyeznek, és csomagolószalaggal rögzítik. Ezt követően a jégkunyhót erős barna csomagolópapírba csomagolják, és a szállítás előtt címcímkét és nagyon alacsony hőmérsékletű veszélyt jelentő címkéket is felragasztanak. A leggyorsabb szállítóeszközt (pl. repülőt) választják ki, hogy a lehető leggyorsabban teljesítsék a szállítást.

Biztonsági értékelés

A vizsgálók nem látnak előre jelentős kockázatot a mintavételben érintett résztvevő számára, beleértve a vérmintákat is, mivel ezek jól bevált eljárások. A korábbi irodalom alapján a lehetséges kockázat az FMD diéta által okozott enyhe/közepes szisztémás nemkívánatos eseményekre vonatkozhat, beleértve a fáradtságot, gyengeséget és fejfájást. Fennáll az ájulás veszélye is a vérvétel alatt vagy azt követően. Ennek a kockázatnak a csökkentése érdekében a résztvevők a mintavétel teljes időtartama alatt és a mintavétel után öt percig félig dőlt lábazaton kell lenniük. Egy kutató mindig a résztvevővel van jelen, hogy ne essen el vagy ne szenvedjen sérülést ájulás esetén. Ha a vérminta vétele során a vizsgáló tűszúrásos sérülést szenved, vagy karcolásos sérülés történik, helyi eljárásokat alkalmaznak az ilyen esetek kezelésére. A vizsgálat során nem várható súlyos mellékhatás.

Etikai jelentés

Nemkívánatos esemény a vizsgálattal kapcsolatos bármely kedvezőtlen és nem szándékos jel, tünet vagy betegség. Ha nemkívánatos esemény fordul elő, például ájulás a vérvétel során, a vizsgáló tájékoztatja a vizsgálatvezetőt, hogy bekerüljön a CRF vizsgálati fájlba. A súlyos nemkívánatos esemény (SAE) olyan esemény, amely halált okoz, a résztvevő kórházi kezelését igényli, tartós rokkantságot okoz vagy születési rendellenességet okoz. Ha ez megtörténik, az eseményről való tudomásszerzéstől számított 24 órán belül jelentést kell készíteni, az etikai bizottságnak pedig az eseményről való tudomásszerzéstől számított 15 napon belül. A nyomtatványt gépírással kell kitölteni, és a fővizsgálónak alá kell írnia. A fő REC 30 napon belül visszaigazolja a biztonsági jelentések kézhezvételét.

Megfelelés és visszavonás

Tantárgyi megfelelés

A résztvevők megfelelőségét minden tanulmányi látogatás alkalmával értékelik. A saját bevallásban szereplő kórtörténet biztosítja, hogy a résztvevő nem tett semmilyen intézkedést (például nem kezdett részt venni egy másik klinikai vizsgálatban), nem alakult ki valamilyen állapota, illetve nem kezdett el gyógyszert szedni (pl. szisztémás antibiotikumok szedése), amelyet a kizárási kritériumok tiltanak. Ezenkívül a megfelelést vérvizsgálat alapján értékelik, figyelembe véve az IGF-1 keringő szintjének csökkenését. Ez rögzítésre kerül egy ellenőrző listán a CRF-en. Minden betegnek étrendi naplót kell töltenie a vizsgálat során, beleértve a vizsgált betegek száj- és körömfájás ciklusait is. Az étrendi napló kitöltésének elmulasztása is lemorzsolódásként kerül rögzítésre, mivel az étrend döntő fontosságú a vizsgálat érvényessége szempontjából. Végül, ha egy résztvevő váratlanul elmulasztja a tanulmányi látogatást, a lehető legközelebbi alkalommal felkérik, hogy menjen el a klinikára.

Tantárgyak visszavonása / lemorzsolódása

A résztvevők bármikor kiléphetnek a vizsgálatból. Ez a résztvevő és a vizsgálati csoport bármely tagja közötti szóbeli megbeszélésen keresztül történik, és döntésüket egy írásos visszavonási űrlapon rögzítik. A visszavonás oka lehet például a fizikai kényelmetlenség vagy a túlzott időtöltés. Az adatelemzés befejezése után, ahol az összes anonimizált adatot összegyűjtik, a résztvevők többé nem vonhatják ki adataikat a vizsgálatból, ami a felvétel kezdeti szakaszában egyértelművé válna. Ennek legkésőbbi időpontja a tanulmány végén van. Bizonyos körülmények megkövetelhetik a vizsgálati csoporttól, hogy úgy döntsön, hogy visszavonja a résztvevőket a vizsgálatból, ilyen például a protokoll jelentős megsértése, például több vizsgálati látogatás hiánya vagy egyéb olyan események, amelyek teljesítik a kizárási kritériumokat. Ez magában foglalja a résztvevővel való beszélgetést, hogy tájékoztassák és elmagyarázzák a döntést, és a döntést egy írásos elállási űrlapon rögzítsék. Ha egy tanulmányút során a meg nem felelés kiderül, azt a CRF „További megjegyzések” részében is rögzítik. Az alanyok nem cserélődnek le, ha az egyének visszalépnek.

Statisztikai megfontolások

Mintaméret számítás

Nem publikáltak vizsgálatokat az FMD-ről parodontitiszes betegeken. Ezért az irodalomban nem állnak rendelkezésre adatok a megvalósíthatóságról és a szükséges mintanagyságról. nagyon nehéz megbecsülni, hogy mekkora lenne a helyes vizsgálati mintanagyság, ezért ez a tanulmány belső pilotként készült. Míg Browne és munkatársai (1995) azt javasolták, hogy hüvelykujjszabályként 30 betegre van szükség a minta méretéhez, Kieser és Wassmer (1996) úgy találta, hogy a 20 és 40 közötti kísérleti mintaméret minimalizálná a nagyobb vizsgálat teljes mintanagyságát. Julious 2009 javaslatát követően vizsgálati ágonként 12 beteget vesznek fel ebbe a vizsgálatba.

Időközi elemzés és megvalósíthatósági/előrehaladási kritériumok

A nagyobb próbával való továbblépésre vonatkozó döntés (és a relatív mintanagyság) az alábbi megvalósíthatósági/előrehaladási kritériumoktól függ.

MEGVALÓSÍTHATÓSÁGI SZEMPONTOK ELÉRHETŐSÉGI KRITÉRIUMOK

Véletlenszerű besorolási hajlandóság A megkeresett betegek ≥ 50%-a egyetért Diéta betartásának saját bevallása ≥ A tesztcsoportban részt vevő betegek 66%-a saját maga jelentette be a megfelelőséget (meghatározása szerint legfeljebb 1 nap, amikor nem tartották be a diétát) Diéta betartásának tesztelése ≥ 66 A tesztcsoportban részt vevő betegek %-a megfelelt a vérvizsgálat alapján (20-30%-os csökkenés a keringő IGF-1 szintjében) (Wei, 2017) Vérminták elfogadása A toborzott betegek ≥ 66%-ánál minden vérmintát vettek a protokoll szerint. Hiányzás súlyos nemkívánatos eseményekről Egyetlen beteg sem számolt be olyan súlyos nemkívánatos eseményekről, amelyek összefüggésben állhatnak a tesztdiétával

Ha a fenti kritériumok mindegyike teljesül, a 24 „belső kísérleti” beteg adatai alapján 3 hónapig a meglévő adatok elemzésére kerül sor. A nagyobb vizsgálathoz szükséges mintanagyság kiszámításához a 3 hónapos CRP-értékek átlagait és szórását fogják használni. A vizsgálatban részt vevő betegek nyomon követése a kezelést követő 6 hónapig folytatódik. Ha a csoportok közötti különbség az elsődleges kimenetel (CRP 3 hónapnál) tekintetében minimális, ami nagyon nagy mintát eredményez, akkor döntés születhet arról, hogy nem haladunk tovább nagyobb betegcsoport toborzása felé, és a toborzás leáll. A vizsgálatban még részt vevő betegeket azonban az utolsó vizsgálati követésig (180 napig) nyomon követik.

Statisztikai analízis

A vizsgálat elsődleges eredménye a keringő CRP-szint a kezelés után 3 hónappal (teszt vs. kontroll). Mindazonáltal a vizsgálat belső kísérleti/megvalósíthatósági részét kell először befejezni, mielőtt megfontolnák, hogy folytassuk-e a teljes teljesítményű vizsgálati mintamérettel. Ha a megvalósíthatósági kritériumok teljesülnek, a kezelés után 3 hónappal a csoportok közötti CRP-szintek különbségét alkalmazzák a minta méretéhez, és formális statisztikai tervet készítenek. Különböző statisztikai csomagok kerülnek felhasználásra különböző célokra, a Stata 14 (StataCorp LLC, College Station, Texas, USA) lesz a fő csomag, és az R (R-Studio bővítménnyel) további elemzésekre szolgál, mindkettő sajátos rutinnal. ehhez a tanulmányhoz készült. A Shapiro-Wilk tesztet alkalmazzák annak ellenőrzésére, hogy az elemzett kvantitatív változók normális eloszlást követnek-e, és logaritmikus transzformációt hajtanak végre azokban, amelyek nem követik azt. Leírjuk a populáció és a vizsgálati csoportok profilját. A minőségi változók eredményeit arányokban, a mennyiségi változókat pedig átlagban és szórással fejezzük ki, beleértve a 95%-os konfidencia intervallumokat is. A populáció megoszlását is megkapjuk az egyes klinikai, biokémiai és mikrobiológiai paraméterek szerint. A kétváltozós analízishez khi-négyzet tesztet használunk annak megállapítására, hogy van-e statisztikailag szignifikáns összefüggés két kvalitatív változó között, az adatokat kontingenciatáblázatként jelenítjük meg, ha a Chi-négyzet teszt nem felel meg az érvényességi feltételeknek Fisher-féle egzakt teszt kerül alkalmazásra.

Két független változó átlagának összehasonlításához a csoportközi elemzésekhez a Student-féle T-próbát használjuk, figyelembe véve a Student-féle T-próbát a páros mintákra a csoporton belüli elemzéseknél. Ha a normál feltevések nem teljesülnek, a Paraméter nélküli „Mann-Whitney U” teszt kerül alkalmazásra. A csoporton belüli elemzésekhez az ismétlődő mérések ANOVA-ját vagy a Friedman-tesztet használjuk. A többváltozós elemzést többszörös lineáris regressziós modell és ordinális logisztikus regresszió segítségével hajtjuk végre, amelybe bevezetjük az alacsonyabb, 0,20-as szignifikanciaszintű független változókat. A feltételeket a heteroszkedaszticitás és a linearitás maradékelemzésével ellenőrizzük. A statisztikai szignifikancia szintje ennél a vizsgálatnál p<0,05 lesz.

A leállítási / leállítási szabályok és a véletlenszerűsítési kód feltörése

A vizsgálók nem látnak előre semmilyen kockázatot a mintavétellel és az FMD-vel kapcsolatban, mivel ezek jól bevált eljárások. Ezért a vizsgálók úgy látják, hogy a vizsgálat egyetlen részét sem kell megszakítani, és a vizsgálatot nem kell leállítani a résztvevők biztonsági aggályai miatt. Mivel azonban az FMD-t nem vizsgálták fogágygyulladásos betegeken, abban a valószínűtlen esetben, ha súlyos nemkívánatos esemény következik be, a szponzornak szóló jelentést az eseményről való tudomásszerzéstől számított 24 órán belül, az etikai bizottságnak pedig 15 napon belül jelentést készítenek. az esemény megismeréséről. Ezután döntés születik arról, hogy a vizsgálatot le kell-e állítani ezekkel a szervekkel együtt.