急性脳血管症候群における細胞外小胞表面マーカー。 (ElViS-ACS)
脳卒中の診断と予後に対する最終的な血液バイオマーカーの臨床的意味は限定的である。その主な理由は、臨床評価とスケール（脳卒中の重症度を提供する）または神経画像検査（病変の正確なサイズを提供する）の方が、臨床転帰を予測するためのより信頼性の高い予測因子であるためである。 臨床現場では、臨床像や画像によるサポートが限られている状況で医師の方向性を示すのに役立つバイオマーカーを見つけることがより有用です。
一過性脳虚血発作（TIA）は、脳虚血プロセスを確認し、脳卒中模倣から区別するためにバイオマーカーが重要となる古典的な例を表しています。 TIA の診断バイオマーカーが研究されていますが、潜在的な候補はどれも TIA 診断に十分な精度に達していません。 私たちのグループは、細胞外小胞（EV）がTIA患者の脳虚血を検出するためのバイオマーカーとして有用である可能性があることを発見しました。これは、EV表面抗原プロファイルが、脳虚血によって引き起こされる可能性が非常に高いと判断される一時的な症状のある患者では異なるようであるためです。脳虚血による症状が起こりにくい患者と比較して。 私たちの研究は、TIAおよび脳卒中イベントを正しく診断および分類し、それらをTIAまたは脳卒中模倣物と区別する可能性を拡大する上で、血液由来EV分析の有望な役割を認識する科学界の関心を高め、管理および治療における将来の重要な影響をもたらしました。急性虚血性脳血管症候群の患者。 私たちのアプローチの妥当性は、より大規模な前向きの多施設研究でテストする必要があります。
調査の概要
詳細な説明
細胞外小胞の特性評価 細胞外小胞 (EV) は、事前に除去された血清サンプルで特性評価されます (血液サンプルの移送と管理を参照)。 EV は、ナノ粒子追跡分析、ウェスタンブロット、ビーズベースのフローサイトメトリー (直接および逆アプローチ)、および ELISA によって特徴付けられます。
405 nm レーザーを搭載した NanoSight LM10 (Malvern Instruments、英国) と Nanoparticle Tracking Analysis NTA 2.3 分析ソフトウェアを使用したナノ粒子追跡分析 (NTA) により、血清ナノ粒子 (NP) の直径と濃度を評価します。 カメラはEVのブラウン運動を記録し、mLあたりのEVのサイズと数はストークス・アインシュタイン方程式によって計算されます。 分析ごとに 60 秒のビデオが 3 つ記録されます。
ウェスタンブロット分析は、EV 免疫捕捉後のタンパク質溶解物に対して実行されます (EV 特異的テトラスパニン、CD9、CD63、および CD81 に対する抗体で覆われたビーズを使用)。 代表的なサンプルのブロットを、EV の表面または内部で発現する特定のマーカー (TSG101、シンテニン-1、CD81、Alix) および潜在的な汚染物質 (GRP94、アポリポタンパク質 A1、アポリポタンパク質 B48) に対する一次抗体とインキュベートします。
EV プロファイリングは、前述のように、MACSPlex ヒト エキソソーム キット (Miltenyi Biotec、ベルギッシュ グラードバッハ、ドイツ) を使用した、標準化されたマルチプレックス ビーズベースのフローサイトメトリー アッセイを使用して実行されます。 22 EV 膜上に一般的に発現する 37 種類の異なる表面抗原 (活性化血小板、内皮、炎症細胞のマーカーを含む) の検出が同時に実行されます。 各マーカーの MFI 値からバックグラウンドが差し引かれ、CD9、CD63、および CD81 の平均蛍光強度レベル (MFI) を使用して正規化されます。 発現レベルは、各EV表面抗原(中央値および四分位範囲)の正規化MFI(nMFI;%)として報告されます。
マルチプレックスアッセイによる最初のスクリーニングの後、単一の候補 EV バイオマーカーが、リバースフローサイトメトリーおよび ELISA 技術のいずれかによって確認されます。
リバースフローサイトメトリーアッセイは、CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro) に対する抗体でコーティングされたキャプチャービーズによって EV を単離することによって実行され、その後、初期段階での患者の診断に関連する、単一の EV 表面抗原に対する蛍光色素結合抗体とインキュベートされます。 MACSPlex アッセイによるスクリーニング。 アイソタイプが一致する抗体とともにインキュベートされたビーズ、および小胞の非存在下でインキュベートされたビーズは、対照として機能します。 候補 EV バイオマーカーは、メーカーの指示に従って特定の抗体を使用する ELISA 技術によっても確認されます。
研究の種類
入学 (推定)
連絡先と場所
研究連絡先
- 名前：Carlo Walter Cereda, PI
- 電話番号：+41918116691
- メール：carlo.cereda@eoc.ch
研究連絡先のバックアップ
- 名前：Giovanni Bianco
- 電話番号：+41918117073
- メール：giovanni.bianco@eoc.ch
研究場所
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Ticino
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Lugano、Ticino、スイス、CH-6900
- 募集
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
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主任研究者：
- Carlo Cereda
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コンタクト：
- Carlo Cereda, MD
- 電話番号：+41 91 811 6691
- メール：carlo.cereda@eoc.ch
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副調査官：
- Giovanni Bianco
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副調査官：
- Lucio Barile
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
- 大人
- 高齢者
健康ボランティアの受け入れ
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
影響を受ける：
I. 症状発現から48時間以内の虚血性軽度脳卒中（血管病因と推定される局所的脳機能の急性喪失およびNIHSS ≤327、28）の疑い、または II． TIA（24時間未満持続する局所性神経症状の急性発症として定義され、紹介時の脳虚血によって引き起こされると推定される）19 III． I.またはIIに似た症状。 非虚血性状態が事象の原因である可能性が高いが、その疑いが強い。
2) 年齢 18 歳以上。 3) 脳磁気共鳴画像診断が入院後 48 ～ 72 時間以内に実施される場合。 4) ベースラインの CT/MRI に出血がない場合。 5) インフォームドコンセントが得られた場合。
除外基準:
- 眼性TIA（黒内障真黒症）;
- MRIの禁忌。
- 妊娠;
- 急性/慢性炎症性疾患の併発（感染症、自己免疫疾患など）。
- 付随する血液疾患。
- 30日以内の中枢神経系感染症。
- 30日以内の重度の頭部外傷。
- 90日以内に大手術。
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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脳卒中
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患者はEV分析のために血液サンプルを採取されます。EVは、ナノ粒子追跡分析、ウェスタンブロット、ビーズベースのフローサイトメトリー（直接および逆アプローチ）、およびELISAによって特徴付けられます。 NanoSight LM10を用いたナノ粒子追跡解析(NTA)により、血清ナノ粒子(NP)の直径と濃度を評価します。 ウェスタンブロット分析は、EV 免疫捕捉後のタンパク質溶解物に対して実行されます (EV 特異的テトラスパニン、CD9、CD63、および CD81 に対する抗体で覆われたビーズを使用)。 EV プロファイリングは、前述のように、MACSPlex ヒト エキソソーム キット (Miltenyi Biotec、ベルギッシュ グラードバッハ、ドイツ) を使用した、標準化されたマルチプレックス ビーズベースのフローサイトメトリー アッセイを使用して実行されます。 22 EV 膜上に一般的に発現する 37 種類の異なる表面抗原 (活性化血小板、内皮、炎症細胞のマーカーを含む) の検出が同時に実行されます。 |
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TIA
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患者はEV分析のために血液サンプルを採取されます。EVは、ナノ粒子追跡分析、ウェスタンブロット、ビーズベースのフローサイトメトリー（直接および逆アプローチ）、およびELISAによって特徴付けられます。 NanoSight LM10を用いたナノ粒子追跡解析(NTA)により、血清ナノ粒子(NP)の直径と濃度を評価します。 ウェスタンブロット分析は、EV 免疫捕捉後のタンパク質溶解物に対して実行されます (EV 特異的テトラスパニン、CD9、CD63、および CD81 に対する抗体で覆われたビーズを使用)。 EV プロファイリングは、前述のように、MACSPlex ヒト エキソソーム キット (Miltenyi Biotec、ベルギッシュ グラードバッハ、ドイツ) を使用した、標準化されたマルチプレックス ビーズベースのフローサイトメトリー アッセイを使用して実行されます。 22 EV 膜上に一般的に発現する 37 種類の異なる表面抗原 (活性化血小板、内皮、炎症細胞のマーカーを含む) の検出が同時に実行されます。 |
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ストロークミミック
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患者はEV分析のために血液サンプルを採取されます。EVは、ナノ粒子追跡分析、ウェスタンブロット、ビーズベースのフローサイトメトリー（直接および逆アプローチ）、およびELISAによって特徴付けられます。 NanoSight LM10を用いたナノ粒子追跡解析(NTA)により、血清ナノ粒子(NP)の直径と濃度を評価します。 ウェスタンブロット分析は、EV 免疫捕捉後のタンパク質溶解物に対して実行されます (EV 特異的テトラスパニン、CD9、CD63、および CD81 に対する抗体で覆われたビーズを使用)。 EV プロファイリングは、前述のように、MACSPlex ヒト エキソソーム キット (Miltenyi Biotec、ベルギッシュ グラードバッハ、ドイツ) を使用した、標準化されたマルチプレックス ビーズベースのフローサイトメトリー アッセイを使用して実行されます。 22 EV 膜上に一般的に発現する 37 種類の異なる表面抗原 (活性化血小板、内皮、炎症細胞のマーカーを含む) の検出が同時に実行されます。 |
この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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TIA模倣物とTIAの区別
時間枠：発症から72時間
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TIAをTIA模倣物（非虚血性イベント）から区別するために、構造化された臨床（PREDISCスコア）および画像評価（脳MRI）に追加されたEVプロファイリング（小胞表面に発現した抗原の分析）のパフォーマンスを決定します。
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発症から72時間
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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TIAと脳卒中の区別
時間枠：急性期、3か月および12か月
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TIA（急性病変のMRI陰性）と急性虚血性脳卒中（AIS、MRIで確認）を区別するためのEVプロファイリングのパフォーマンスを決定します。
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急性期、3か月および12か月
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脳卒中の病因
時間枠：急性期、3か月および12か月
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虚血性イベントの事前に指定された原因を分類するためのEVプロファイリングのパフォーマンスを決定します。
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急性期、3か月および12か月
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協力者と研究者
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (推定)
研究の完了 (推定)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
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