Extracelluláris vesicula felszíni markerek akut cerebrovascularis szindrómákban. (ElViS-ACS)
Az esetleges vérbiomarkerek klinikai jelentősége a stroke diagnózisában és prognózisában korlátozott lenne, főként azért, mert a klinikai értékelés és skálák (amelyek a stroke súlyosságát biztosítják) vagy a neuroimaging (a lézió pontos méretét biztosítják) megbízhatóbb előrejelzők a klinikai kimenetel előrejelzésében. A klinikai gyakorlatban hasznosabb lenne egy olyan biomarkert találni, amely segíthet abban, hogy az orvos tájékozódjon olyan körülmények között, amelyekben a klinikai kép és a képalkotás csak korlátozottan támogat.
A tranziens iszkémiás rohamok (TIA-k) olyan klasszikus példát képviselnek, amelyre egy biomarker érdekes lehet az agy ischaemiás folyamatának megerősítésére és megkülönböztetésére a stroke utánzótól. A TIA diagnosztikai biomarkereit vizsgálták, de egyik lehetséges jelölt sem ért el kellő pontosságot a TIA diagnózisához. Munkacsoportunk azt találta, hogy az extracelluláris vesiculák (EV-k) hasznosak lehetnek biomarkerekként a TIA-ban szenvedő betegek agyi iszkémiájának kimutatására, mivel az EV-felszíni antigénprofil eltérőnek tűnik az átmeneti tünetekkel rendelkező betegeknél, amelyeket nagy valószínűséggel agyi ischaemia okoz. azokhoz a betegekhez képest, akiknek a tünetei kevésbé voltak valószínűek agyi ischaemia miatt. Tanulmányunk felkeltette az érdeklődést a tudományos közösségben, mivel felismerték a vérből származó elektromobilitás elemzésének ígéretes szerepét a TIA és a stroke események helyes diagnosztizálásában és osztályozásában, a TIA-tól vagy a stroke-utánzóktól való megkülönböztetésében, ami fontos jövőbeli következményekkel jár a kezelésben és a terápiában. az akut ischaemiás cerebrovascularis szindrómában szenvedő betegek körében. megközelítésünk érvényességét egy nagyobb, prospektív, többközpontú tanulmányban kell tesztelni.
A tanulmány áttekintése
Állapot
Körülmények
Beavatkozás / kezelés
Részletes leírás
Az extracelluláris vezikulák jellemzése Az extracelluláris vezikulák (EV-k) jellemzése előzetesen tisztított szérummintákban történik (lásd a vérminták átvitelét és kezelését). Az elektromos járműveket nanorészecske-követő analízis, Western blot, gyöngy-alapú áramlási citometria (direkt és inverz megközelítés) és ELISA fogja jellemezni.
A szérum nanorészecskék (NP-k) átmérőjét és koncentrációját nanorészecskék nyomkövető analízissel (NTA) értékeljük NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Egyesült Királyság) segítségével, amely 405 nm-es lézerrel és Nanoparticle Tracking Analysis NTA 2.3 analitikai szoftverrel van felszerelve. Egy kamera rögzíti az elektromos járművek Brown-féle mozgását, és az elektromos járművek milliliterenkénti méretét és számát a Stokes-Einstein egyenlet alapján számítják ki. Minden elemzéshez három 60 másodperces videó kerül rögzítésre.
A Western Blot analízist fehérjelizátumon végezzük az EV immuno-befogása után (EV-specifikus tetraspaninok, CD9, CD63 és CD81 elleni antitestekkel borított gyöngyök felhasználásával). A reprezentatív minták blotjait a felszínen vagy az EV-ken belül expresszált specifikus markerek (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) és potenciális szennyező anyagok (GRP94, Apolipoprotein A1, Apolipoprotein B48) elleni primer antitestekkel inkubálják.
Az EV-profilozást standardizált multiplex gyöngy alapú áramlási citometrikus vizsgálattal végezzük, a MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Németország) használatával, a korábban leírtak szerint. 22 Az EV membránon általánosan kifejezett 37 különböző felületi antigén kimutatása (beleértve az aktivált vérlemezkékből, endotéliumból és gyulladásos sejtekből származó markereket) egyidejűleg történik. A hátteret kivonjuk az egyes markerek MFI-értékéből, majd a CD9, CD63 és CD81 átlagos fluoreszcencia intenzitási szintjei (MFI) alapján normalizáljuk. Az expressziós szinteket normalizált MFI-ként (nMFI; %) jelentik minden egyes EV-felületi antigénre (középérték és interkvartilis tartomány).
A multiplex vizsgálattal végzett kezdeti szűrést követően az egyetlen jelölt EV biomarker reverz áramlási citometriával és ELISA technikákkal megerősítésre kerül.
A fordított áramlású citometrikus vizsgálatot úgy hajtják végre, hogy az EV-ket befogó gyöngyökkel izolálják, amelyeket CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro) elleni antitestekkel vonnak be, majd egyetlen EV felszíni antigén elleni fluorokrómmal konjugált antitestekkel inkubálják, amelyek a páciens diagnózisához kapcsolódnak a kezdeti diagnózis során. szűrés MACSPlex assay segítségével. Az izotípusnak megfelelő antitestekkel inkubált gyöngyök és a hólyagok hiányában inkubált gyöngyök szolgálnak kontrollként. A jelölt EV biomarkereket ELISA technikával is megerősítik, specifikus antitestek felhasználásával a gyártó utasításai szerint.
Tanulmány típusa
Beiratkozás (Becsült)
Kapcsolatok és helyek
Tanulmányi kapcsolat
- Név: Carlo Walter Cereda, PI
- Telefonszám: +41918116691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
Tanulmányozza a kapcsolattartók biztonsági mentését
- Név: Giovanni Bianco
- Telefonszám: +41918117073
- E-mail: giovanni.bianco@eoc.ch
Tanulmányi helyek
-
-
Ticino
-
Lugano, Ticino, Svájc, CH-6900
- Toborzás
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
-
Kutatásvezető:
- Carlo Cereda
-
Kapcsolatba lépni:
- Carlo Cereda, MD
- Telefonszám: +41 91 811 6691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
-
Alkutató:
- Giovanni Bianco
-
Alkutató:
- Lucio Barile
-
-
Részvételi kritériumok
Jogosultsági kritériumok
Tanulmányozható életkorok
- Felnőtt
- Idősebb felnőtt
Egészséges önkénteseket fogad
Mintavételi módszer
Tanulmányi populáció
Leírás
Bevételi kritériumok:
Hatására:
I. Ischaemiás minor stroke gyanúja (a fokális agyi funkció akut elvesztése feltételezett vaszkuláris etiológiával és NIHSS ≤327, 28) a tünetek megjelenését követő 48 órán belül vagy II. TIA (definíció szerint a fokális neurológiai tünetek akut megjelenése, amely 24 óránál rövidebb ideig tart, és amelyet a beutaló időpontjában feltételezhetően agyi ischaemia okoz)19 III. I. vagy II.-t utánzó tünetek. azzal a nagy gyanúval, hogy az esemény oka nem ischaemiás állapot;
2) életkor ≥18 év; 3) ha a felvételtől számított 48-72 órán belül agyi mágneses rezonancia képalkotást végeznek; 4) ha a kiindulási CT/MRI vérzés nélküli; 5) tájékozott hozzájárulás megszerzése esetén.
Kizárási kritériumok:
- szem TIA (amaurosis fugax);
- az MRI ellenjavallatai;
- terhesség;
- egyidejű akut/krónikus gyulladásos betegségek (például fertőzések, autoimmun betegség);
- egyidejű hematológiai betegségek;
- központi idegrendszeri fertőzés 30 napon belül;
- súlyos fejsérülés 30 napon belül;
- nagy műtét 90 napon belül.
Tanulási terv
Hogyan készül a tanulmány?
Tervezési részletek
Kohorszok és beavatkozások
Csoport / Kohorsz |
Beavatkozás / kezelés |
|---|---|
|
Stroke
|
A betegek vérmintát vesznek az EV analízishez: az EV-ket nanorészecske-követő analízissel, Western blot-tal, gyöngy-alapú áramlási citometriával (direkt és inverz megközelítéssel) és ELISA-val jellemezzük. A szérum nanorészecskék (NP-k) átmérőjét és koncentrációját nanorészecske-követő analízissel (NTA) értékeljük NanoSight LM10 segítségével. A Western Blot analízist fehérjelizátumon végezzük az EV immuno-befogás után (EV-specifikus tetraspaninok, CD9, CD63 és CD81 elleni antitestekkel borított gyöngyök felhasználásával). Az EV-profilozást standardizált multiplex gyöngy alapú áramlási citometrikus vizsgálattal végezzük, a MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Németország) használatával, a korábban leírtak szerint. 22 Az EV membránon általánosan kifejezett 37 különböző felületi antigén kimutatása (beleértve az aktivált vérlemezkékből, endotéliumból és gyulladásos sejtekből származó markereket) egyidejűleg történik. |
|
TIA
|
A betegek vérmintát vesznek az EV analízishez: az EV-ket nanorészecske-követő analízissel, Western blot-tal, gyöngy-alapú áramlási citometriával (direkt és inverz megközelítéssel) és ELISA-val jellemezzük. A szérum nanorészecskék (NP-k) átmérőjét és koncentrációját nanorészecske-követő analízissel (NTA) értékeljük NanoSight LM10 segítségével. A Western Blot analízist fehérjelizátumon végezzük az EV immuno-befogás után (EV-specifikus tetraspaninok, CD9, CD63 és CD81 elleni antitestekkel borított gyöngyök felhasználásával). Az EV-profilozást standardizált multiplex gyöngy alapú áramlási citometrikus vizsgálattal végezzük, a MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Németország) használatával, a korábban leírtak szerint. 22 Az EV membránon általánosan kifejezett 37 különböző felületi antigén kimutatása (beleértve az aktivált vérlemezkékből, endotéliumból és gyulladásos sejtekből származó markereket) egyidejűleg történik. |
|
Stroke Mimic
|
A betegek vérmintát vesznek az EV analízishez: az EV-ket nanorészecske-követő analízissel, Western blot-tal, gyöngy-alapú áramlási citometriával (direkt és inverz megközelítéssel) és ELISA-val jellemezzük. A szérum nanorészecskék (NP-k) átmérőjét és koncentrációját nanorészecske-követő analízissel (NTA) értékeljük NanoSight LM10 segítségével. A Western Blot analízist fehérjelizátumon végezzük az EV immuno-befogás után (EV-specifikus tetraspaninok, CD9, CD63 és CD81 elleni antitestekkel borított gyöngyök felhasználásával). Az EV-profilozást standardizált multiplex gyöngy alapú áramlási citometrikus vizsgálattal végezzük, a MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Németország) használatával, a korábban leírtak szerint. 22 Az EV membránon általánosan kifejezett 37 különböző felületi antigén kimutatása (beleértve az aktivált vérlemezkékből, endotéliumból és gyulladásos sejtekből származó markereket) egyidejűleg történik. |
Mit mér a tanulmány?
Elsődleges eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
A TIA megkülönböztetése a TIA utánzóktól
Időkeret: 72 óra a tünetek megjelenésétől számítva
|
meghatározza az EV profilalkotás (a vezikulák felszínén expresszált antigének elemzése) teljesítményét, hozzáadva egy strukturált klinikai (PREDISC pontszám) és képalkotó értékeléshez (agyi MRI), hogy megkülönböztethesse a TIA-kat a TIA-utánzóktól (nem ischaemiás események).
|
72 óra a tünetek megjelenésétől számítva
|
Másodlagos eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
A TIA megkülönböztetése a stroke-tól
Időkeret: akut fázis, 3 és 12 hónap
|
meghatározza az EV profilalkotás teljesítményét a TIA-k (akut elváltozás negatív MRI-vel) és az akut ischaemiás stroke (AIS, MRI megerősített) megkülönböztetésére.
|
akut fázis, 3 és 12 hónap
|
|
A stroke etiológiája
Időkeret: akut fázis, 3 és 12 hónap
|
meghatározza az elektromos járművek profilalkotásának teljesítményét az ischaemiás események előre meghatározott okainak kategorizálásához
|
akut fázis, 3 és 12 hónap
|
Együttműködők és nyomozók
Szponzor
Tanulmányi rekorddátumok
Tanulmány főbb dátumok
Tanulmány kezdete (Tényleges)
Elsődleges befejezés (Becsült)
A tanulmány befejezése (Becsült)
Tanulmányi regisztráció dátumai
Először benyújtva
Először nyújtották be, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Első közzététel (Tényleges)
Tanulmányi rekordok frissítései
Utolsó frissítés közzétéve (Tényleges)
Az utolsó frissítés elküldve, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Utolsó ellenőrzés
Több információ
A tanulmányhoz kapcsolódó kifejezések
További vonatkozó MeSH feltételek
Egyéb vizsgálati azonosító számok
- NSISTRCR_2201
Terv az egyéni résztvevői adatokhoz (IPD)
Tervezi megosztani az egyéni résztvevői adatokat (IPD)?
Gyógyszer- és eszközinformációk, tanulmányi dokumentumok
Egy amerikai FDA által szabályozott gyógyszerkészítményt tanulmányoz
Egy amerikai FDA által szabályozott eszközterméket tanulmányoz
Ezt az információt közvetlenül a clinicaltrials.gov webhelyről szereztük be, változtatás nélkül. Ha bármilyen kérése van vizsgálati adatainak módosítására, eltávolítására vagy frissítésére, kérjük, írjon a következő címre: register@clinicaltrials.gov. Amint a változás bevezetésre kerül a clinicaltrials.gov oldalon, ez a webhelyünkön is automatikusan frissül. .
Klinikai vizsgálatok a Stroke, TIA, Stroke-mimics, Stroke Biomarkerek
-
Institut National de la Santé Et de la Recherche...Befejezve