Extracellulaire oppervlaktemarkers voor blaasjes bij acute cerebrovasculaire syndromen. (ElViS-ACS)
De klinische implicatie van eventuele bloedbiomarkers voor de diagnose en prognose van een beroerte zouden beperkt zijn, vooral omdat klinische evaluatie en schalen (die de ernst van de beroerte aangeven) of neuroimaging (die een nauwkeurige grootte van de laesie oplevert) betrouwbaardere voorspellers zijn voor de voorspelling van de klinische uitkomst. In de klinische praktijk zou het nuttiger zijn om een biomarker te vinden, die kan helpen de arts te oriënteren in omstandigheden waarbij het ziektebeeld en de beeldvorming slechts beperkte ondersteuning bieden.
Transient Ischemic Attacks (TIA's) vormen een klassiek voorbeeld waarvoor een biomarker van belang zou zijn om een ischemisch proces in de hersenen te bevestigen en te onderscheiden van een nabootsing van een beroerte. Diagnostische biomarkers voor TIA zijn onderzocht, maar geen van de potentiële kandidaten bereikte voldoende nauwkeurigheid voor TIA-diagnose. Onze groep heeft ontdekt dat extracellulaire blaasjes (EV's) nuttig kunnen zijn als biomarkers voor het detecteren van hersenischemie bij patiënten met TIA, omdat het EV-oppervlakte-antigeenprofiel anders lijkt te zijn bij patiënten met voorbijgaande symptomen, waarvan wordt aangenomen dat deze zeer waarschijnlijk worden veroorzaakt door hersenischemie. vergeleken met patiënten bij wie de symptomen minder waarschijnlijk te wijten waren aan hersenischemie. Onze studie heeft interesse gewekt bij de wetenschappelijke gemeenschap en erkent de veelbelovende rol van bloedafgeleide EV-analyse bij het uitbreiden van de mogelijkheden om TIA- en beroerte-gebeurtenissen correct te diagnosticeren en classificeren, en deze te onderscheiden van TIA- of beroerte-nabootsingen, met belangrijke toekomstige implicaties voor management en therapie. van de patiënten met acuut ischemisch cerebrovasculair syndroom. de validiteit van onze aanpak moet worden getest in een grotere, prospectieve, multicentrische studie.
Studie Overzicht
Toestand
Interventie / Behandeling
Gedetailleerde beschrijving
Karakterisering van extracellulaire blaasjes Extracellulaire blaasjes (EVs) zullen worden gekarakteriseerd in vooraf geklaarde serummonsters (zie overdracht en beheer van bloedmonsters). EV's zullen worden gekarakteriseerd door trackinganalyse van nanodeeltjes, western blot, op kralen gebaseerde flowcytometrie (directe en inverse benadering) en ELISA.
We zullen de diameter en concentratie van serumnanodeeltjes (NP's) evalueren door middel van nanodeeltjes-trackinganalyse (NTA) met behulp van NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Verenigd Koninkrijk) uitgerust met een 405 nm laser en Nanoparticle Tracking Analysis NTA 2.3 analytische software. Een camera registreert de Brownse beweging van EV's en de grootte en het aantal EV's per ml worden berekend met de Stokes-Einstein-vergelijking. Voor elke analyse worden drie video's van 60 seconden opgenomen.
Western Blot-analyse zal worden uitgevoerd op eiwitlysaat na EV-immuno-capture (met behulp van kralen bedekt met antilichamen tegen EV-specifieke tetraspanines, CD9, CD63 en CD81). Blots van representatieve monsters zullen worden geïncubeerd met primaire antilichamen tegen specifieke markers die tot expressie worden gebracht op het oppervlak of in EV's (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) en potentiële contaminanten (GRP94, Apolipoproteïne A1, Apolipoproteïne B48).
EV-profilering zal worden uitgevoerd met behulp van een gestandaardiseerde op multiplex kraal gebaseerde flowcytometrische test, met behulp van MACSplex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Duitsland), zoals eerder beschreven. 22 De detectie van 37 verschillende oppervlakte-antigenen die gewoonlijk tot expressie worden gebracht op EV-membraan (inclusief markers van geactiveerde bloedplaatjes, endotheel en ontstekingscellen) zal gelijktijdig worden uitgevoerd. De achtergrond zal worden afgetrokken van de MFI-waarde van elke marker en vervolgens worden genormaliseerd met behulp van de gemiddelde fluorescentie-intensiteitsniveaus (MFI) van CD9, CD63 en CD81. Expressieniveaus zullen worden gerapporteerd als genormaliseerde MFI (nMFI; %) voor elk EV-oppervlakteantigeen (mediaanwaarde en interkwartielbereik).
Na een initiële screening door middel van een multiplextest zullen afzonderlijke kandidaat-EV-biomarkers worden bevestigd door middel van reverse flow cytometrie en ELISA-technieken.
De reverse flow cytometrische test zal worden uitgevoerd door EV’s te isoleren door vangkorrels gecoat met antilichamen tegen CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro) en vervolgens te incuberen met fluorochroom-geconjugeerde antilichamen tegen enkelvoudige EV-oppervlakte-antigenen, geassocieerd met de diagnose van de patiënt tijdens de initiële behandeling. screening door middel van MACSplex-test. Parels die zijn geïncubeerd met antilichamen die overeenkomen met het isotype, en parels die zijn geïncubeerd in afwezigheid van blaasjes zullen als controles dienen. Kandidaat-EV-biomarkers zullen ook worden bevestigd door middel van ELISA-techniek, met behulp van specifieke antilichamen volgens de instructies van de fabrikant.
Studietype
Inschrijving (Geschat)
Contacten en locaties
Studiecontact
- Naam: Carlo Walter Cereda, PI
- Telefoonnummer: +41918116691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
Studie Contact Back-up
- Naam: Giovanni Bianco
- Telefoonnummer: +41918117073
- E-mail: giovanni.bianco@eoc.ch
Studie Locaties
-
-
Ticino
-
Lugano, Ticino, Zwitserland, CH-6900
- Werving
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
-
Hoofdonderzoeker:
- Carlo Cereda
-
Contact:
- Carlo Cereda, MD
- Telefoonnummer: +41 91 811 6691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
-
Onderonderzoeker:
- Giovanni Bianco
-
Onderonderzoeker:
- Lucio Barile
-
-
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
- Volwassen
- Oudere volwassene
Accepteert gezonde vrijwilligers
Bemonsteringsmethode
Studie Bevolking
Beschrijving
Inclusiecriteria:
Beïnvloed door:
I. Vermoedelijke ischemische lichte beroerte (acuut verlies van focale hersenfunctie met vermoedelijke vasculaire etiologie en NIHSS ≤327, 28) binnen 48 uur na aanvang van de symptomen of II. TIA (gedefinieerd als het acute begin van focale neurologische symptomen die <24 uur aanhouden en vermoedelijk veroorzaakt zijn door hersenischemie op het moment van verwijzing)19 III. Symptomen die lijken op I. of II. met maar met een sterk vermoeden dat een niet-ischemische aandoening de oorzaak van de gebeurtenis is;
2) leeftijd ≥18 jaar; 3) of er binnen 48-72 uur na opname een beeldvorming met magnetische resonantie van de hersenen zal worden uitgevoerd; 4) als CT/MRI bij aanvang zonder bloeding is; 5) indien geïnformeerde toestemming is verkregen.
Uitsluitingscriteria:
- oculaire TIA (amaurosis fugax);
- contra-indicaties voor MRI;
- zwangerschap;
- gelijktijdige acute/chronische ontstekingsziekte (bijv. infecties, auto-immuunziekte);
- gelijktijdige hematologische ziekten;
- Infectie van het centrale zenuwstelsel binnen 30 dagen;
- ernstig hoofdtrauma binnen 30 dagen;
- grote operatie binnen 90 dagen.
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
Cohorten en interventies
Groep / Cohort |
Interventie / Behandeling |
|---|---|
|
Hartinfarct
|
De patiënten ondergaan een bloedmonster voor EV-analyses: EV's zullen worden gekarakteriseerd door trackinganalyse van nanodeeltjes, western blot, op kralen gebaseerde flowcytometrie (directe en inverse benadering) en ELISA. We zullen de diameter en concentratie van serumnanodeeltjes (NP's) evalueren door middel van nanodeeltjesvolganalyse (NTA) met behulp van NanoSight LM10. Western Blot-analyse zal worden uitgevoerd op eiwitlysaat na EV-immuno-capture (met behulp van kralen bedekt met antilichamen tegen EV-specifieke tetraspanines, CD9, CD63 en CD81). EV-profilering zal worden uitgevoerd met behulp van een gestandaardiseerde op multiplex kraal gebaseerde flowcytometrische test, met behulp van MACSplex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Duitsland), zoals eerder beschreven. 22 De detectie van 37 verschillende oppervlakte-antigenen die gewoonlijk tot expressie worden gebracht op het EV-membraan (inclusief markers van geactiveerde bloedplaatjes, endotheel en ontstekingscellen) zal gelijktijdig worden uitgevoerd. |
|
TIA
|
De patiënten ondergaan een bloedmonster voor EV-analyses: EV's zullen worden gekarakteriseerd door trackinganalyse van nanodeeltjes, western blot, op kralen gebaseerde flowcytometrie (directe en inverse benadering) en ELISA. We zullen de diameter en concentratie van serumnanodeeltjes (NP's) evalueren door middel van nanodeeltjesvolganalyse (NTA) met behulp van NanoSight LM10. Western Blot-analyse zal worden uitgevoerd op eiwitlysaat na EV-immuno-capture (met behulp van kralen bedekt met antilichamen tegen EV-specifieke tetraspanines, CD9, CD63 en CD81). EV-profilering zal worden uitgevoerd met behulp van een gestandaardiseerde op multiplex kraal gebaseerde flowcytometrische test, met behulp van MACSplex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Duitsland), zoals eerder beschreven. 22 De detectie van 37 verschillende oppervlakte-antigenen die gewoonlijk tot expressie worden gebracht op het EV-membraan (inclusief markers van geactiveerde bloedplaatjes, endotheel en ontstekingscellen) zal gelijktijdig worden uitgevoerd. |
|
Beroerte nabootsen
|
De patiënten ondergaan een bloedmonster voor EV-analyses: EV's zullen worden gekarakteriseerd door trackinganalyse van nanodeeltjes, western blot, op kralen gebaseerde flowcytometrie (directe en inverse benadering) en ELISA. We zullen de diameter en concentratie van serumnanodeeltjes (NP's) evalueren door middel van nanodeeltjesvolganalyse (NTA) met behulp van NanoSight LM10. Western Blot-analyse zal worden uitgevoerd op eiwitlysaat na EV-immuno-capture (met behulp van kralen bedekt met antilichamen tegen EV-specifieke tetraspanines, CD9, CD63 en CD81). EV-profilering zal worden uitgevoerd met behulp van een gestandaardiseerde op multiplex kraal gebaseerde flowcytometrische test, met behulp van MACSplex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Duitsland), zoals eerder beschreven. 22 De detectie van 37 verschillende oppervlakte-antigenen die gewoonlijk tot expressie worden gebracht op het EV-membraan (inclusief markers van geactiveerde bloedplaatjes, endotheel en ontstekingscellen) zal gelijktijdig worden uitgevoerd. |
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
TIA-differentiatie van TIA-nabootsingen
Tijdsspanne: 72 uur vanaf het begin van de symptomen
|
de prestaties bepalen van EV-profilering (analyse van antigenen die tot expressie worden gebracht op het oppervlak van de blaasjes), toegevoegd aan een gestructureerde klinische (PREDISC-score) en beeldvormende evaluatie (hersen-MRI), om TIA's te onderscheiden van TIA-nabootsers (niet-ischemische gebeurtenissen).
|
72 uur vanaf het begin van de symptomen
|
Secundaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
TIA-differentiatie van beroerte
Tijdsspanne: acute fase, 3 en 12 maanden
|
de prestaties van EV-profilering bepalen om onderscheid te maken tussen TIA's (met negatieve MRI voor acute laesie) en acute ischemische beroertes (AIS, MRI bevestigd).
|
acute fase, 3 en 12 maanden
|
|
Etiologie van een beroerte
Tijdsspanne: acute fase, 3 en 12 maanden
|
de prestaties van EV-profilering bepalen om vooraf gespecificeerde oorzaken van ischemische gebeurtenissen te categoriseren
|
acute fase, 3 en 12 maanden
|
Medewerkers en onderzoekers
Sponsor
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start (Werkelijk)
Primaire voltooiing (Geschat)
Studie voltooiing (Geschat)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (Werkelijk)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (Werkelijk)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Aanvullende relevante MeSH-voorwaarden
Andere studie-ID-nummers
- NSISTRCR_2201
Plan Individuele Deelnemersgegevens (IPD)
Bent u van plan om gegevens van individuele deelnemers (IPD) te delen?
Informatie over medicijnen en apparaten, studiedocumenten
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd geneesmiddel
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd apparaatproduct
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .