Ekstracellulære vesikkeloverflatemarkører ved akutte cerebrovaskulære syndromer. (ElViS-ACS)
Klinisk implikasjon av eventuelle blodbiomarkører for hjerneslagdiagnose og prognose vil være begrenset, hovedsakelig fordi klinisk evaluering og skalaer (som gir hjerneslags alvorlighetsgrad) eller nevroavbildning (som gir nøyaktig størrelse på lesjonen) er mer pålitelige prediktorer for klinisk utfallsprediksjon. I klinisk praksis vil det være mer nyttig å finne en biomarkør, som kan bidra til å orientere legen i forhold der det kliniske bildet og avbildningen gir begrenset støtte.
Forbigående iskemiske anfall (TIA) representerer et klassisk eksempel hvor en biomarkør vil være av interesse for å bekrefte og skille en hjerneiskemisk prosess fra en hjerneslagmimik. Diagnostiske biomarkører av TIA har blitt undersøkt, men ingen av de potensielle kandidatene nådde nok nøyaktighet for TIA-diagnose. Vår gruppe har funnet ut at ekstracellulære vesikler (EV) kan være nyttige som biomarkører for å oppdage hjerneiskemi hos pasienter med TIA fordi EV-overflateantigenprofilen ser ut til å være forskjellig hos pasienter med forbigående symptomer, antatt å være forårsaket av hjerneiskemi, sammenlignet med pasienter med mindre sannsynlighet for symptomer på grunn av hjerneiskemi. Studien vår har skapt interesse for det vitenskapelige miljøet som anerkjenner den lovende rollen til blodavledede EV-analyser i å utvide mulighetene for å korrekt diagnostisere og klassifisere TIA og slaghendelser, diskriminere dem fra TIA eller hjerneslag, med viktige fremtidige implikasjoner i behandling og terapi. av pasientene med akutt iskemisk cerebrovaskulært syndrom. gyldigheten av vår tilnærming må testes i en større, prospektiv, multisenterstudie.
Studieoversikt
Status
Intervensjon / Behandling
Detaljert beskrivelse
Karakterisering av ekstracellulære vesikler Ekstracellulære vesikler (EV) vil bli karakterisert i forhåndsklarerte serumprøver (se overføring og håndtering av blodprøver). EV-er vil bli preget av nanopartikkelsporingsanalyse, western blot, perlebasert flowcytometri (direkte og omvendt tilnærming) og ELISA.
Vi vil evaluere diameter og konsentrasjon av serumnanopartikler (NPs) ved nanopartikkelsporingsanalyse (NTA) ved bruk av NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Storbritannia) utstyrt med en 405 nm laser og Nanopartikkelsporingsanalyse NTA 2.3 analytisk programvare. Et kamera vil registrere Brownske bevegelser av elbiler og størrelse og antall elbiler per ml vil bli beregnet ved Stokes-Einstein-ligningen. Tre videoer på 60 s vil bli tatt opp for hver analyse.
Western Blot-analyse vil bli utført på proteinlysat etter EV-immuno-fangst (ved bruk av perler dekket med antistoffer mot EV-spesifikke tetraspaniner, CD9, CD63 og CD81). Blotter av representative prøver vil bli inkubert med primære antistoffer mot spesifikke markører uttrykt på overflaten eller innenfor EVs (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) og potensielle forurensninger (GRP94, Apolipoprotein A1, Apolipoprotein B48).
EV-profilering vil bli utført ved hjelp av en standardisert multipleks perlebasert flowcytometrisk analyse, ved bruk av MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Tyskland), som tidligere beskrevet. 22 Deteksjonen av 37 forskjellige overflateantigener som vanligvis uttrykkes på EV-membranen (inkludert markører fra aktiverte blodplater, endotel og inflammatoriske celler) vil bli utført samtidig. Bakgrunn vil bli trukket fra MFI-verdien til hver markør, og deretter normalisert ved å bruke de gjennomsnittlige fluorescensintensitetsnivåene (MFI) til CD9, CD63 og CD81. Ekspresjonsnivåer vil bli rapportert som normalisert MFI (nMFI; %) for hvert EV-overflateantigen (medianverdi og interkvartilområde).
Etter en innledende screening ved multiplekset assay, vil enkeltkandidat EV-biomarkører bekreftes ved enten revers flowcytometri og ELISA-teknikker.
Den omvendte flow-cytometriske analysen vil bli utført ved å isolere EV-er ved å fange perler belagt med antistoffer mot CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro) og deretter inkuberes med fluorokrom-konjugerte antistoffer mot enkelt EV-overflateantigener, assosiert med pasientdiagnosen under den første diagnosen. screening ved MACSPlex-analyse. Perler inkubert med isotype-matchede antistoffer og perler inkubert i fravær av vesikler vil tjene som kontroller. Kandidater for EV-biomarkører vil også bli bekreftet med ELISA-teknikk, ved bruk av spesifikke antistoffer i henhold til produsentens instruksjoner.
Studietype
Registrering (Antatt)
Kontakter og plasseringer
Studiekontakt
- Navn: Carlo Walter Cereda, PI
- Telefonnummer: +41918116691
- E-post: carlo.cereda@eoc.ch
Studer Kontakt Backup
- Navn: Giovanni Bianco
- Telefonnummer: +41918117073
- E-post: giovanni.bianco@eoc.ch
Studiesteder
-
-
Ticino
-
Lugano, Ticino, Sveits, CH-6900
- Rekruttering
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
-
Hovedetterforsker:
- Carlo Cereda
-
Ta kontakt med:
- Carlo Cereda, MD
- Telefonnummer: +41 91 811 6691
- E-post: carlo.cereda@eoc.ch
-
Underetterforsker:
- Giovanni Bianco
-
Underetterforsker:
- Lucio Barile
-
-
Deltakelseskriterier
Kvalifikasjonskriterier
Alder som er kvalifisert for studier
- Voksen
- Eldre voksen
Tar imot friske frivillige
Prøvetakingsmetode
Studiepopulasjon
Beskrivelse
Inklusjonskriterier:
Påvirket av:
I. Mistanke om iskemisk mindre hjerneslag (akutt tap av fokal cerebral funksjon av antatt vaskulær etiologi og NIHSS ≤327, 28) innen 48 timer etter symptomdebut eller II. TIA (definert som akutt utbrudd av fokale nevrologiske symptomer som varer <24 timer og antas å være forårsaket av hjerneiskemi på henvisningstidspunktet)19 III. Symptomer som etterligner I. eller II. med men med høy mistanke om at en ikke-iskemisk tilstand er årsaken til hendelsen;
2) alder ≥18 år; 3) hvis cerebral magnetisk resonansavbildning vil bli utført innen 48-72 timer fra innleggelse; 4) hvis baseline CT/MRI er uten blødning; 5) hvis informert samtykke innhentes.
Ekskluderingskriterier:
- okulær TIA (amaurosis fugax);
- kontraindikasjoner for MR;
- svangerskap;
- samtidig akutt/kronisk inflammatorisk sykdom (f.eks. infeksjoner, autoimmun sykdom);
- samtidige hematologiske sykdommer;
- infeksjon i sentralnervesystemet innen 30 dager;
- alvorlig hodetraume innen 30 dager;
- større operasjon innen 90 dager.
Studieplan
Hvordan er studiet utformet?
Designdetaljer
Kohorter og intervensjoner
Gruppe / Kohort |
Intervensjon / Behandling |
|---|---|
|
Slag
|
Pasientene gjennomgår en blodprøve for EV-analyser: EV-er vil bli preget av nanopartikkelsporingsanalyse, western blot, perlebasert flowcytometri (direkte og omvendt tilnærming) og ELISA. Vi vil evaluere diameter og konsentrasjon av serumnanopartikler (NPs) ved hjelp av nanopartikkelsporingsanalyse (NTA) ved bruk av NanoSight LM10. Western Blot-analyse vil bli utført på proteinlysat etter EV-immuno-fangst (ved bruk av perler dekket med antistoffer mot EV-spesifikke tetraspaniner, CD9, CD63 og CD81). EV-profilering vil bli utført ved hjelp av en standardisert multipleks perlebasert flowcytometrisk analyse, ved bruk av MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Tyskland), som tidligere beskrevet. 22 Deteksjonen av 37 forskjellige overflateantigener som vanligvis uttrykkes på EV-membranen (inkludert markører fra aktiverte blodplater, endotel og inflammatoriske celler) vil bli utført samtidig. |
|
TIA
|
Pasientene gjennomgår en blodprøve for EV-analyser: EV-er vil bli preget av nanopartikkelsporingsanalyse, western blot, perlebasert flowcytometri (direkte og omvendt tilnærming) og ELISA. Vi vil evaluere diameter og konsentrasjon av serumnanopartikler (NPs) ved hjelp av nanopartikkelsporingsanalyse (NTA) ved bruk av NanoSight LM10. Western Blot-analyse vil bli utført på proteinlysat etter EV-immuno-fangst (ved bruk av perler dekket med antistoffer mot EV-spesifikke tetraspaniner, CD9, CD63 og CD81). EV-profilering vil bli utført ved hjelp av en standardisert multipleks perlebasert flowcytometrisk analyse, ved bruk av MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Tyskland), som tidligere beskrevet. 22 Deteksjonen av 37 forskjellige overflateantigener som vanligvis uttrykkes på EV-membranen (inkludert markører fra aktiverte blodplater, endotel og inflammatoriske celler) vil bli utført samtidig. |
|
Slagmimic
|
Pasientene gjennomgår en blodprøve for EV-analyser: EV-er vil bli preget av nanopartikkelsporingsanalyse, western blot, perlebasert flowcytometri (direkte og omvendt tilnærming) og ELISA. Vi vil evaluere diameter og konsentrasjon av serumnanopartikler (NPs) ved hjelp av nanopartikkelsporingsanalyse (NTA) ved bruk av NanoSight LM10. Western Blot-analyse vil bli utført på proteinlysat etter EV-immuno-fangst (ved bruk av perler dekket med antistoffer mot EV-spesifikke tetraspaniner, CD9, CD63 og CD81). EV-profilering vil bli utført ved hjelp av en standardisert multipleks perlebasert flowcytometrisk analyse, ved bruk av MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Tyskland), som tidligere beskrevet. 22 Deteksjonen av 37 forskjellige overflateantigener som vanligvis uttrykkes på EV-membranen (inkludert markører fra aktiverte blodplater, endotel og inflammatoriske celler) vil bli utført samtidig. |
Hva måler studien?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
TIA-differensiering fra TIA-mimiker
Tidsramme: 72 timer fra symptomdebut
|
bestemme ytelsen til EV-profilering (analyse av antigener uttrykt på vesikleroverflaten), lagt til en strukturert klinisk (PREDISC-score) og bildevurdering (hjerne-MR), for å skille TIA-er fra TIA-etterligninger (ikke-iskemiske hendelser).
|
72 timer fra symptomdebut
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
TIA-differensiering fra hjerneslag
Tidsramme: akutt fase, 3 og 12 måneder
|
bestemme ytelsen til EV-profilering for å skille mellom TIA (med negativ MR for akutt lesjon) og akutte iskemiske slag (AIS, MR bekreftet).
|
akutt fase, 3 og 12 måneder
|
|
Etiologi av hjerneslag
Tidsramme: akutt fase, 3 og 12 måneder
|
bestemme ytelsen til profilering av elbiler for å kategorisere forhåndsspesifiserte årsaker til iskemiske hendelser
|
akutt fase, 3 og 12 måneder
|
Samarbeidspartnere og etterforskere
Sponsor
Studierekorddatoer
Studer hoveddatoer
Studiestart (Faktiske)
Primær fullføring (Antatt)
Studiet fullført (Antatt)
Datoer for studieregistrering
Først innsendt
Først innsendt som oppfylte QC-kriteriene
Først lagt ut (Faktiske)
Oppdateringer av studieposter
Sist oppdatering lagt ut (Faktiske)
Siste oppdatering sendt inn som oppfylte QC-kriteriene
Sist bekreftet
Mer informasjon
Begreper knyttet til denne studien
Ytterligere relevante MeSH-vilkår
Andre studie-ID-numre
- NSISTRCR_2201
Plan for individuelle deltakerdata (IPD)
Planlegger du å dele individuelle deltakerdata (IPD)?
Legemiddel- og utstyrsinformasjon, studiedokumenter
Studerer et amerikansk FDA-regulert medikamentprodukt
Studerer et amerikansk FDA-regulert enhetsprodukt
Denne informasjonen ble hentet direkte fra nettstedet clinicaltrials.gov uten noen endringer. Hvis du har noen forespørsler om å endre, fjerne eller oppdatere studiedetaljene dine, vennligst kontakt register@clinicaltrials.gov. Så snart en endring er implementert på clinicaltrials.gov, vil denne også bli oppdatert automatisk på nettstedet vårt. .