Marcadores de superfície de vesículas extracelulares em síndromes cerebrovasculares agudas. (ElViS-ACS)
A implicação clínica de eventuais biomarcadores sanguíneos para o diagnóstico e prognóstico do AVC seria limitada, principalmente porque a avaliação clínica e as escalas (fornecendo a gravidade do AVC) ou a neuroimagem (fornecendo o tamanho preciso da lesão) são preditores mais confiáveis para a previsão do resultado clínico. Na prática clínica, seria mais útil encontrar um biomarcador, que pode ajudar a orientar o médico em condições em que o quadro clínico e os exames de imagem fornecem suporte limitado.
Os ataques isquêmicos transitórios (AITs) representam um exemplo clássico para o qual um biomarcador seria de interesse para confirmar e distinguir um processo isquêmico cerebral de um acidente vascular cerebral simulado. Biomarcadores diagnósticos de AIT foram investigados, mas nenhum dos potenciais candidatos alcançou precisão suficiente para o diagnóstico de AIT. Nosso grupo descobriu que as Vesículas Extracelulares (EVs) podem ser úteis como biomarcadores para detectar isquemia cerebral em pacientes com AIT porque o perfil do antígeno de superfície EV parece ser diferente em pacientes com sintomas transitórios, considerados muito provavelmente causados por isquemia cerebral, em comparação com pacientes cujos sintomas eram menos prováveis devido à isquemia cerebral. Nosso estudo despertou interesse na comunidade científica, reconhecendo o papel promissor da análise de VEs derivados do sangue na expansão das possibilidades de diagnosticar e classificar corretamente AIT e eventos de AVC, discriminando-os de AIT ou mimetizadores de AVC, com importantes implicações futuras no manejo e terapia dos pacientes com síndrome cerebrovascular isquêmica aguda. a validade de nossa abordagem precisa ser testada em um estudo multicêntrico prospectivo maior.
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
Caracterização de vesículas extracelulares As vesículas extracelulares (EVs) serão caracterizadas em amostras de soro pré-clarificadas (ver transferência e manejo de amostras de sangue). Os EVs serão caracterizados por análise de rastreamento de nanopartículas, western blot, citometria de fluxo baseada em esferas (abordagem direta e inversa) e ELISA.
Avaliaremos o diâmetro e a concentração de nanopartículas séricas (NPs) por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) usando NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Reino Unido) equipado com um laser de 405 nm e software analítico Nanoparticle Tracking Analysis NTA 2.3. Uma câmera registrará o movimento browniano de EVs e o tamanho e o número de EVs por mL serão calculados pela equação de Stokes-Einstein. Serão gravados três vídeos de 60 segundos para cada análise.
A análise Western Blot será realizada em lisado de proteína após imunocaptura de EV (usando esferas cobertas com anticorpos contra tetraspaninas específicas de EV, CD9, CD63 e CD81). Blots de amostras representativas serão incubados com anticorpos primários contra marcadores específicos expressos na superfície ou dentro de EVs (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) e contaminantes potenciais (GRP94, Apolipoproteína A1, Apolipoproteína B48).
O perfil EV será realizado usando um ensaio citométrico de fluxo baseado em esfera multiplex padronizado, usando o kit de exossomo humano MACSPlex (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Alemanha), conforme descrito anteriormente. 22 A detecção de 37 antígenos de superfície diferentes comumente expressos na membrana do VE (incluindo marcadores de plaquetas ativadas, endotélio e células inflamatórias) será realizada simultaneamente. O fundo será subtraído do valor MFI de cada marcador e, em seguida, normalizado usando os níveis médios de intensidade de fluorescência (MFI) de CD9, CD63 e CD81. Os níveis de expressão serão relatados como MFI normalizado (nMFI;%) para cada antígeno de superfície EV (valor mediano e intervalo interquartil).
Após uma triagem inicial por ensaio multiplexado, biomarcadores EV de candidato único serão confirmados por citometria de fluxo reverso e técnicas de ELISA.
O ensaio citométrico de fluxo reverso será realizado isolando EVs por esferas de captura revestidas com anticorpos contra CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro) e depois incubados com anticorpos conjugados com fluorocromo contra antígenos de superfície de EV únicos, associados ao diagnóstico do paciente durante a fase inicial. triagem pelo ensaio MACSPlex. Grânulos incubados com anticorpos correspondentes ao isotipo e grânulos incubados na ausência de vesículas servirão como controles. Os biomarcadores EV candidatos serão confirmados também pela técnica ELISA, utilizando anticorpos específicos conforme instruções do fabricante.
Tipo de estudo
Inscrição (Estimado)
Contactos e Locais
Contato de estudo
- Nome: Carlo Walter Cereda, PI
- Número de telefone: +41918116691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
Estude backup de contato
- Nome: Giovanni Bianco
- Número de telefone: +41918117073
- E-mail: giovanni.bianco@eoc.ch
Locais de estudo
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Ticino
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Lugano, Ticino, Suíça, CH-6900
- Recrutamento
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
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Investigador principal:
- Carlo Cereda
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Contato:
- Carlo Cereda, MD
- Número de telefone: +41 91 811 6691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
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Subinvestigador:
- Giovanni Bianco
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Subinvestigador:
- Lucio Barile
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
- Adulto
- Adulto mais velho
Aceita Voluntários Saudáveis
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
Afetado por:
I. Suspeita de acidente vascular cerebral isquêmico menor (perda aguda da função cerebral focal de etiologia vascular presumida e NIHSS ≤327, 28) dentro de 48 horas do início dos sintomas ou II. AIT (definido como o início agudo de sintomas neurológicos focais com duração <24 horas e presumivelmente causados por isquemia cerebral no momento do encaminhamento)19 III. Sintomas que imitam I. ou II. com, mas com alta suspeita, de uma condição não isquêmica ser a causa do evento;
2) idade ≥18 anos; 3) se a ressonância magnética cerebral for realizada dentro de 48-72 horas da admissão; 4) se a TC/RM basal estiver sem hemorragia; 5) se o consentimento informado for obtido.
Critério de exclusão:
- AIT ocular (amaurose fugaz);
- contra-indicações para ressonância magnética;
- gravidez;
- doença inflamatória aguda/crônica concomitante (por exemplo, infecções, doenças autoimunes);
- doenças hematológicas concomitantes;
- Infecção do Sistema Nervoso Central em até 30 dias;
- traumatismo cranioencefálico grave em 30 dias;
- cirurgia de grande porte em 90 dias.
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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AVC
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Os pacientes são submetidos a uma amostra de sangue para análises de EV: os EVs serão caracterizados por análise de rastreamento de nanopartículas, western blot, citometria de fluxo baseada em esferas (abordagem direta e inversa) e ELISA. Avaliaremos o diâmetro e a concentração de nanopartículas séricas (NPs) por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) usando NanoSight LM10. A análise Western Blot será realizada em lisado de proteína após imunocaptura de EV (usando esferas cobertas com anticorpos contra tetraspaninas específicas de EV, CD9, CD63 e CD81). O perfil EV será realizado usando um ensaio citométrico de fluxo baseado em esfera multiplex padronizado, usando o kit de exossomo humano MACSPlex (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Alemanha), conforme descrito anteriormente. 22 A detecção de 37 antígenos de superfície diferentes comumente expressos na membrana do VE (incluindo marcadores de plaquetas ativadas, endotélio e células inflamatórias) será realizada simultaneamente. |
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TIA
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Os pacientes são submetidos a uma amostra de sangue para análises de EV: os EVs serão caracterizados por análise de rastreamento de nanopartículas, western blot, citometria de fluxo baseada em esferas (abordagem direta e inversa) e ELISA. Avaliaremos o diâmetro e a concentração de nanopartículas séricas (NPs) por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) usando NanoSight LM10. A análise Western Blot será realizada em lisado de proteína após imunocaptura de EV (usando esferas cobertas com anticorpos contra tetraspaninas específicas de EV, CD9, CD63 e CD81). O perfil EV será realizado usando um ensaio citométrico de fluxo baseado em esfera multiplex padronizado, usando o kit de exossomo humano MACSPlex (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Alemanha), conforme descrito anteriormente. 22 A detecção de 37 antígenos de superfície diferentes comumente expressos na membrana do VE (incluindo marcadores de plaquetas ativadas, endotélio e células inflamatórias) será realizada simultaneamente. |
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Mímico de acidente vascular cerebral
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Os pacientes são submetidos a uma amostra de sangue para análises de EV: os EVs serão caracterizados por análise de rastreamento de nanopartículas, western blot, citometria de fluxo baseada em esferas (abordagem direta e inversa) e ELISA. Avaliaremos o diâmetro e a concentração de nanopartículas séricas (NPs) por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) usando NanoSight LM10. A análise Western Blot será realizada em lisado de proteína após imunocaptura de EV (usando esferas cobertas com anticorpos contra tetraspaninas específicas de EV, CD9, CD63 e CD81). O perfil EV será realizado usando um ensaio citométrico de fluxo baseado em esfera multiplex padronizado, usando o kit de exossomo humano MACSPlex (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Alemanha), conforme descrito anteriormente. 22 A detecção de 37 antígenos de superfície diferentes comumente expressos na membrana do VE (incluindo marcadores de plaquetas ativadas, endotélio e células inflamatórias) será realizada simultaneamente. |
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Diferenciação de TIA de imitadores de TIA
Prazo: 72 horas após o início dos sintomas
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determinar o desempenho do perfil EV (análise de antígenos expressos na superfície das vesículas), adicionado a uma avaliação clínica estruturada (pontuação PREDISC) e de imagem (ressonância magnética cerebral), para discriminar AITs de imitadores de AITs (eventos não isquêmicos).
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72 horas após o início dos sintomas
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Diferenciação de AIT de AVC
Prazo: fase aguda, 3 e 12 meses
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determinar o desempenho do perfil EV para diferenciar entre AITs (com ressonância magnética negativa para lesão aguda) e acidentes vasculares cerebrais isquêmicos agudos (AIS, ressonância magnética confirmada).
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fase aguda, 3 e 12 meses
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Etiologia do AVC
Prazo: fase aguda, 3 e 12 meses
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determinar o desempenho do perfil de VEs para categorizar causas pré-especificadas de eventos isquêmicos
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fase aguda, 3 e 12 meses
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Estimado)
Conclusão do estudo (Estimado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- NSISTRCR_2201
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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