Markery powierzchni pęcherzyków zewnątrzkomórkowych w ostrych zespołach mózgowo-naczyniowych. (ElViS-ACS)
Kliniczne znaczenie ostatecznych biomarkerów krwi dla diagnozy i rokowania udaru byłoby ograniczone, głównie dlatego, że ocena kliniczna i skale (umożliwiające określenie ciężkości udaru) lub neuroobrazowanie (umożliwiające dokładną wielkość zmiany chorobowej) są bardziej wiarygodnymi predyktorami przewidywania wyniku klinicznego. W praktyce klinicznej bardziej przydatne byłoby znalezienie biomarkera, który mógłby pomóc w orientacji lekarza w stanach, w których obraz kliniczny i obrazowanie dają ograniczone wsparcie.
Przejściowe ataki niedokrwienne (TIA) stanowią klasyczny przykład, w przypadku którego biomarker byłby przydatny w celu potwierdzenia i odróżnienia procesu niedokrwiennego mózgu od naśladowania udaru. Zbadano biomarkery diagnostyczne TIA, ale żaden z potencjalnych kandydatów nie osiągnął wystarczającej dokładności do diagnozy TIA. Nasza grupa odkryła, że pęcherzyki zewnątrzkomórkowe (EV) mogą być przydatne jako biomarkery do wykrywania niedokrwienia mózgu u pacjentów z TIA, ponieważ profil antygenów powierzchniowych EV wydaje się być inny u pacjentów z przejściowymi objawami, które uznano za bardzo prawdopodobne, że są spowodowane niedokrwieniem mózgu. w porównaniu z pacjentami, u których objawy były mniej prawdopodobne z powodu niedokrwienia mózgu. Nasze badanie wzbudziło zainteresowanie społeczności naukowej, uznając obiecującą rolę analizy EV pochodzących z krwi w poszerzaniu możliwości prawidłowego diagnozowania i klasyfikowania TIA i incydentów udaru mózgu, odróżniania ich od TIA lub naśladowców udaru, co ma ważne przyszłe implikacje w leczeniu i leczeniu pacjentów z ostrym zespołem niedokrwiennym mózgu. zasadność naszego podejścia należy sprawdzić w większym, prospektywnym, wieloośrodkowym badaniu.
Przegląd badań
Status
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
Charakterystyka pęcherzyków zewnątrzkomórkowych Pęcherzyki zewnątrzkomórkowe (EV) zostaną scharakteryzowane we wstępnie oczyszczonych próbkach surowicy (patrz transfer i postępowanie z próbkami krwi). EV zostaną scharakteryzowane za pomocą analizy śledzenia nanocząstek, analizy Western blot, cytometrii przepływowej opartej na kulkach (podejście bezpośrednie i odwrotne) oraz testu ELISA.
Ocenimy średnicę i stężenie nanocząstek surowicy (NP) za pomocą analizy śledzenia nanocząstek (NTA) przy użyciu NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Wielka Brytania) wyposażonego w laser 405 nm i oprogramowanie analityczne Nanoparticle Tracking Analysis NTA 2.3. Kamera zarejestruje ruchy Browna EV, a wielkość i liczba EV na ml zostanie obliczona za pomocą równania Stokesa-Einsteina. Do każdej analizy zostaną nagrane trzy filmy po 60 sekund.
Analiza Western Blot zostanie przeprowadzona na lizacie białka po wychwycie immunologicznym EV (przy użyciu kulek pokrytych przeciwciałami przeciwko tetraspaninom specyficznym dla EV, CD9, CD63 i CD81). Bloty reprezentatywnych próbek będą inkubowane z pierwotnymi przeciwciałami przeciwko specyficznym markerom wyrażanym na powierzchni lub w obrębie EV (TSG101, Syntenina-1, CD81, Alix) i potencjalnymi zanieczyszczeniami (GRP94, Apolipoproteina A1, Apolipoproteina B48).
Profilowanie EV zostanie przeprowadzone przy użyciu standardowego testu cytometrii przepływowej opartej na multipleksowych kulkach, przy użyciu zestawu MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Niemcy), jak opisano wcześniej. 22 Jednocześnie zostanie przeprowadzona detekcja 37 różnych antygenów powierzchniowych powszechnie wyrażanych na błonie EV (w tym markerów z aktywowanych płytek krwi, śródbłonka i komórek zapalnych). Tło zostanie odjęte od wartości MFI każdego markera, a następnie znormalizowane przy użyciu średnich poziomów intensywności fluorescencji (MFI) CD9, CD63 i CD81. Poziomy ekspresji będą podawane jako znormalizowany MFI (nMFI; %) dla każdego antygenu powierzchniowego EV (wartość mediana i rozstęp międzykwartylowy).
Po wstępnej ocenie przesiewowej za pomocą testu multipleksowego, pojedynczy kandydaci na biomarkery EV zostaną potwierdzeni albo za pomocą cytometrii przepływowej z odwróconą kontrolą, albo technikami ELISA.
Test cytometrii przepływowej z odwróconym przepływem zostanie przeprowadzony poprzez izolację EV za pomocą kulek wychwytujących pokrytych przeciwciałami przeciwko CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro), a następnie inkubowanych z przeciwciałami skoniugowanymi z fluorochromem przeciwko pojedynczym antygenom powierzchniowym EV, związanym z diagnozą pacjenta podczas wstępnej diagnostyki badanie przesiewowe za pomocą testu MACSPlex. Kulki inkubowane z przeciwciałami dobranymi pod względem izotypowym oraz kulki inkubowane przy braku pęcherzyków będą służyć jako kontrole. Biomarkery kandydatów na EV zostaną potwierdzone również techniką ELISA przy użyciu specyficznych przeciwciał zgodnie z instrukcjami producenta.
Typ studiów
Zapisy (Szacowany)
Kontakty i lokalizacje
Kontakt w sprawie studiów
- Nazwa: Carlo Walter Cereda, PI
- Numer telefonu: +41918116691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
Kopia zapasowa kontaktu do badania
- Nazwa: Giovanni Bianco
- Numer telefonu: +41918117073
- E-mail: giovanni.bianco@eoc.ch
Lokalizacje studiów
-
-
Ticino
-
Lugano, Ticino, Szwajcaria, CH-6900
- Rekrutacyjny
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
-
Główny śledczy:
- Carlo Cereda
-
Kontakt:
- Carlo Cereda, MD
- Numer telefonu: +41 91 811 6691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
-
Pod-śledczy:
- Giovanni Bianco
-
Pod-śledczy:
- Lucio Barile
-
-
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
- Dorosły
- Starszy dorosły
Akceptuje zdrowych ochotników
Metoda próbkowania
Badana populacja
Opis
Kryteria przyjęcia:
Pod wpływem:
I. Podejrzewa się niewielki udar niedokrwienny mózgu (ostra utrata ogniskowej funkcji mózgu o przypuszczalnej etiologii naczyniowej i NIHSS ≤327, 28) w ciągu 48 godzin od wystąpienia objawów lub II. TIA (definiowane jako ostry początek ogniskowych objawów neurologicznych trwający krócej niż 24 godziny i przypuszczalnie spowodowany niedokrwieniem mózgu w momencie skierowania)19 III. Objawy naśladujące I. lub II. z dużym podejrzeniem, że przyczyną zdarzenia jest stan inny niż niedokrwienny;
2) wiek ≥18 lat; 3) jeżeli w terminie 48–72 godzin od przyjęcia zostanie wykonany rezonans magnetyczny mózgu; 4) jeśli wyjściowe badanie CT/MRI nie wykazało krwotoku; 5) jeżeli uzyskano świadomą zgodę.
Kryteria wyłączenia:
- TIA oczny (amaurosis fugax);
- przeciwwskazania do MRI;
- ciąża;
- współistniejąca ostra/przewlekła choroba zapalna (np. infekcje, choroba autoimmunologiczna);
- współistniejące choroby hematologiczne;
- zakażenie Ośrodkowego Układu Nerwowego w ciągu 30 dni;
- poważny uraz głowy w ciągu 30 dni;
- poważną operację w ciągu 90 dni.
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
Kohorty i interwencje
Grupa / Kohorta |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
Udar
|
Od pacjentów pobierana jest próbka krwi do analiz EV: pojazdy EV będą charakteryzowane za pomocą analizy śledzenia nanocząstek, analizy Western blot, cytometrii przepływowej opartej na kulkach (podejście bezpośrednie i odwrotne) oraz testu ELISA. Ocenimy średnicę i stężenie nanocząstek surowicy (NP) za pomocą analizy śledzenia nanocząstek (NTA) przy użyciu NanoSight LM10. Analiza Western Blot zostanie przeprowadzona na lizacie białka po wychwycie immunologicznym EV (przy użyciu kulek pokrytych przeciwciałami przeciwko tetraspaninom specyficznym dla EV, CD9, CD63 i CD81). Profilowanie EV zostanie przeprowadzone przy użyciu standardowego testu cytometrii przepływowej opartej na multipleksowych kulkach, przy użyciu zestawu MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Niemcy), jak opisano wcześniej. 22 Jednocześnie zostanie przeprowadzona detekcja 37 różnych antygenów powierzchniowych powszechnie wyrażanych na błonie EV (w tym markerów z aktywowanych płytek krwi, śródbłonka i komórek zapalnych). |
|
TIA
|
Od pacjentów pobierana jest próbka krwi do analiz EV: pojazdy EV będą charakteryzowane za pomocą analizy śledzenia nanocząstek, analizy Western blot, cytometrii przepływowej opartej na kulkach (podejście bezpośrednie i odwrotne) oraz testu ELISA. Ocenimy średnicę i stężenie nanocząstek surowicy (NP) za pomocą analizy śledzenia nanocząstek (NTA) przy użyciu NanoSight LM10. Analiza Western Blot zostanie przeprowadzona na lizacie białka po wychwycie immunologicznym EV (przy użyciu kulek pokrytych przeciwciałami przeciwko tetraspaninom specyficznym dla EV, CD9, CD63 i CD81). Profilowanie EV zostanie przeprowadzone przy użyciu standardowego testu cytometrii przepływowej opartej na multipleksowych kulkach, przy użyciu zestawu MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Niemcy), jak opisano wcześniej. 22 Jednocześnie zostanie przeprowadzona detekcja 37 różnych antygenów powierzchniowych powszechnie wyrażanych na błonie EV (w tym markerów z aktywowanych płytek krwi, śródbłonka i komórek zapalnych). |
|
Imitacja udaru
|
Od pacjentów pobierana jest próbka krwi do analiz EV: pojazdy EV będą charakteryzowane za pomocą analizy śledzenia nanocząstek, analizy Western blot, cytometrii przepływowej opartej na kulkach (podejście bezpośrednie i odwrotne) oraz testu ELISA. Ocenimy średnicę i stężenie nanocząstek surowicy (NP) za pomocą analizy śledzenia nanocząstek (NTA) przy użyciu NanoSight LM10. Analiza Western Blot zostanie przeprowadzona na lizacie białka po wychwycie immunologicznym EV (przy użyciu kulek pokrytych przeciwciałami przeciwko tetraspaninom specyficznym dla EV, CD9, CD63 i CD81). Profilowanie EV zostanie przeprowadzone przy użyciu standardowego testu cytometrii przepływowej opartej na multipleksowych kulkach, przy użyciu zestawu MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Niemcy), jak opisano wcześniej. 22 Jednocześnie zostanie przeprowadzona detekcja 37 różnych antygenów powierzchniowych powszechnie wyrażanych na błonie EV (w tym markerów z aktywowanych płytek krwi, śródbłonka i komórek zapalnych). |
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Różnicowanie TIA od naśladowców TIA
Ramy czasowe: 72 godziny od wystąpienia objawów
|
określić skuteczność profilowania EV (analiza antygenów wyrażanych na powierzchni pęcherzyków), dodanego do ustrukturyzowanej oceny klinicznej (wynik PREDISC) i oceny obrazowej (MRI mózgu), w celu odróżnienia TIA od naśladujących TIA (zdarzenia inne niż niedokrwienne).
|
72 godziny od wystąpienia objawów
|
Miary wyników drugorzędnych
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Odróżnienie TIA od udaru
Ramy czasowe: faza ostra, 3 i 12 miesięcy
|
określić wydajność profilowania EV w celu rozróżnienia pomiędzy TIA (z ujemnym wynikiem rezonansu magnetycznego w przypadku ostrej zmiany) a ostrym udarem niedokrwiennym (AIS, potwierdzony MRI).
|
faza ostra, 3 i 12 miesięcy
|
|
Etiologia udaru
Ramy czasowe: faza ostra, 3 i 12 miesięcy
|
określić skuteczność profilowania pojazdów elektrycznych w celu kategoryzowania wcześniej określonych przyczyn zdarzeń niedokrwiennych
|
faza ostra, 3 i 12 miesięcy
|
Współpracownicy i badacze
Sponsor
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Rzeczywisty)
Zakończenie podstawowe (Szacowany)
Ukończenie studiów (Szacowany)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (Rzeczywisty)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Rzeczywisty)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Dodatkowe istotne warunki MeSH
Inne numery identyfikacyjne badania
- NSISTRCR_2201
Plan dla danych uczestnika indywidualnego (IPD)
Planujesz udostępniać dane poszczególnych uczestników (IPD)?
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .