Povrchové markery extracelulárních vezikul u akutních cerebrovaskulárních syndromů. (ElViS-ACS)
Klinická implikace případných krevních biomarkerů pro diagnostiku a prognózu cévní mozkové příhody by byla omezená, hlavně proto, že klinické hodnocení a škály (poskytující závažnost cévní mozkové příhody) nebo neurozobrazení (poskytující přesnou velikost léze) jsou spolehlivějšími prediktory pro predikci klinického výsledku. V klinické praxi by bylo užitečnější najít biomarker, který může pomoci orientovat se v podmínkách, kdy klinický obraz a zobrazení poskytují omezenou podporu.
Tranzientní ischemické ataky (TIA) představují klasický příklad, pro který by byl zajímavý biomarker k potvrzení a odlišení mozkového ischemického procesu od mimika mrtvice. Diagnostické biomarkery TIA byly zkoumány, ale žádný z potenciálních kandidátů nedosáhl dostatečné přesnosti pro diagnostiku TIA. Naše skupina zjistila, že extracelulární vezikuly (EV) by mohly být užitečné jako biomarkery pro detekci mozkové ischemie u pacientů s TIA, protože profil povrchového antigenu EV se zdá být odlišný u pacientů s přechodnými symptomy, které jsou velmi pravděpodobně způsobeny ischemií mozku, ve srovnání s pacienty, jejichž symptomy byly méně pravděpodobné v důsledku mozkové ischemie. Naše studie vzbudila zájem ve vědecké komunitě, která uznává slibnou roli analýzy EV získaných z krve při rozšiřování možností správně diagnostikovat a klasifikovat TIA a mozkové příhody, odlišit je od TIA nebo napodobenin cévní mozkové příhody, s důležitými budoucími důsledky v managementu a terapii. pacientů s akutním ischemickým cerebrovaskulárním syndromem. validitu našeho přístupu je třeba otestovat ve větší, prospektivní, multicentrické studii.
Přehled studie
Postavení
Intervence / Léčba
Detailní popis
Charakterizace extracelulárních vezikul Extracelulární vezikuly (EV) budou charakterizovány v předem vyčištěných vzorcích séra (viz přenos a vedení vzorků krve). EV budou charakterizovány analýzou sledování nanočástic, western blotem, průtokovou cytometrií na bázi perliček (přímý a inverzní přístup) a ELISA.
Budeme vyhodnocovat průměr a koncentraci sérových nanočástic (NP) analýzou sledování nanočástic (NTA) pomocí NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Velká Británie) vybaveného 405 nm laserem a analytickým softwarem Nanoparticle Tracking Analysis NTA 2.3. Kamera zaznamená Brownův pohyb EV a velikost a počet EV na ml se vypočítá pomocí Stokes-Einsteinovy rovnice. Pro každou analýzu budou zaznamenána tři videa o délce 60 s.
Analýza Western Blot bude provedena na proteinovém lyzátu po EV imunozáchytu (pomocí kuliček pokrytých protilátkami proti EV specifickým tetraspaninům, CD9, CD63 a CD81). Bloty reprezentativních vzorků budou inkubovány s primárními protilátkami proti specifickým markerům exprimovaným na povrchu nebo v EV (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) a potenciálním kontaminantům (GRP94, Apolipoprotein A1, Apolipoprotein B48).
EV profilování bude provedeno pomocí standardizovaného průtokového cytometrického testu založeného na multiplexních perličkách s použitím MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Německo), jak bylo popsáno dříve. 22 Současně bude provedena detekce 37 různých povrchových antigenů běžně exprimovaných na EV membráně (včetně markerů z aktivovaných krevních destiček, endotelu a zánětlivých buněk). Pozadí bude odečteno od hodnoty MFI každého markeru a poté normalizováno pomocí středních úrovní intenzity fluorescence (MFI) CD9, CD63 a CD81. Hladiny exprese budou uvedeny jako normalizované MFI (nMFI; %) pro každý EV-povrchový antigen (střední hodnota a mezikvartilní rozmezí).
Po počátečním screeningu multiplexním testem budou jednotlivé kandidátní biomarkery EV potvrzeny buď reverzní průtokovou cytometrií, nebo technikami ELISA.
Cytometrický test s reverzním průtokem bude proveden izolací EV pomocí záchytných kuliček potažených protilátkami proti CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro) a poté inkubovaných s protilátkami konjugovanými s fluorochromem proti jednotlivým povrchovým antigenům EV, spojeným s diagnózou pacienta během počátečního vyšetření. screening testem MACSPlex. Kuličky inkubované s izotypově shodnými protilátkami a perličky inkubované v nepřítomnosti vezikul budou sloužit jako kontroly. Kandidátské biomarkery EV budou potvrzeny také technikou ELISA za použití specifických protilátek podle pokynů výrobce.
Typ studie
Zápis (Odhadovaný)
Kontakty a umístění
Studijní kontakt
- Jméno: Carlo Walter Cereda, PI
- Telefonní číslo: +41918116691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
Studijní záloha kontaktů
- Jméno: Giovanni Bianco
- Telefonní číslo: +41918117073
- E-mail: giovanni.bianco@eoc.ch
Studijní místa
-
-
Ticino
-
Lugano, Ticino, Švýcarsko, CH-6900
- Nábor
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
-
Vrchní vyšetřovatel:
- Carlo Cereda
-
Kontakt:
- Carlo Cereda, MD
- Telefonní číslo: +41 91 811 6691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
-
Dílčí vyšetřovatel:
- Giovanni Bianco
-
Dílčí vyšetřovatel:
- Lucio Barile
-
-
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
- Dospělý
- Starší dospělý
Přijímá zdravé dobrovolníky
Metoda odběru vzorků
Studijní populace
Popis
Kritéria pro zařazení:
Ovlivněný:
I. Podezření na ischemickou menší cévní mozkovou příhodu (akutní ztráta fokální mozkové funkce předpokládané vaskulární etiologie a NIHSS ≤327, 28) do 48 hodin od nástupu příznaků nebo II. TIA (definovaná jako akutní nástup fokálních neurologických příznaků trvajících < 24 hodin, u nichž se předpokládá, že jsou způsobeny ischemií mozku v době doporučení)19 III. Příznaky napodobující I. nebo II. s ale s vysokým podezřením na neischemický stav, který je příčinou události;
2) věk ≥18 let; 3) pokud bude magnetická rezonance mozku provedena do 48-72 hodin od přijetí; 4) pokud je výchozí CT/MRI bez krvácení; 5) pokud byl získán informovaný souhlas.
Kritéria vyloučení:
- oční TIA (amaurosis fugax);
- kontraindikace pro MRI;
- těhotenství;
- doprovodné akutní/chronické zánětlivé onemocnění (např. infekce, autoimunitní onemocnění);
- průvodní hematologická onemocnění;
- infekce centrálního nervového systému do 30 dnů;
- vážné poranění hlavy do 30 dnů;
- velký chirurgický zákrok do 90 dnů.
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
Kohorty a intervence
Skupina / kohorta |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
Mrtvice
|
Pacienti podstoupí vzorek krve pro EV analýzy: EV budou charakterizovány analýzou sledování nanočástic, western blotem, průtokovou cytometrií na bázi perliček (přímý a inverzní přístup) a ELISA. Průměr a koncentraci sérových nanočástic (NP) budeme hodnotit analýzou sledování nanočástic (NTA) pomocí NanoSight LM10. Analýza Western Blot bude provedena na proteinovém lyzátu po EV imunozáchytu (pomocí kuliček pokrytých protilátkami proti EV specifickým tetraspaninům, CD9, CD63 a CD81). EV profilování bude provedeno pomocí standardizovaného průtokového cytometrického testu založeného na multiplexních perličkách s použitím MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Německo), jak bylo popsáno dříve. 22 Současně bude provedena detekce 37 různých povrchových antigenů běžně exprimovaných na EV membráně (včetně markerů z aktivovaných krevních destiček, endotelu a zánětlivých buněk). |
|
TIA
|
Pacienti podstoupí vzorek krve pro EV analýzy: EV budou charakterizovány analýzou sledování nanočástic, western blotem, průtokovou cytometrií na bázi perliček (přímý a inverzní přístup) a ELISA. Průměr a koncentraci sérových nanočástic (NP) budeme hodnotit analýzou sledování nanočástic (NTA) pomocí NanoSight LM10. Analýza Western Blot bude provedena na proteinovém lyzátu po EV imunozáchytu (pomocí kuliček pokrytých protilátkami proti EV specifickým tetraspaninům, CD9, CD63 a CD81). EV profilování bude provedeno pomocí standardizovaného průtokového cytometrického testu založeného na multiplexních perličkách s použitím MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Německo), jak bylo popsáno dříve. 22 Současně bude provedena detekce 37 různých povrchových antigenů běžně exprimovaných na EV membráně (včetně markerů z aktivovaných krevních destiček, endotelu a zánětlivých buněk). |
|
Mimika mrtvice
|
Pacienti podstoupí vzorek krve pro EV analýzy: EV budou charakterizovány analýzou sledování nanočástic, western blotem, průtokovou cytometrií na bázi perliček (přímý a inverzní přístup) a ELISA. Průměr a koncentraci sérových nanočástic (NP) budeme hodnotit analýzou sledování nanočástic (NTA) pomocí NanoSight LM10. Analýza Western Blot bude provedena na proteinovém lyzátu po EV imunozáchytu (pomocí kuliček pokrytých protilátkami proti EV specifickým tetraspaninům, CD9, CD63 a CD81). EV profilování bude provedeno pomocí standardizovaného průtokového cytometrického testu založeného na multiplexních perličkách s použitím MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Německo), jak bylo popsáno dříve. 22 Současně bude provedena detekce 37 různých povrchových antigenů běžně exprimovaných na EV membráně (včetně markerů z aktivovaných krevních destiček, endotelu a zánětlivých buněk). |
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Odlišení TIA od napodobenin TIA
Časové okno: 72 hodin od nástupu příznaků
|
určit výkon profilování EV (analýza antigenů exprimovaných na povrchu vezikul), přidané ke strukturovanému klinickému (PREDISC skóre) a zobrazovacímu hodnocení (MRI mozku), k rozlišení TIA od napodobenin TIA (neischemické příhody).
|
72 hodin od nástupu příznaků
|
Sekundární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
TIA odlišení od mrtvice
Časové okno: akutní fáze, 3 a 12 měsíců
|
určit výkon EV profilování k rozlišení mezi TIA (s negativní MRI pro akutní léze) a akutními ischemickými mrtvicemi (AIS, MRI potvrzeno).
|
akutní fáze, 3 a 12 měsíců
|
|
Etiologie mrtvice
Časové okno: akutní fáze, 3 a 12 měsíců
|
určit výkonnost profilování EV pro kategorizaci předem specifikovaných příčin ischemických příhod
|
akutní fáze, 3 a 12 měsíců
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Sponzor
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia (Aktuální)
Primární dokončení (Odhadovaný)
Dokončení studie (Odhadovaný)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (Aktuální)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (Aktuální)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Další relevantní podmínky MeSH
Další identifikační čísla studie
- NSISTRCR_2201
Plán pro data jednotlivých účastníků (IPD)
Plánujete sdílet data jednotlivých účastníků (IPD)?
Informace o lécích a zařízeních, studijní dokumenty
Studuje lékový produkt regulovaný americkým FDA
Studuje produkt zařízení regulovaný americkým úřadem FDA
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .