Ekstracellulære vesikeloverflademarkører ved akutte cerebrovaskulære syndromer. (ElViS-ACS)
Klinisk implikation af eventuelle blodbiomarkører for slagtilfældediagnose og -prognose vil være begrænset, hovedsageligt fordi klinisk evaluering og skalaer (som giver slagtilfældes sværhedsgrad) eller neuroimaging (som giver nøjagtig størrelse af læsionen) er mere pålidelige prædiktorer for forudsigelse af klinisk resultat. I klinisk praksis vil det være mere nyttigt at finde en biomarkør, som kan hjælpe med at orientere lægen i forhold, hvor det kliniske billede og billeddiagnostik yder en begrænset støtte.
Forbigående iskæmiske angreb (TIA) repræsenterer et klassisk eksempel, hvor en biomarkør ville være af interesse for at bekræfte og skelne en hjerneiskæmisk proces fra en slagtilfælde. Diagnostiske biomarkører for TIA er blevet undersøgt, men ingen af de potentielle kandidater nåede tilstrækkelig nøjagtighed til TIA-diagnose. Vores gruppe har fundet ud af, at ekstracellulære vesikler (EV'er) kunne være nyttige som biomarkører til påvisning af hjerneiskæmi hos patienter med TIA, fordi EV-overfladeantigenprofilen ser ud til at være anderledes hos patienter med forbigående symptomer, vurderet til at være forårsaget af hjerneiskæmi, sammenlignet med patienter, hvis symptomer var mindre tilbøjelige til at skyldes hjerneiskæmi. Vores undersøgelse har vakt interesse i det videnskabelige samfund, der anerkender den lovende rolle, som blod-afledte EVs-analyser spiller i udvidelsen af mulighederne for korrekt diagnosticering og klassificering af TIA og slagtilfælde, skelne dem fra TIA eller slagtilfælde efterligninger, med vigtige fremtidige implikationer i håndtering og terapi. af patienterne med akut iskæmisk cerebrovaskulært syndrom. validiteten af vores tilgang skal testes i en større, prospektiv, multicenter undersøgelse.
Studieoversigt
Status
Betingelser
Intervention / Behandling
Detaljeret beskrivelse
Karakterisering af ekstracellulære vesikler Ekstracellulære vesikler (EV'er) vil blive karakteriseret i præ-clearede serumprøver (se overførsel og håndtering af blodprøver). EV'er vil blive karakteriseret ved nanopartikelsporingsanalyse, western blot, perlebaseret flowcytometri (direkte og omvendt tilgang) og ELISA.
Vi vil evaluere diameter og koncentration af serumnanopartikler (NP'er) ved hjælp af nanopartikelsporingsanalyse (NTA) ved hjælp af NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Storbritannien) udstyret med en 405 nm laser og Nanopartikelsporingsanalyse NTA 2.3 analytisk software. Et kamera vil optage Brownske bevægelser af EV'er, og størrelse og antal EV'er pr. ml vil blive beregnet ved Stokes-Einstein-ligning. Tre videoer på 60 s vil blive optaget for hver analyse.
Western Blot-analyse vil blive udført på proteinlysat efter EV-immuno-capture (ved hjælp af perler dækket med antistoffer mod EV-specifikke tetraspaniner, CD9, CD63 og CD81). Blots af repræsentative prøver vil blive inkuberet med primære antistoffer mod specifikke markører udtrykt på overfladen eller i EV'er (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) og potentielle kontaminanter (GRP94, Apolipoprotein A1, Apolipoprotein B48).
EV-profilering vil blive udført ved hjælp af et standardiseret multipleks perlebaseret flowcytometrisk assay ved hjælp af MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Tyskland), som tidligere beskrevet. 22 Påvisningen af 37 forskellige overfladeantigener, der almindeligvis udtrykkes på EV-membranen (inklusive markører fra aktiverede blodplader, endotel og inflammatoriske celler) vil blive udført samtidigt. Baggrunden vil blive trukket fra MFI-værdien for hver markør og derefter normaliseret ved hjælp af de gennemsnitlige fluorescensintensitetsniveauer (MFI) for CD9, CD63 og CD81. Ekspressionsniveauer vil blive rapporteret som normaliseret MFI (nMFI; %) for hvert EV-overfladeantigen (medianværdi og interkvartilområde).
Efter en indledende screening ved multiplekset assay, vil enkelte kandidat EV-biomarkører blive bekræftet ved enten omvendt flowcytometri og ELISA-teknikker.
Det omvendte flow-cytometriske assay vil blive udført ved at isolere EV'er ved at fange perler belagt med antistoffer mod CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro) og derefter inkuberes med fluorochrom-konjugerede antistoffer mod enkelte EV-overfladeantigener, forbundet med patientdiagnosen under den indledende diagnose. screening ved MACSPlex-assay. Perler inkuberet med isotype-matchede antistoffer og perler inkuberet i fravær af vesikler vil tjene som kontroller. Kandidater til EV-biomarkører vil også blive bekræftet ved hjælp af ELISA-teknik ved brug af specifikke antistoffer i henhold til producentens instruktioner.
Undersøgelsestype
Tilmelding (Anslået)
Kontakter og lokationer
Studiekontakt
- Navn: Carlo Walter Cereda, PI
- Telefonnummer: +41918116691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
Undersøgelse Kontakt Backup
- Navn: Giovanni Bianco
- Telefonnummer: +41918117073
- E-mail: giovanni.bianco@eoc.ch
Studiesteder
-
-
Ticino
-
Lugano, Ticino, Schweiz, CH-6900
- Rekruttering
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
-
Ledende efterforsker:
- Carlo Cereda
-
Kontakt:
- Carlo Cereda, MD
- Telefonnummer: +41 91 811 6691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
-
Underforsker:
- Giovanni Bianco
-
Underforsker:
- Lucio Barile
-
-
Deltagelseskriterier
Berettigelseskriterier
Aldre berettiget til at studere
- Voksen
- Ældre voksen
Tager imod sunde frivillige
Prøveudtagningsmetode
Studiebefolkning
Beskrivelse
Inklusionskriterier:
Påvirket af:
I. Mistanke om iskæmisk mindre slagtilfælde (akut tab af fokal cerebral funktion af formodet vaskulær ætiologi og NIHSS ≤327, 28) inden for 48 timer efter symptomernes begyndelse eller II. TIA (defineret som den akutte indtræden af fokale neurologiske symptomer, der varer <24 timer og formodes at være forårsaget af hjerneiskæmi på henvisningstidspunktet)19 III. Symptomer, der efterligner I. eller II. med, men med høj mistanke om, at en ikke-iskæmisk tilstand er årsag til hændelsen;
2) alder ≥18 år; 3) hvis cerebral magnetisk resonansbilleddannelse vil blive udført inden for 48-72 timer fra indlæggelsen; 4) hvis baseline CT/MRI er uden blødning; 5) hvis informeret samtykke opnås.
Ekskluderingskriterier:
- okulær TIA (amaurosis fugax);
- kontraindikationer for MR;
- graviditet;
- samtidig akut/kronisk inflammatorisk sygdom (f.eks. infektioner, autoimmun sygdom);
- samtidige hæmatologiske sygdomme;
- infektion i centralnervesystemet inden for 30 dage;
- alvorligt hovedtraume inden for 30 dage;
- større operation inden for 90 dage.
Studieplan
Hvordan er undersøgelsen tilrettelagt?
Design detaljer
Kohorter og interventioner
Gruppe / kohorte |
Intervention / Behandling |
|---|---|
|
Slag
|
Patienterne gennemgår en blodprøve til EV-analyser: EV'er vil blive karakteriseret ved nanopartikelsporingsanalyse, western blot, perlebaseret flowcytometri (direkte og omvendt tilgang) og ELISA. Vi vil evaluere diameter og koncentration af serumnanopartikler (NP'er) ved hjælp af nanopartikelsporingsanalyse (NTA) ved hjælp af NanoSight LM10. Western Blot-analyse vil blive udført på proteinlysat efter EV-immuno-capture (ved hjælp af perler dækket med antistoffer mod EV-specifikke tetraspaniner, CD9, CD63 og CD81). EV-profilering vil blive udført ved hjælp af et standardiseret multipleks perlebaseret flowcytometrisk assay ved hjælp af MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Tyskland), som tidligere beskrevet. 22 Påvisningen af 37 forskellige overfladeantigener, der almindeligvis udtrykkes på EV-membranen (inklusive markører fra aktiverede blodplader, endotel og inflammatoriske celler) vil blive udført samtidigt. |
|
TIA
|
Patienterne gennemgår en blodprøve til EV-analyser: EV'er vil blive karakteriseret ved nanopartikelsporingsanalyse, western blot, perlebaseret flowcytometri (direkte og omvendt tilgang) og ELISA. Vi vil evaluere diameter og koncentration af serumnanopartikler (NP'er) ved hjælp af nanopartikelsporingsanalyse (NTA) ved hjælp af NanoSight LM10. Western Blot-analyse vil blive udført på proteinlysat efter EV-immuno-capture (ved hjælp af perler dækket med antistoffer mod EV-specifikke tetraspaniner, CD9, CD63 og CD81). EV-profilering vil blive udført ved hjælp af et standardiseret multipleks perlebaseret flowcytometrisk assay ved hjælp af MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Tyskland), som tidligere beskrevet. 22 Påvisningen af 37 forskellige overfladeantigener, der almindeligvis udtrykkes på EV-membranen (inklusive markører fra aktiverede blodplader, endotel og inflammatoriske celler) vil blive udført samtidigt. |
|
Stroke Mimic
|
Patienterne gennemgår en blodprøve til EV-analyser: EV'er vil blive karakteriseret ved nanopartikelsporingsanalyse, western blot, perlebaseret flowcytometri (direkte og omvendt tilgang) og ELISA. Vi vil evaluere diameter og koncentration af serumnanopartikler (NP'er) ved hjælp af nanopartikelsporingsanalyse (NTA) ved hjælp af NanoSight LM10. Western Blot-analyse vil blive udført på proteinlysat efter EV-immuno-capture (ved hjælp af perler dækket med antistoffer mod EV-specifikke tetraspaniner, CD9, CD63 og CD81). EV-profilering vil blive udført ved hjælp af et standardiseret multipleks perlebaseret flowcytometrisk assay ved hjælp af MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Tyskland), som tidligere beskrevet. 22 Påvisningen af 37 forskellige overfladeantigener, der almindeligvis udtrykkes på EV-membranen (inklusive markører fra aktiverede blodplader, endotel og inflammatoriske celler) vil blive udført samtidigt. |
Hvad måler undersøgelsen?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
TIA-differentiering fra TIA-efterligninger
Tidsramme: 72 timer fra symptomernes opståen
|
bestemme ydeevnen af EV-profilering (analyse af antigener udtrykt på vesikleroverfladen), tilføjet til en struktureret klinisk (PREDISC-score) og billeddannelsesevaluering (hjerne-MRI), for at skelne TIA'er fra TIA-efterligninger (ikke-iskæmiske hændelser).
|
72 timer fra symptomernes opståen
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
TIA differentiering fra slagtilfælde
Tidsramme: akut fase, 3 og 12 måneder
|
bestemme udførelsen af EV-profilering for at skelne mellem TIA'er (med negativ MR for akut læsion) og akutte iskæmiske slagtilfælde (AIS, MR bekræftet).
|
akut fase, 3 og 12 måneder
|
|
Etiologi af slagtilfælde
Tidsramme: akut fase, 3 og 12 måneder
|
bestemme ydeevnen af profilering af elbiler for at kategorisere forudspecificerede årsager til iskæmiske hændelser
|
akut fase, 3 og 12 måneder
|
Samarbejdspartnere og efterforskere
Sponsor
Datoer for undersøgelser
Studer store datoer
Studiestart (Faktiske)
Primær færdiggørelse (Anslået)
Studieafslutning (Anslået)
Datoer for studieregistrering
Først indsendt
Først indsendt, der opfyldte QC-kriterier
Først opslået (Faktiske)
Opdateringer af undersøgelsesjournaler
Sidste opdatering sendt (Faktiske)
Sidste opdatering indsendt, der opfyldte kvalitetskontrolkriterier
Sidst verificeret
Mere information
Begreber relateret til denne undersøgelse
Yderligere relevante MeSH-vilkår
Andre undersøgelses-id-numre
- NSISTRCR_2201
Plan for individuelle deltagerdata (IPD)
Planlægger du at dele individuelle deltagerdata (IPD)?
Lægemiddel- og udstyrsoplysninger, undersøgelsesdokumenter
Studerer et amerikansk FDA-reguleret lægemiddelprodukt
Studerer et amerikansk FDA-reguleret enhedsprodukt
Disse oplysninger blev hentet direkte fra webstedet clinicaltrials.gov uden ændringer. Hvis du har nogen anmodninger om at ændre, fjerne eller opdatere dine undersøgelsesoplysninger, bedes du kontakte register@clinicaltrials.gov. Så snart en ændring er implementeret på clinicaltrials.gov, vil denne også blive opdateret automatisk på vores hjemmeside .