Solunulkoiset rakkulapinnan merkit akuuteissa aivoverisuonioireyhtymissä. (ElViS-ACS)
Mahdollisten veren biomarkkerien kliininen merkitys aivohalvauksen diagnoosissa ja ennusteessa olisi rajallinen, lähinnä siksi, että kliininen arviointi ja asteikot (jotka antavat aivohalvauksen vakavuuden) tai neurokuvantaminen (tarjoavat leesion tarkan koon) ovat luotettavampia ennustajia kliinisen lopputuloksen ennustamisessa. Kliinisessä käytännössä olisi hyödyllisempää löytää biomarkkeri, joka voi auttaa lääkäriä orientoitumaan olosuhteissa, joissa kliininen kuva ja kuvantaminen tarjoavat rajoitettua tukea.
Ohimenevät iskeemiset hyökkäykset (TIA:t) ovat klassinen esimerkki, josta biomarkkeri olisi kiinnostava vahvistamaan ja erottamaan aivojen iskeeminen prosessi aivohalvauksen jäljittelemisestä. TIA:n diagnostisia biomarkkereita on tutkittu, mutta yksikään potentiaalisista ehdokkaista ei saavuttanut riittävää tarkkuutta TIA-diagnoosille. Ryhmämme on havainnut, että solunulkoiset rakkulat (EV:t) voisivat olla hyödyllisiä biomarkkereina aivoiskemian havaitsemiseen potilailla, joilla on TIA, koska EV-pinnan antigeeniprofiili näyttää olevan erilainen potilailla, joilla on ohimeneviä oireita, joiden katsotaan olevan hyvin todennäköisesti aivoiskemian aiheuttamia. verrattuna potilaisiin, joiden oireet olivat vähemmän todennäköisiä aivoiskemian vuoksi. Tutkimuksemme on herättänyt kiinnostusta tiedeyhteisössä, joka tunnustaa verestä peräisin olevien sähköisten sähkölaitteiden analyysin lupaavan roolin laajentaessaan mahdollisuuksia diagnosoida ja luokitella oikein TIA- ja aivohalvaustapahtumia, erottaa ne TIA:sta tai aivohalvauksen jäljittelijöistä, millä on tärkeitä tulevaisuuden vaikutuksia hallintaan ja hoitoon. potilaista, joilla on akuutti iskeeminen aivoverisuonioireyhtymä. lähestymistapamme pätevyys on testattava suuremmassa, tulevaisuuden monikeskustutkimuksessa.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Solunulkoisten rakkuloiden karakterisointi Solunulkoiset vesikkelit (EV:t) karakterisoidaan esipuhdistetuissa seeruminäytteissä (katso verinäytteiden siirto ja hallinta). Sähköautot karakterisoidaan nanopartikkelien seuranta-analyysillä, Western blotilla, helmipohjaisella virtaussytometrialla (suora ja käänteinen lähestymistapa) ja ELISA.
Arvioimme seerumin nanopartikkelien (NP) halkaisijan ja konsentraation nanopartikkelien seuranta-analyysillä (NTA) käyttämällä NanoSight LM10:tä (Malvern Instruments, Iso-Britannia), joka on varustettu 405 nm laserilla ja Nanoparticle Tracking Analysis NTA 2.3 -analyyttisellä ohjelmistolla. Kamera tallentaa sähköautojen Brownin liikkeen ja sähköautojen koko ja lukumäärä millilitraa kohti lasketaan Stokes-Einstein-yhtälön avulla. Jokaista analyysiä varten tallennetaan kolme 60 sekunnin videota.
Western Blot -analyysi suoritetaan proteiinilysaatille EV-immunokaappauksen jälkeen (käyttäen helmiä, jotka on peitetty vasta-aineilla EV-spesifisiä tetraspaniineja, CD9, CD63 ja CD81 vastaan). Edustavien näytteiden blotteja inkuboidaan primääristen vasta-aineiden kanssa, jotka ovat pinnalla tai EV:issä ekspressoituneita spesifisiä markkereita (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) ja mahdollisia kontaminantteja (GRP94, Apolipoproteiini A1, Apolipoproteiini B48).
EV-profilointi suoritetaan käyttämällä standardoitua multiplex-helmipohjaista virtaussytometristä määritystä käyttämällä MACSPlex Human Exosome Kit -pakkausta (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Saksa), kuten aiemmin on kuvattu. 22 EV-kalvolla yleisesti ilmennetyn 37 erilaisen pinta-antigeenin (mukaan lukien aktivoiduista verihiutaleista, endoteelistä ja tulehdussoluista saadut markkerit) havaitseminen suoritetaan samanaikaisesti. Tausta vähennetään kunkin markkerin MFI-arvosta ja normalisoidaan sitten käyttämällä CD9:n, CD63:n ja CD81:n keskimääräisiä fluoresenssin intensiteettitasoja (MFI). Ilmentymistasot raportoidaan normalisoituna MFI:nä (nMFI; %) jokaiselle EV-pinta-antigeenille (mediaaniarvo ja kvartiiliväli).
Multipleksoidulla määrityksellä tehdyn alustavan seulonnan jälkeen yksittäiset EV-biomarkkerit vahvistetaan joko käänteisvirtaussytometrialla ja ELISA-tekniikoilla.
Käänteinen virtaussytometrinen määritys suoritetaan eristämällä EV:t sieppaushelmillä, jotka on päällystetty vasta-aineilla CD9-CD63-CD81:tä vastaan (EpCam; JSR Micro) ja inkuboidaan sitten fluorokromikonjugoitujen vasta-aineiden kanssa yksittäisiä EV-pinta-antigeenejä vastaan, jotka liittyvät potilaan diagnoosiin alkuperäisen diagnoosin aikana. seulonta MACSPlex-määrityksellä. Helmet, joita on inkuboitu isotyyppiä vastaavien vasta-aineiden kanssa, ja helmet, joita on inkuboitu rakkuloiden puuttuessa, toimivat kontrolleina. Ehdokkaat EV-biomarkkerit varmistetaan myös ELISA-tekniikalla käyttämällä spesifisiä vasta-aineita valmistajan ohjeiden mukaisesti.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Arvioitu)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskeluyhteys
- Nimi: Carlo Walter Cereda, PI
- Puhelinnumero: +41918116691
- Sähköposti: carlo.cereda@eoc.ch
Tutki yhteystietojen varmuuskopiointi
- Nimi: Giovanni Bianco
- Puhelinnumero: +41918117073
- Sähköposti: giovanni.bianco@eoc.ch
Opiskelupaikat
-
-
Ticino
-
Lugano, Ticino, Sveitsi, CH-6900
- Rekrytointi
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
-
Päätutkija:
- Carlo Cereda
-
Ottaa yhteyttä:
- Carlo Cereda, MD
- Puhelinnumero: +41 91 811 6691
- Sähköposti: carlo.cereda@eoc.ch
-
Alatutkija:
- Giovanni Bianco
-
Alatutkija:
- Lucio Barile
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
- Aikuinen
- Vanhempi Aikuinen
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
Vaikuttanut:
I. Epäilty iskeeminen pieni aivohalvaus (akuutti fokaalisen aivotoiminnan menetys oletetun verisuoniperäisen etiologian vuoksi ja NIHSS ≤327, 28) 48 tunnin kuluessa oireiden alkamisesta tai II. TIA (määritelty alle 24 tuntia kestävien fokaalisten neurologisten oireiden akuutiksi puhkeamiseksi, jonka oletetaan johtuvan aivoiskemiasta lähetehetkellä)19 III. Oireet, jotka jäljittelevät I. tai II. mutta suurella epäilyksellä, että tapahtuman syy on ei-iskeeminen tila;
2) ikä ≥18 vuotta; 3) tehdäänkö aivojen magneettikuvaus 48–72 tunnin kuluessa vastaanotosta; 4) jos lähtötason CT/MRI ei ole verenvuotoa; 5) jos tietoon perustuva suostumus on saatu.
Poissulkemiskriteerit:
- silmän TIA (amaurosis fugax);
- vasta-aiheet MRI:lle;
- raskaus;
- samanaikainen akuutti/krooninen tulehdussairaus (esim. infektiot, autoimmuunisairaus);
- samanaikaiset hematologiset sairaudet;
- Keskushermoston infektio 30 päivän kuluessa;
- vakava päävamma 30 päivän kuluessa;
- suuri leikkaus 90 päivän kuluessa.
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Aivohalvaus
|
Potilailta otetaan verinäyte EV-analyysejä varten: EV:t karakterisoidaan nanopartikkelien seurantaanalyysillä, Western blotilla, helmipohjaisella virtaussytometrillä (suora ja käänteinen lähestymistapa) ja ELISA. Arvioimme seerumin nanopartikkelien (NP) halkaisijan ja pitoisuuden nanopartikkelien seurantaanalyysillä (NTA) käyttämällä NanoSight LM10:tä. Western Blot -analyysi suoritetaan proteiinilysaatille EV-immunokaappauksen jälkeen (käyttäen helmiä, jotka on peitetty vasta-aineilla EV-spesifisiä tetraspaniineja, CD9, CD63 ja CD81 vastaan). EV-profilointi suoritetaan käyttämällä standardoitua multiplex-helmipohjaista virtaussytometristä määritystä käyttämällä MACSPlex Human Exosome Kit -pakkausta (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Saksa), kuten aiemmin on kuvattu. 22 EV-kalvolla yleisesti ilmennetyn 37 erilaisen pinta-antigeenin (mukaan lukien aktivoiduista verihiutaleista, endoteelistä ja tulehdussoluista saadut markkerit) havaitseminen suoritetaan samanaikaisesti. |
|
TIA
|
Potilailta otetaan verinäyte EV-analyysejä varten: EV:t karakterisoidaan nanopartikkelien seurantaanalyysillä, Western blotilla, helmipohjaisella virtaussytometrillä (suora ja käänteinen lähestymistapa) ja ELISA. Arvioimme seerumin nanopartikkelien (NP) halkaisijan ja pitoisuuden nanopartikkelien seurantaanalyysillä (NTA) käyttämällä NanoSight LM10:tä. Western Blot -analyysi suoritetaan proteiinilysaatille EV-immunokaappauksen jälkeen (käyttäen helmiä, jotka on peitetty vasta-aineilla EV-spesifisiä tetraspaniineja, CD9, CD63 ja CD81 vastaan). EV-profilointi suoritetaan käyttämällä standardoitua multiplex-helmipohjaista virtaussytometristä määritystä käyttämällä MACSPlex Human Exosome Kit -pakkausta (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Saksa), kuten aiemmin on kuvattu. 22 EV-kalvolla yleisesti ilmennetyn 37 erilaisen pinta-antigeenin (mukaan lukien aktivoiduista verihiutaleista, endoteelistä ja tulehdussoluista saadut markkerit) havaitseminen suoritetaan samanaikaisesti. |
|
Aivohalvauksen jäljitelmä
|
Potilailta otetaan verinäyte EV-analyysejä varten: EV:t karakterisoidaan nanopartikkelien seurantaanalyysillä, Western blotilla, helmipohjaisella virtaussytometrillä (suora ja käänteinen lähestymistapa) ja ELISA. Arvioimme seerumin nanopartikkelien (NP) halkaisijan ja pitoisuuden nanopartikkelien seurantaanalyysillä (NTA) käyttämällä NanoSight LM10:tä. Western Blot -analyysi suoritetaan proteiinilysaatille EV-immunokaappauksen jälkeen (käyttäen helmiä, jotka on peitetty vasta-aineilla EV-spesifisiä tetraspaniineja, CD9, CD63 ja CD81 vastaan). EV-profilointi suoritetaan käyttämällä standardoitua multiplex-helmipohjaista virtaussytometristä määritystä käyttämällä MACSPlex Human Exosome Kit -pakkausta (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Saksa), kuten aiemmin on kuvattu. 22 EV-kalvolla yleisesti ilmennetyn 37 erilaisen pinta-antigeenin (mukaan lukien aktivoiduista verihiutaleista, endoteelistä ja tulehdussoluista saadut markkerit) havaitseminen suoritetaan samanaikaisesti. |
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
TIA:n erottelu TIA-matkijoista
Aikaikkuna: 72 tuntia oireiden alkamisesta
|
määrittää EV-profiloinnin (rakkuloiden pinnalla ilmentyneiden antigeenien analyysi), joka lisätään strukturoituun kliiniseen (PREDISC-pistemäärä) ja kuvantamisarviointiin (aivo-MRI), tehokkuus TIA:iden erottamiseksi TIA-mimeikoista (ei-iskeemiset tapahtumat).
|
72 tuntia oireiden alkamisesta
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
TIA:n ero aivohalvauksesta
Aikaikkuna: akuutti vaihe, 3 ja 12 kuukautta
|
määrittää EV-profiloinnin suorituskyvyn erottaaksesi TIA:t (akuutin leesion negatiivinen MRI) ja akuutteja iskeemisiä aivohalvauksia (AIS, MRI vahvistettu).
|
akuutti vaihe, 3 ja 12 kuukautta
|
|
Aivohalvauksen etiologia
Aikaikkuna: akuutti vaihe, 3 ja 12 kuukautta
|
määrittää sähköautojen profiloinnin suorituskyvyn, jotta voidaan luokitella ennalta määritellyt iskeemisten tapahtumien syyt
|
akuutti vaihe, 3 ja 12 kuukautta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Arvioitu)
Opintojen valmistuminen (Arvioitu)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- NSISTRCR_2201
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .