Marcadores de superficie de vesículas extracelulares en síndromes cerebrovasculares agudos. (ElViS-ACS)
La implicación clínica de eventuales biomarcadores sanguíneos para el diagnóstico y pronóstico del accidente cerebrovascular sería limitada, principalmente porque la evaluación y las escalas clínicas (que proporcionan la gravedad del accidente cerebrovascular) o las neuroimágenes (que proporcionan el tamaño preciso de la lesión) son predictores más confiables para la predicción del resultado clínico. En la práctica clínica, sería más útil encontrar un biomarcador que pueda ayudar a orientar al médico en condiciones en las que el cuadro clínico y las imágenes proporcionan un apoyo limitado.
Los ataques isquémicos transitorios (AIT) representan un ejemplo clásico para el cual un biomarcador sería interesante para confirmar y distinguir un proceso isquémico cerebral de una imitación de un accidente cerebrovascular. Se han investigado biomarcadores de diagnóstico de AIT, pero ninguno de los posibles candidatos alcanzó la precisión suficiente para el diagnóstico de AIT. Nuestro grupo ha descubierto que las vesículas extracelulares (VE) podrían ser útiles como biomarcadores para detectar isquemia cerebral en pacientes con AIT porque el perfil del antígeno de superficie de EV parece ser diferente en pacientes con síntomas transitorios, que se consideran muy probablemente causados por isquemia cerebral. en comparación con pacientes cuyos síntomas eran menos propensos a deberse a isquemia cerebral. Nuestro estudio ha despertado el interés de la comunidad científica al reconocer el papel prometedor del análisis de vehículos eléctricos derivados de la sangre para ampliar las posibilidades de diagnosticar y clasificar correctamente los AIT y los eventos de accidente cerebrovascular, discriminarlos de los AIT o imitaciones de accidente cerebrovascular, con importantes implicaciones futuras en el manejo y la terapia. de los pacientes con síndrome cerebrovascular isquémico agudo. La validez de nuestro enfoque debe probarse en un estudio multicéntrico, prospectivo y más amplio.
Descripción general del estudio
Estado
Intervención / Tratamiento
Descripción detallada
Caracterización de vesículas extracelulares Las vesículas extracelulares (EV) se caracterizarán en muestras de suero previamente aclaradas (ver transferencia y manejo de muestras de sangre). Los vehículos eléctricos se caracterizarán mediante análisis de seguimiento de nanopartículas, transferencia Western, citometría de flujo basada en perlas (enfoque directo e inverso) y ELISA.
Evaluaremos el diámetro y la concentración de nanopartículas séricas (NP) mediante análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA) utilizando NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Reino Unido) equipado con un láser de 405 nm y un software analítico de análisis de seguimiento de nanopartículas NTA 2.3. Una cámara registrará el movimiento browniano de los vehículos eléctricos y el tamaño y la cantidad de vehículos eléctricos por ml se calcularán mediante la ecuación de Stokes-Einstein. Para cada análisis se grabarán tres vídeos de 60 s.
El análisis de Western Blot se realizará en lisado de proteínas después de la inmunocaptura de EV (utilizando perlas cubiertas con anticuerpos contra tetraspaninas específicas de EV, CD9, CD63 y CD81). Se incubarán transferencias de muestras representativas con anticuerpos primarios contra marcadores específicos expresados en la superficie o dentro de los vehículos eléctricos (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) y contaminantes potenciales (GRP94, apolipoproteína A1, apolipoproteína B48).
El perfil de EV se realizará utilizando un ensayo de citometría de flujo basado en perlas múltiples estandarizado, utilizando el kit de exosomas humanos MACSPlex (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Alemania), como se describió anteriormente. 22 Se realizará simultáneamente la detección de 37 antígenos de superficie diferentes comúnmente expresados en la membrana de EV (incluidos marcadores de plaquetas activadas, endotelio y células inflamatorias). El fondo se restará del valor MFI de cada marcador y luego se normalizará utilizando los niveles medios de intensidad de fluorescencia (MFI) de CD9, CD63 y CD81. Los niveles de expresión se informarán como MFI normalizado (nMFI; %) para cada antígeno de superficie EV (valor medio y rango intercuartil).
Después de una selección inicial mediante ensayo multiplexado, los biomarcadores EV candidatos únicos se confirmarán mediante técnicas de citometría de flujo inverso y ELISA.
El ensayo de citometría de flujo inverso se realizará aislando EV mediante perlas de captura recubiertas con anticuerpos contra CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro) y luego incubadas con anticuerpos conjugados con fluorocromo contra antígenos de superficie de EV únicos, asociados al diagnóstico del paciente durante la fase inicial. cribado mediante ensayo MACSPlex. Las perlas incubadas con anticuerpos de isotipo coincidente y las perlas incubadas en ausencia de vesículas servirán como controles. Los biomarcadores de EV candidatos se confirmarán también mediante la técnica ELISA, utilizando anticuerpos específicos según las instrucciones del fabricante.
Tipo de estudio
Inscripción (Estimado)
Contactos y Ubicaciones
Estudio Contacto
- Nombre: Carlo Walter Cereda, PI
- Número de teléfono: +41918116691
- Correo electrónico: carlo.cereda@eoc.ch
Copia de seguridad de contactos de estudio
- Nombre: Giovanni Bianco
- Número de teléfono: +41918117073
- Correo electrónico: giovanni.bianco@eoc.ch
Ubicaciones de estudio
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Ticino
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Lugano, Ticino, Suiza, CH-6900
- Reclutamiento
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
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Investigador principal:
- Carlo Cereda
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Contacto:
- Carlo Cereda, MD
- Número de teléfono: +41 91 811 6691
- Correo electrónico: carlo.cereda@eoc.ch
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Sub-Investigador:
- Giovanni Bianco
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Sub-Investigador:
- Lucio Barile
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Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
- Adulto
- Adulto Mayor
Acepta Voluntarios Saludables
Método de muestreo
Población de estudio
Descripción
Criterios de inclusión:
Afectado por:
I. Sospechar de accidente cerebrovascular isquémico menor (pérdida aguda de función cerebral focal de presunta etiología vascular y NIHSS ≤327, 28) dentro de las 48 horas posteriores al inicio de los síntomas o II. AIT (definido como la aparición aguda de síntomas neurológicos focales que duran <24 h y que se presume son causados por isquemia cerebral en el momento de la derivación)19 III. Síntomas que imitan I. o II. con alta sospecha de que la causa del evento sea una condición no isquémica;
2) edad ≥18 años; 3) si se realizará una resonancia magnética cerebral dentro de las 48-72 horas posteriores al ingreso; 4) si la TC/RM inicial no presenta hemorragia; 5) si se obtuvo el consentimiento informado.
Criterio de exclusión:
- AIT ocular (amaurosis fugaz);
- contraindicaciones para resonancia magnética;
- el embarazo;
- enfermedad inflamatoria aguda/crónica concomitante (por ejemplo, infecciones, enfermedad autoinmune);
- enfermedades hematológicas concomitantes;
- Infección del sistema nervioso central dentro de los 30 días;
- traumatismo craneoencefálico grave en un plazo de 30 días;
- cirugía mayor dentro de los 90 días.
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
Intervención / Tratamiento |
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Ataque
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Los pacientes se someten a una muestra de sangre para análisis de vehículos eléctricos: los vehículos eléctricos se caracterizarán mediante análisis de seguimiento de nanopartículas, transferencia Western, citometría de flujo basada en perlas (enfoque directo e inverso) y ELISA. Evaluaremos el diámetro y la concentración de nanopartículas séricas (NP) mediante análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA) utilizando NanoSight LM10. El análisis de Western Blot se realizará en el lisado de proteínas después de la inmunocaptura de EV (utilizando perlas cubiertas con anticuerpos contra tetraspaninas específicas de EV, CD9, CD63 y CD81). El perfil de EV se realizará utilizando un ensayo de citometría de flujo basado en perlas múltiples estandarizado, utilizando el kit de exosomas humanos MACSPlex (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Alemania), como se describió anteriormente. 22 Se realizará simultáneamente la detección de 37 antígenos de superficie diferentes comúnmente expresados en la membrana de EV (incluidos marcadores de plaquetas activadas, endotelio y células inflamatorias). |
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Tia
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Los pacientes se someten a una muestra de sangre para análisis de vehículos eléctricos: los vehículos eléctricos se caracterizarán mediante análisis de seguimiento de nanopartículas, transferencia Western, citometría de flujo basada en perlas (enfoque directo e inverso) y ELISA. Evaluaremos el diámetro y la concentración de nanopartículas séricas (NP) mediante análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA) utilizando NanoSight LM10. El análisis de Western Blot se realizará en el lisado de proteínas después de la inmunocaptura de EV (utilizando perlas cubiertas con anticuerpos contra tetraspaninas específicas de EV, CD9, CD63 y CD81). El perfil de EV se realizará utilizando un ensayo de citometría de flujo basado en perlas múltiples estandarizado, utilizando el kit de exosomas humanos MACSPlex (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Alemania), como se describió anteriormente. 22 Se realizará simultáneamente la detección de 37 antígenos de superficie diferentes comúnmente expresados en la membrana de EV (incluidos marcadores de plaquetas activadas, endotelio y células inflamatorias). |
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Imitación de trazo
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Los pacientes se someten a una muestra de sangre para análisis de vehículos eléctricos: los vehículos eléctricos se caracterizarán mediante análisis de seguimiento de nanopartículas, transferencia Western, citometría de flujo basada en perlas (enfoque directo e inverso) y ELISA. Evaluaremos el diámetro y la concentración de nanopartículas séricas (NP) mediante análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA) utilizando NanoSight LM10. El análisis de Western Blot se realizará en el lisado de proteínas después de la inmunocaptura de EV (utilizando perlas cubiertas con anticuerpos contra tetraspaninas específicas de EV, CD9, CD63 y CD81). El perfil de EV se realizará utilizando un ensayo de citometría de flujo basado en perlas múltiples estandarizado, utilizando el kit de exosomas humanos MACSPlex (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Alemania), como se describió anteriormente. 22 Se realizará simultáneamente la detección de 37 antígenos de superficie diferentes comúnmente expresados en la membrana de EV (incluidos marcadores de plaquetas activadas, endotelio y células inflamatorias). |
¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Diferenciación de TIA de imitaciones de TIA
Periodo de tiempo: 72 horas desde el inicio de los síntomas
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determinar el rendimiento del perfil EV (análisis de antígenos expresados en la superficie de las vesículas), agregado a una evaluación clínica estructurada (puntuación PREDISC) y de imágenes (resonancia magnética cerebral), para discriminar los AIT de los imitadores de AIT (eventos no isquémicos).
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72 horas desde el inicio de los síntomas
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Diferenciación entre AIT y accidente cerebrovascular
Periodo de tiempo: fase aguda, 3 y 12 meses
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determinar el rendimiento del perfil EV para diferenciar entre AIT (con resonancia magnética negativa para lesión aguda) y accidentes cerebrovasculares isquémicos agudos (AIS, confirmado por resonancia magnética).
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fase aguda, 3 y 12 meses
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Etiología del accidente cerebrovascular
Periodo de tiempo: fase aguda, 3 y 12 meses
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determinar el rendimiento de los perfiles de vehículos eléctricos para categorizar causas preespecificadas de eventos isquémicos
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fase aguda, 3 y 12 meses
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Colaboradores e Investigadores
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Fechas de registro del estudio
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (Actual)
Finalización primaria (Estimado)
Finalización del estudio (Estimado)
Fechas de registro del estudio
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Publicado por primera vez (Actual)
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- NSISTRCR_2201
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Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
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