Marqueurs de surface des vésicules extracellulaires dans les syndromes cérébrovasculaires aigus. (ElViS-ACS)
L'implication clinique d'éventuels biomarqueurs sanguins pour le diagnostic et le pronostic de l'AVC serait limitée, principalement parce que l'évaluation clinique et les échelles (fournissant la gravité de l'AVC) ou la neuroimagerie (fournissant la taille précise de la lésion) sont des prédicteurs plus fiables pour la prédiction des résultats cliniques. En pratique clinique, il serait plus utile de trouver un biomarqueur, qui puisse aider à orienter le médecin dans des conditions dans lesquelles le tableau clinique et l'imagerie fournissent un soutien limité.
Les accidents ischémiques transitoires (AIT) représentent un exemple classique pour lequel un biomarqueur serait intéressant pour confirmer et distinguer un processus ischémique cérébral d'un mime d'accident vasculaire cérébral. Les biomarqueurs diagnostiques de l'AIT ont été étudiés, mais aucun des candidats potentiels n'a atteint une précision suffisante pour le diagnostic de l'AIT. Notre groupe a découvert que les vésicules extracellulaires (VE) pourraient être utiles comme biomarqueurs pour détecter l'ischémie cérébrale chez les patients atteints d'AIT, car le profil d'antigène de surface de l'EV semble être différent chez les patients présentant des symptômes transitoires, jugés très probablement causés par une ischémie cérébrale. par rapport aux patients dont les symptômes étaient moins susceptibles d'être dus à une ischémie cérébrale. Notre étude a suscité l'intérêt de la communauté scientifique, reconnaissant le rôle prometteur de l'analyse des EV dérivés du sang dans l'élargissement des possibilités de diagnostiquer et de classer correctement les événements d'AIT et d'AVC, de les distinguer des AIT ou des imitations d'AVC, avec d'importantes implications futures dans la gestion et la thérapie. des patients atteints du syndrome vasculaire cérébral ischémique aigu. la validité de notre approche doit être testée dans le cadre d’une étude prospective et multicentrique plus large.
Aperçu de l'étude
Statut
Les conditions
Intervention / Traitement
Description détaillée
Caractérisation des vésicules extracellulaires Les vésicules extracellulaires (VE) seront caractérisées dans des échantillons de sérum pré-clarifiés (voir transfert et gestion des échantillons de sang). Les véhicules électriques seront caractérisés par analyse de suivi des nanoparticules, Western Blot, cytométrie en flux à base de billes (approche directe et inverse) et ELISA.
Nous évaluerons le diamètre et la concentration des nanoparticules sériques (NP) par analyse de suivi des nanoparticules (NTA) à l'aide de NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Royaume-Uni) équipé d'un laser 405 nm et d'un logiciel analytique d'analyse de suivi des nanoparticules NTA 2.3. Une caméra enregistrera le mouvement brownien des véhicules électriques et la taille et le nombre de véhicules électriques par ml seront calculés par l'équation de Stokes-Einstein. Trois vidéos de 60 s seront enregistrées pour chaque analyse.
L'analyse Western Blot sera effectuée sur un lysat de protéines après immuno-capture EV (en utilisant des billes recouvertes d'anticorps contre les tétraspanines spécifiques d'EV, CD9, CD63 et CD81). Des transferts d'échantillons représentatifs seront incubés avec des anticorps primaires contre des marqueurs spécifiques exprimés à la surface ou dans les EV (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) et des contaminants potentiels (GRP94, Apolipoprotéine A1, Apolipoprotéine B48).
Le profilage EV sera effectué à l'aide d'un test cytométrique en flux standardisé à base de billes multiplex, à l'aide du kit d'exosomes humains MACSPlex (Miltenyi Biotec ; Bergisch Gladbach, Allemagne), comme décrit précédemment. 22 La détection de 37 antigènes de surface différents couramment exprimés sur la membrane EV (y compris les marqueurs des plaquettes activées, de l'endothélium et des cellules inflammatoires) sera effectuée simultanément. Le fond sera soustrait de la valeur MFI de chaque marqueur, puis normalisé en utilisant les niveaux moyens d'intensité de fluorescence (MFI) de CD9, CD63 et CD81. Les niveaux d'expression seront rapportés sous forme de MFI normalisé (nMFI ; %) pour chaque antigène de surface EV (valeur médiane et plage interquartile).
Après un dépistage initial par test multiplexé, les biomarqueurs EV candidats uniques seront confirmés par cytométrie en flux inverse et techniques ELISA.
Le test cytométrique en flux inverse sera réalisé en isolant les EV par des billes de capture recouvertes d'anticorps contre CD9-CD63-CD81 (EpCam ; JSR Micro), puis incubées avec des anticorps conjugués au fluorochrome contre des antigènes de surface EV uniques, associés au diagnostic du patient lors de la phase initiale. dépistage par test MACSPlex. Les billes incubées avec des anticorps correspondant à l'isotype et les billes incubées en l'absence de vésicules serviront de contrôles. Les biomarqueurs EV candidats seront également confirmés par la technique ELISA, en utilisant des anticorps spécifiques selon les instructions du fabricant.
Type d'étude
Inscription (Estimé)
Contacts et emplacements
Coordonnées de l'étude
- Nom: Carlo Walter Cereda, PI
- Numéro de téléphone: +41918116691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
Sauvegarde des contacts de l'étude
- Nom: Giovanni Bianco
- Numéro de téléphone: +41918117073
- E-mail: giovanni.bianco@eoc.ch
Lieux d'étude
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Ticino
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Lugano, Ticino, Suisse, CH-6900
- Recrutement
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
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Chercheur principal:
- Carlo Cereda
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Contact:
- Carlo Cereda, MD
- Numéro de téléphone: +41 91 811 6691
- E-mail: carlo.cereda@eoc.ch
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Sous-enquêteur:
- Giovanni Bianco
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Sous-enquêteur:
- Lucio Barile
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Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
- Adulte
- Adulte plus âgé
Accepte les volontaires sains
Méthode d'échantillonnage
Population étudiée
La description
Critère d'intégration:
Affecté par:
I. Suspecter un accident vasculaire cérébral ischémique mineur (perte aiguë de la fonction cérébrale focale d'étiologie vasculaire présumée et NIHSS ≤327, 28) dans les 48 heures suivant l'apparition des symptômes ou II. AIT (défini comme l'apparition aiguë de symptômes neurologiques focaux durant <24 heures et présumés être causés par une ischémie cérébrale au moment de la référence)19 III. Symptômes imitant I. ou II. avec mais avec une forte suspicion qu'une affection non ischémique soit la cause de l'événement ;
2) âge ≥18 ans ; 3) si une imagerie par résonance magnétique cérébrale sera réalisée dans les 48 à 72 heures suivant l'admission ; 4) si la tomodensitométrie/IRM de base est sans hémorragie ; 5) si consentement éclairé obtenu.
Critère d'exclusion:
- AIT oculaire (amaurose fugax);
- contre-indications à l'IRM ;
- grossesse;
- maladie inflammatoire aiguë/chronique concomitante (par ex. infections, maladie auto-immune) ;
- maladies hématologiques concomitantes;
- Infection du système nerveux central dans les 30 jours ;
- traumatisme crânien grave dans les 30 jours ;
- intervention chirurgicale majeure dans les 90 jours.
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
Cohortes et interventions
Groupe / Cohorte |
Intervention / Traitement |
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Accident vasculaire cérébral
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Les patients subissent un échantillon de sang pour les analyses EV : les EV seront caractérisés par analyse de suivi des nanoparticules, Western blot, cytométrie en flux à base de billes (approche directe et inverse) et ELISA. Nous évaluerons le diamètre et la concentration des nanoparticules sériques (NP) par analyse de suivi des nanoparticules (NTA) à l'aide de NanoSight LM10. L'analyse Western Blot sera effectuée sur un lysat de protéines après immuno-capture EV (en utilisant des billes recouvertes d'anticorps contre les tétraspanines spécifiques d'EV, CD9, CD63 et CD81). Le profilage EV sera effectué à l'aide d'un test cytométrique en flux multiplex standardisé à base de billes, à l'aide du kit MACSPlex Human Exosome (Miltenyi Biotec ; Bergisch Gladbach, Allemagne), comme décrit précédemment. 22 La détection de 37 antigènes de surface différents couramment exprimés sur la membrane EV (y compris les marqueurs des plaquettes activées, de l'endothélium et des cellules inflammatoires) sera effectuée simultanément. |
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AIT
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Les patients subissent un échantillon de sang pour les analyses EV : les EV seront caractérisés par analyse de suivi des nanoparticules, Western blot, cytométrie en flux à base de billes (approche directe et inverse) et ELISA. Nous évaluerons le diamètre et la concentration des nanoparticules sériques (NP) par analyse de suivi des nanoparticules (NTA) à l'aide de NanoSight LM10. L'analyse Western Blot sera effectuée sur un lysat de protéines après immuno-capture EV (en utilisant des billes recouvertes d'anticorps contre les tétraspanines spécifiques d'EV, CD9, CD63 et CD81). Le profilage EV sera effectué à l'aide d'un test cytométrique en flux multiplex standardisé à base de billes, à l'aide du kit MACSPlex Human Exosome (Miltenyi Biotec ; Bergisch Gladbach, Allemagne), comme décrit précédemment. 22 La détection de 37 antigènes de surface différents couramment exprimés sur la membrane EV (y compris les marqueurs des plaquettes activées, de l'endothélium et des cellules inflammatoires) sera effectuée simultanément. |
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Mimique d'AVC
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Les patients subissent un échantillon de sang pour les analyses EV : les EV seront caractérisés par analyse de suivi des nanoparticules, Western blot, cytométrie en flux à base de billes (approche directe et inverse) et ELISA. Nous évaluerons le diamètre et la concentration des nanoparticules sériques (NP) par analyse de suivi des nanoparticules (NTA) à l'aide de NanoSight LM10. L'analyse Western Blot sera effectuée sur un lysat de protéines après immuno-capture EV (en utilisant des billes recouvertes d'anticorps contre les tétraspanines spécifiques d'EV, CD9, CD63 et CD81). Le profilage EV sera effectué à l'aide d'un test cytométrique en flux multiplex standardisé à base de billes, à l'aide du kit MACSPlex Human Exosome (Miltenyi Biotec ; Bergisch Gladbach, Allemagne), comme décrit précédemment. 22 La détection de 37 antigènes de surface différents couramment exprimés sur la membrane EV (y compris les marqueurs des plaquettes activées, de l'endothélium et des cellules inflammatoires) sera effectuée simultanément. |
Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Différenciation TIA des imitations TIA
Délai: 72 heures après l'apparition des symptômes
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déterminer les performances du profilage EV (analyse des antigènes exprimés à la surface des vésicules), ajouté à une évaluation clinique structurée (score PREDISC) et d'imagerie (IRM cérébrale), pour discriminer les AIT des imitations d'AIT (événements non ischémiques).
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72 heures après l'apparition des symptômes
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Différenciation de l'AIT et de l'AVC
Délai: phase aiguë, 3 et 12 mois
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déterminer les performances du profilage EV pour différencier les AIT (avec IRM négative pour lésion aiguë) et les accidents vasculaires cérébraux ischémiques aigus (AIS, IRM confirmés).
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phase aiguë, 3 et 12 mois
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Étiologie de l'AVC
Délai: phase aiguë, 3 et 12 mois
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déterminer les performances du profilage des véhicules électriques pour catégoriser les causes prédéfinies d'événements ischémiques
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phase aiguë, 3 et 12 mois
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Collaborateurs et enquêteurs
Parrainer
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (Réel)
Achèvement primaire (Estimé)
Achèvement de l'étude (Estimé)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (Réel)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Réel)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Termes MeSH pertinents supplémentaires
Autres numéros d'identification d'étude
- NSISTRCR_2201
Plan pour les données individuelles des participants (IPD)
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