Extrazelluläre Vesikeloberflächenmarker bei akuten zerebrovaskulären Syndromen. (ElViS-ACS)
Die klinische Bedeutung eventueller Blutbiomarker für die Schlaganfalldiagnose und -prognose wäre begrenzt, vor allem weil die klinische Bewertung und Skalen (die die Schwere des Schlaganfalls angeben) oder die Neurobildgebung (die die genaue Größe der Läsion liefert) zuverlässigere Prädiktoren für die Vorhersage des klinischen Ergebnisses sind. In der klinischen Praxis wäre es sinnvoller, einen Biomarker zu finden, der dem Arzt bei Erkrankungen helfen kann, bei denen das klinische Bild und die Bildgebung nur begrenzte Unterstützung bieten.
Transiente ischämische Attacken (TIAs) stellen ein klassisches Beispiel dar, bei dem ein Biomarker von Interesse wäre, um einen ischämischen Prozess im Gehirn zu bestätigen und von einem Schlaganfall-ähnlichen Prozess zu unterscheiden. Diagnostische Biomarker für TIA wurden untersucht, aber keiner der potenziellen Kandidaten erreichte eine ausreichende Genauigkeit für die TIA-Diagnose. Unsere Gruppe hat herausgefunden, dass extrazelluläre Vesikel (EVs) als Biomarker für die Erkennung einer Gehirnischämie bei Patienten mit TIA nützlich sein könnten, da das EV-Oberflächenantigenprofil bei Patienten mit vorübergehenden Symptomen, die höchstwahrscheinlich durch eine Gehirnischämie verursacht werden, unterschiedlich zu sein scheint. im Vergleich zu Patienten, deren Symptome weniger wahrscheinlich auf eine Hirnischämie zurückzuführen waren. Unsere Studie hat das Interesse der wissenschaftlichen Gemeinschaft geweckt und die vielversprechende Rolle der Analyse von aus Blut gewonnenen EVs bei der Erweiterung der Möglichkeiten zur korrekten Diagnose und Klassifizierung von TIA und Schlaganfallereignissen sowie deren Unterscheidung von TIA oder Schlaganfall-Nachahmern erkannt, mit wichtigen zukünftigen Auswirkungen auf Management und Therapie der Patienten mit akutem ischämischen zerebrovaskulären Syndrom. Die Gültigkeit unseres Ansatzes muss in einer größeren, prospektiven, multizentrischen Studie getestet werden.
Studienübersicht
Status
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Charakterisierung extrazellulärer Vesikel Extrazelluläre Vesikel (EVs) werden in vorgereinigten Serumproben charakterisiert (siehe Transfer und Verwaltung von Blutproben). Elektrofahrzeuge werden durch Nanopartikel-Tracking-Analyse, Western Blot, Bead-basierte Durchflusszytometrie (direkter und inverser Ansatz) und ELISA charakterisiert.
Wir werden Durchmesser und Konzentration von Serumnanopartikeln (NPs) durch Nanopartikel-Tracking-Analyse (NTA) mit NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Vereinigtes Königreich) bewerten, ausgestattet mit einem 405-nm-Laser und der Analysesoftware Nanoparticle Tracking Analysis NTA 2.3. Eine Kamera zeichnet die Brownsche Bewegung von Elektrofahrzeugen auf und Größe und Anzahl der Elektrofahrzeuge pro ml werden mithilfe der Stokes-Einstein-Gleichung berechnet. Für jede Analyse werden drei Videos von 60 Sekunden aufgezeichnet.
Eine Western-Blot-Analyse wird an Proteinlysat nach EV-Immuneinfang durchgeführt (unter Verwendung von Perlen, die mit Antikörpern gegen EV-spezifische Tetraspanine, CD9, CD63 und CD81, bedeckt sind). Blots repräsentativer Proben werden mit primären Antikörpern gegen spezifische Marker inkubiert, die auf der Oberfläche oder in EVs exprimiert werden (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) und potenzielle Kontaminanten (GRP94, Apolipoprotein A1, Apolipoprotein B48).
Die EV-Profilierung wird mithilfe eines standardisierten durchflusszytometrischen Assays auf Multiplex-Bead-Basis unter Verwendung des MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Deutschland) durchgeführt, wie zuvor beschrieben. 22 Der Nachweis von 37 verschiedenen Oberflächenantigenen, die üblicherweise auf der EV-Membran exprimiert werden (einschließlich Marker aus aktivierten Blutplättchen, Endothel und Entzündungszellen), wird gleichzeitig durchgeführt. Der Hintergrund wird vom MFI-Wert jedes Markers abgezogen und dann mithilfe der mittleren Fluoreszenzintensitätsniveaus (MFI) von CD9, CD63 und CD81 normalisiert. Die Expressionsniveaus werden als normalisierter MFI (nMFI; %) für jedes EV-Oberflächenantigen angegeben (Medianwert und Interquartilbereich).
Nach einem ersten Screening mittels Multiplex-Assay werden einzelne mögliche EV-Biomarker entweder durch Reverse-Flow-Zytometrie oder ELISA-Techniken bestätigt.
Der Reverse-Flow-Zytometrie-Assay wird durchgeführt, indem EVs durch Einfangkügelchen isoliert werden, die mit Antikörpern gegen CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro) beschichtet sind, und dann mit Fluorochrom-konjugierten Antikörpern gegen einzelne EV-Oberflächenantigen inkubiert werden, die mit der Patientendiagnose während der Erstdiagnose in Zusammenhang stehen Screening mittels MACSPlex-Assay. Als Kontrollen dienen Kügelchen, die mit isotypangepassten Antikörpern inkubiert wurden, und Kügelchen, die ohne Vesikel inkubiert wurden. Kandidaten für EV-Biomarker werden auch durch die ELISA-Technik bestätigt, wobei spezifische Antikörper gemäß den Anweisungen des Herstellers verwendet werden.
Studientyp
Einschreibung (Geschätzt)
Kontakte und Standorte
Studienkontakt
- Name: Carlo Walter Cereda, PI
- Telefonnummer: +41918116691
- E-Mail: carlo.cereda@eoc.ch
Studieren Sie die Kontaktsicherung
- Name: Giovanni Bianco
- Telefonnummer: +41918117073
- E-Mail: giovanni.bianco@eoc.ch
Studienorte
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Ticino
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Lugano, Ticino, Schweiz, CH-6900
- Rekrutierung
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
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Hauptermittler:
- Carlo Cereda
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Kontakt:
- Carlo Cereda, MD
- Telefonnummer: +41 91 811 6691
- E-Mail: carlo.cereda@eoc.ch
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Unterermittler:
- Giovanni Bianco
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Unterermittler:
- Lucio Barile
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Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
- Erwachsene
- Älterer Erwachsener
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Probenahmeverfahren
Studienpopulation
Beschreibung
Einschlusskriterien:
Beeinflusst durch:
I. Verdacht auf einen ischämischen leichten Schlaganfall (akuter Verlust der fokalen Gehirnfunktion mit vermuteter vaskulärer Ätiologie und NIHSS ≤327, 28) innerhalb von 48 Stunden nach Auftreten der Symptome oder II. TIA (definiert als das akute Auftreten fokaler neurologischer Symptome, die <24 Stunden andauern und vermutlich durch Hirnischämie zum Zeitpunkt der Überweisung verursacht werden)19 III. Symptome, die I. oder II ähneln. mit, aber mit starkem Verdacht, dass ein nicht-ischämischer Zustand die Ursache des Ereignisses ist;
2) Alter ≥18 Jahre; 3) ob innerhalb von 48–72 Stunden nach der Aufnahme eine zerebrale Magnetresonanztomographie durchgeführt wird; 4) wenn die CT/MRT zu Studienbeginn keine Blutung aufweist; 5) wenn die Einwilligung nach Aufklärung eingeholt wurde.
Ausschlusskriterien:
- Augen-TIA (Amaurosis fugax);
- Kontraindikationen für die MRT;
- Schwangerschaft;
- begleitende akute/chronische entzündliche Erkrankungen (z. B. Infektionen, Autoimmunerkrankungen);
- begleitende hämatologische Erkrankungen;
- Infektion des Zentralnervensystems innerhalb von 30 Tagen;
- schweres Kopftrauma innerhalb von 30 Tagen;
- größere Operation innerhalb von 90 Tagen.
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
Kohorten und Interventionen
Gruppe / Kohorte |
Intervention / Behandlung |
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Schlaganfall
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Den Patienten wird eine Blutprobe für EV-Analysen entnommen: EVs werden durch Nanopartikel-Tracking-Analyse, Western Blot, Bead-basierte Durchflusszytometrie (direkter und inverser Ansatz) und ELISA charakterisiert. Wir werden Durchmesser und Konzentration von Serumnanopartikeln (NPs) durch Nanopartikel-Tracking-Analyse (NTA) mit NanoSight LM10 bewerten. Eine Western-Blot-Analyse wird an Proteinlysat nach EV-Immuneinfang durchgeführt (unter Verwendung von Perlen, die mit Antikörpern gegen EV-spezifische Tetraspanine, CD9, CD63 und CD81, bedeckt sind). Die EV-Profilierung wird mithilfe eines standardisierten durchflusszytometrischen Assays auf Multiplex-Bead-Basis unter Verwendung des MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Deutschland) durchgeführt, wie zuvor beschrieben. 22 Der Nachweis von 37 verschiedenen Oberflächenantigenen, die üblicherweise auf der EV-Membran exprimiert werden (einschließlich Marker aus aktivierten Blutplättchen, Endothel und Entzündungszellen), wird gleichzeitig durchgeführt. |
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TIA
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Den Patienten wird eine Blutprobe für EV-Analysen entnommen: EVs werden durch Nanopartikel-Tracking-Analyse, Western Blot, Bead-basierte Durchflusszytometrie (direkter und inverser Ansatz) und ELISA charakterisiert. Wir werden Durchmesser und Konzentration von Serumnanopartikeln (NPs) durch Nanopartikel-Tracking-Analyse (NTA) mit NanoSight LM10 bewerten. Eine Western-Blot-Analyse wird an Proteinlysat nach EV-Immuneinfang durchgeführt (unter Verwendung von Perlen, die mit Antikörpern gegen EV-spezifische Tetraspanine, CD9, CD63 und CD81, bedeckt sind). Die EV-Profilierung wird mithilfe eines standardisierten durchflusszytometrischen Assays auf Multiplex-Bead-Basis unter Verwendung des MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Deutschland) durchgeführt, wie zuvor beschrieben. 22 Der Nachweis von 37 verschiedenen Oberflächenantigenen, die üblicherweise auf der EV-Membran exprimiert werden (einschließlich Marker aus aktivierten Blutplättchen, Endothel und Entzündungszellen), wird gleichzeitig durchgeführt. |
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Schlaganfall-Nachahmung
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Den Patienten wird eine Blutprobe für EV-Analysen entnommen: EVs werden durch Nanopartikel-Tracking-Analyse, Western Blot, Bead-basierte Durchflusszytometrie (direkter und inverser Ansatz) und ELISA charakterisiert. Wir werden Durchmesser und Konzentration von Serumnanopartikeln (NPs) durch Nanopartikel-Tracking-Analyse (NTA) mit NanoSight LM10 bewerten. Eine Western-Blot-Analyse wird an Proteinlysat nach EV-Immuneinfang durchgeführt (unter Verwendung von Perlen, die mit Antikörpern gegen EV-spezifische Tetraspanine, CD9, CD63 und CD81, bedeckt sind). Die EV-Profilierung wird mithilfe eines standardisierten durchflusszytometrischen Assays auf Multiplex-Bead-Basis unter Verwendung des MACSPlex Human Exosome Kit (Miltenyi Biotec; Bergisch Gladbach, Deutschland) durchgeführt, wie zuvor beschrieben. 22 Der Nachweis von 37 verschiedenen Oberflächenantigenen, die üblicherweise auf der EV-Membran exprimiert werden (einschließlich Marker aus aktivierten Blutplättchen, Endothel und Entzündungszellen), wird gleichzeitig durchgeführt. |
Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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TIA-Unterscheidung von TIA-Mimetika
Zeitfenster: 72 Stunden nach Beginn der Symptome
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Bestimmen Sie die Leistung des EV-Profilings (Analyse der auf der Vesikeloberfläche exprimierten Antigene), ergänzt durch eine strukturierte klinische (PREDISC-Score) und bildgebende Auswertung (Gehirn-MRT), um TIAs von TIA-Nachahmern (nicht-ischämische Ereignisse) zu unterscheiden.
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72 Stunden nach Beginn der Symptome
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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TIA-Abgrenzung zum Schlaganfall
Zeitfenster: akute Phase, 3 und 12 Monate
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Bestimmen Sie die Leistung des EV-Profilings zur Unterscheidung zwischen TIAs (mit negativem MRT für akute Läsion) und akuten ischämischen Schlaganfällen (AIS, MRT bestätigt).
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akute Phase, 3 und 12 Monate
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Schlaganfall-Ätiologie
Zeitfenster: akute Phase, 3 und 12 Monate
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Bestimmen Sie die Leistung der Profilerstellung für Elektrofahrzeuge, um vorab festgelegte Ursachen ischämischer Ereignisse zu kategorisieren
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akute Phase, 3 und 12 Monate
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Mitarbeiter und Ermittler
Sponsor
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn (Tatsächlich)
Primärer Abschluss (Geschätzt)
Studienabschluss (Geschätzt)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen
Andere Studien-ID-Nummern
- NSISTRCR_2201
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Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
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