급성 뇌혈관 증후군의 세포외 소포 표면 마커. (ElViS-ACS)
뇌졸중 진단 및 예후에 대한 최종 혈액 바이오마커의 임상적 의미는 제한적일 수 있는데, 이는 주로 임상 평가 및 척도(뇌졸중 중증도 제공) 또는 신경영상(병변의 정확한 크기 제공)이 임상 결과 예측을 위한 보다 신뢰할 수 있는 예측 변수이기 때문입니다. 임상 실습에서는 임상 사진과 영상이 제한된 지원을 제공하는 조건에서 의사의 방향을 잡는 데 도움이 될 수 있는 바이오마커를 찾는 것이 더 유용할 것입니다.
일과성 허혈성 발작(TIA)은 뇌졸중 모방과 뇌 허혈성 과정을 확인하고 구별하는 데 관심이 있는 바이오마커의 고전적인 예를 나타냅니다. TIA의 진단 바이오마커가 조사되었지만 잠재적인 후보 중 어느 것도 TIA 진단에 충분한 정확도에 도달하지 못했습니다. 우리 그룹은 EV 표면 항원 프로필이 뇌 허혈에 의해 유발될 가능성이 매우 높은 것으로 판단되는 일시적인 증상이 있는 환자에서 다르게 나타나기 때문에 TIA 환자에서 뇌 허혈을 감지하기 위한 바이오마커로 EV가 유용할 수 있음을 발견했습니다. 뇌허혈로 인해 증상이 나타날 확률이 낮은 환자에 비해. 우리의 연구는 TIA 및 뇌졸중 사건을 정확하게 진단 및 분류하고 이를 TIA 또는 뇌졸중 모방과 구별할 수 있는 가능성을 확장하는 데 있어서 혈액 유래 EV 분석의 유망한 역할을 인식하고 관리 및 치료에 중요한 미래 영향을 인식하는 과학계의 관심을 높였습니다. 급성 허혈성 뇌혈관 증후군 환자의 모습입니다. 우리 접근 방식의 타당성은 더 크고 전향적인 다기관 연구에서 테스트되어야 합니다.
연구 개요
상세 설명
세포밖 소포체의 특성화 세포밖 소포체(EV)는 사전에 제거된 혈청 샘플에서 특성화됩니다(혈액 샘플의 전달 및 관리 참조). EV는 나노입자 추적 분석, 웨스턴 블롯, 비드 기반 유세포 분석(직접 및 역접근) 및 ELISA를 특징으로 합니다.
405nm 레이저가 장착된 NanoSight LM10(Malvern Instruments, United Kingdom)과 Nanoparticle Tracking Analysis NTA 2.3 분석 소프트웨어를 사용하여 나노입자 추적 분석(NTA)을 통해 혈청 나노입자(NP)의 직경과 농도를 평가합니다. 카메라는 EV의 브라운 운동을 기록하고 mL당 EV의 크기와 수는 스톡스-아인슈타인 방정식으로 계산됩니다. 각 분석에 대해 60초의 비디오 3개가 녹화됩니다.
웨스턴 블롯 분석은 EV 면역 포획 후 단백질 용해물에 대해 수행됩니다(EV 특정 테트라스파닌, CD9, CD63 및 CD81에 대한 항체로 덮인 비드 사용). 대표 샘플의 블롯은 표면이나 EV 내부에서 발현된 특정 마커(TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) 및 잠재적 오염물질(GRP94, 아포지단백질 A1, 아포지단백질 B48)에 대한 1차 항체와 함께 배양됩니다.
EV 프로파일링은 이전에 설명한 대로 MACSPlex Human Exosome Kit(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)를 사용하여 표준화된 다중 비드 기반 유세포 분석을 사용하여 수행됩니다. 22 EV 막에 일반적으로 발현되는 37개의 서로 다른 표면 항원(활성화된 혈소판, 내피 세포 및 염증 세포의 마커 포함)의 검출이 동시에 수행됩니다. 각 마커의 MFI 값에서 배경을 뺀 다음 CD9, CD63 및 CD81의 평균 형광 강도 수준(MFI)을 사용하여 정규화합니다. 발현 수준은 각 EV 표면 항원(중앙값 및 사분위수 범위)에 대해 정규화된 MFI(nMFI; %)로 보고됩니다.
다중 분석을 통한 초기 스크리닝 후 단일 후보 EV 바이오마커는 역유동세포측정법 및 ELISA 기술을 통해 확인됩니다.
역류 세포측정 분석은 CD9-CD63-CD81(EpCam; JSR Micro)에 대한 항체로 코팅된 캡처 비드를 통해 EV를 분리한 다음 초기 동안 환자 진단과 관련된 단일 EV 표면 항원에 대한 형광 색소 결합 항체와 함께 배양하여 수행됩니다. MACSPlex 분석을 통한 스크리닝. 이소형 일치 항체와 함께 배양된 비드 및 소포 없이 배양된 비드는 대조군 역할을 합니다. 후보 EV 바이오마커는 제조업체의 지침에 따라 특정 항체를 사용하는 ELISA 기술로도 확인됩니다.
연구 유형
등록 (추정된)
연락처 및 위치
연구 연락처
- 이름: Carlo Walter Cereda, PI
- 전화번호: +41918116691
- 이메일: carlo.cereda@eoc.ch
연구 연락처 백업
- 이름: Giovanni Bianco
- 전화번호: +41918117073
- 이메일: giovanni.bianco@eoc.ch
연구 장소
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Ticino
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Lugano, Ticino, 스위스, CH-6900
- 모병
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
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수석 연구원:
- Carlo Cereda
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연락하다:
- Carlo Cereda, MD
- 전화번호: +41 91 811 6691
- 이메일: carlo.cereda@eoc.ch
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부수사관:
- Giovanni Bianco
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부수사관:
- Lucio Barile
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참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
- 성인
- 고령자
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
영향을 받는 항목:
I. 증상 발생 48시간 이내에 허혈성 경미한 뇌졸중(추정 혈관 병인의 국소 뇌 기능의 급성 상실 및 NIHSS ≥327, 28)이 의심되거나 II. TIA(24시간 미만 지속되는 국소 신경학적 증상의 급성 발병으로 정의되며 의뢰 당시 뇌 허혈에 의해 유발된 것으로 추정됨)19 III. I. 또는 II와 유사한 증상. 비허혈성 상태가 사건의 원인이라고 의심되지만,
2) 18세 이상; 3) 입원 후 48~72시간 이내에 뇌자기공명영상(CMR)을 실시할 경우 4) 기준선 CT/MRI에 출혈이 없는 경우; 5) 사전 동의를 얻은 경우.
제외 기준:
- 안구 TIA(일과 흑내장);
- MRI에 대한 금기 사항;
- 임신;
- 수반되는 급성/만성 염증성 질환(예: 감염, 자가면역 질환);
- 수반되는 혈액 질환;
- 30일 이내에 중추신경계 감염;
- 30일 이내 심각한 두부 외상;
- 90일 이내에 큰 수술을 해야 합니다.
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
코호트 및 개입
그룹/코호트 |
개입 / 치료 |
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뇌졸중
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환자는 EV 분석을 위해 혈액 샘플을 받습니다. EV는 나노입자 추적 분석, 웨스턴 블롯, 비드 기반 유세포 분석(직접 및 역접근) 및 ELISA를 특징으로 합니다. NanoSight LM10을 사용하여 나노입자 추적 분석(NTA)을 통해 혈청 나노입자(NP)의 직경과 농도를 평가합니다. 웨스턴 블롯 분석은 EV 면역 포획 후 단백질 용해물에 대해 수행됩니다(EV 특정 테트라스파닌, CD9, CD63 및 CD81에 대한 항체로 덮인 비드 사용). EV 프로파일링은 이전에 설명한 대로 MACSPlex Human Exosome Kit(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)를 사용하여 표준화된 다중 비드 기반 유세포 분석을 사용하여 수행됩니다. 22 EV 막에 일반적으로 발현되는 37개의 서로 다른 표면 항원(활성화된 혈소판, 내피 세포 및 염증 세포의 마커 포함)의 검출이 동시에 수행됩니다. |
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티아
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환자는 EV 분석을 위해 혈액 샘플을 받습니다. EV는 나노입자 추적 분석, 웨스턴 블롯, 비드 기반 유세포 분석(직접 및 역접근) 및 ELISA를 특징으로 합니다. NanoSight LM10을 사용하여 나노입자 추적 분석(NTA)을 통해 혈청 나노입자(NP)의 직경과 농도를 평가합니다. 웨스턴 블롯 분석은 EV 면역 포획 후 단백질 용해물에 대해 수행됩니다(EV 특정 테트라스파닌, CD9, CD63 및 CD81에 대한 항체로 덮인 비드 사용). EV 프로파일링은 이전에 설명한 대로 MACSPlex Human Exosome Kit(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)를 사용하여 표준화된 다중 비드 기반 유세포 분석을 사용하여 수행됩니다. 22 EV 막에 일반적으로 발현되는 37개의 서로 다른 표면 항원(활성화된 혈소판, 내피 세포 및 염증 세포의 마커 포함)의 검출이 동시에 수행됩니다. |
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뇌졸중 모방
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환자는 EV 분석을 위해 혈액 샘플을 받습니다. EV는 나노입자 추적 분석, 웨스턴 블롯, 비드 기반 유세포 분석(직접 및 역접근) 및 ELISA를 특징으로 합니다. NanoSight LM10을 사용하여 나노입자 추적 분석(NTA)을 통해 혈청 나노입자(NP)의 직경과 농도를 평가합니다. 웨스턴 블롯 분석은 EV 면역 포획 후 단백질 용해물에 대해 수행됩니다(EV 특정 테트라스파닌, CD9, CD63 및 CD81에 대한 항체로 덮인 비드 사용). EV 프로파일링은 이전에 설명한 대로 MACSPlex Human Exosome Kit(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)를 사용하여 표준화된 다중 비드 기반 유세포 분석을 사용하여 수행됩니다. 22 EV 막에 일반적으로 발현되는 37개의 서로 다른 표면 항원(활성화된 혈소판, 내피 세포 및 염증 세포의 마커 포함)의 검출이 동시에 수행됩니다. |
연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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TIA 모방품과의 TIA 차별화
기간: 증상 발생 후 72시간
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TIA 모방(비허혈성 사건)과 TIA를 구별하기 위해 구조화된 임상(PREDISC 점수) 및 영상 평가(뇌 MRI)에 추가된 EV 프로파일링(소포 표면에 발현된 항원 분석)의 성능을 결정합니다.
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증상 발생 후 72시간
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2차 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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뇌졸중과 TIA의 차별화
기간: 급성기, 3개월 및 12개월
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TIA(급성 병변에 대한 음성 MRI 포함)와 급성 허혈성 뇌졸중(AIS, MRI 확인)을 구별하기 위해 EV 프로파일링의 성능을 결정합니다.
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급성기, 3개월 및 12개월
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뇌졸중의 원인
기간: 급성기, 3개월 및 12개월
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허혈성 사건의 사전 지정된 원인을 분류하기 위해 EV 프로파일링의 성능을 결정합니다.
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급성기, 3개월 및 12개월
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공동 작업자 및 조사자
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작 (실제)
기본 완료 (추정된)
연구 완료 (추정된)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (실제)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (실제)
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마지막으로 확인됨
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