Маркеры поверхности внеклеточных везикул при острых цереброваскулярных синдромах. (ElViS-ACS)
Клиническое значение возможных биомаркеров крови для диагностики и прогноза инсульта будет ограничено, главным образом потому, что клиническая оценка и шкалы (определяющие тяжесть инсульта) или нейровизуализация (обеспечивающие точный размер поражения) являются более надежными предикторами для прогнозирования клинического исхода. В клинической практике было бы более полезно найти биомаркер, который мог бы помочь сориентироваться врачу в условиях, когда клиническая картина и визуализация оказывают ограниченную поддержку.
Транзиторные ишемические атаки (ТИА) представляют собой классический пример, когда биомаркер может представлять интерес для подтверждения и отличия ишемического процесса головного мозга от инсульта. Диагностические биомаркеры ТИА были исследованы, но ни один из потенциальных кандидатов не достиг достаточной точности для диагностики ТИА. Наша группа обнаружила, что внеклеточные везикулы (ВВ) могут быть полезны в качестве биомаркеров для выявления ишемии головного мозга у пациентов с ТИА, поскольку профиль поверхностных антигенов ВВ, по-видимому, отличается у пациентов с преходящими симптомами, которые, как считается, весьма вероятно вызваны ишемией головного мозга. по сравнению с пациентами, у которых симптомы были менее вероятны из-за ишемии головного мозга. Наше исследование вызвало интерес в научном сообществе, признавшем многообещающую роль анализа ЭВ, полученных из крови, в расширении возможностей правильной диагностики и классификации ТИА и событий инсульта, их дифференциации от ТИА или инсульта, что имеет важные будущие последствия для ведения и терапии. больных острым ишемическим цереброваскулярным синдромом. обоснованность нашего подхода должна быть проверена в более крупном проспективном многоцентровом исследовании.
Обзор исследования
Статус
Вмешательство/лечение
Подробное описание
Характеристика внеклеточных везикул Внеклеточные везикулы (ВВ) будут характеризоваться в предварительно очищенных образцах сыворотки (см. раздел «Перенос и обработка образцов крови»). ЭВ будут охарактеризованы с помощью анализа отслеживания наночастиц, вестерн-блоттинга, проточной цитометрии на основе шариков (прямой и обратный подход) и ELISA.
Мы будем оценивать диаметр и концентрацию наночастиц сыворотки (НЧ) с помощью анализа отслеживания наночастиц (NTA) с использованием NanoSight LM10 (Malvern Instruments, Великобритания), оснащенного лазером 405 нм и аналитическим программным обеспечением NTA 2.3 для анализа отслеживания наночастиц. Камера будет фиксировать броуновское движение ЭВ, а размер и количество ЭВ на мл будут рассчитываться по уравнению Стокса-Эйнштейна. Для каждого анализа будут записаны три видео продолжительностью 60 с.
Вестерн-блот-анализ будет проводиться на лизате белка после иммунозахвата EV (с использованием гранул, покрытых антителами против специфичных для EV тетраспанинов, CD9, CD63 и CD81). Блоты репрезентативных образцов будут инкубироваться с первичными антителами против специфических маркеров, экспрессируемых на поверхности или внутри ЭВ (TSG101, Syntenin-1, CD81, Alix) и потенциальных примесей (GRP94, аполипопротеин A1, аполипопротеин B48).
Профилирование EV будет выполняться с использованием стандартизированного мультиплексного проточного цитометрического анализа на основе шариков с использованием набора экзосом человека MACSPlex (MilteNY Biotec; Бергиш-Гладбах, Германия), как описано ранее. 22 Одновременно будет выполняться обнаружение 37 различных поверхностных антигенов, обычно экспрессируемых на мембране ЭВ (включая маркеры активированных тромбоцитов, эндотелия и воспалительных клеток). Фон вычитается из значения MFI каждого маркера, а затем нормализуется с использованием средних уровней интенсивности флуоресценции (MFI) CD9, CD63 и CD81. Уровни экспрессии будут сообщаться как нормализованные MFI (nMFI; %) для каждого поверхностного антигена EV (среднее значение и межквартильный диапазон).
После первоначального скрининга с помощью мультиплексного анализа отдельные биомаркеры-кандидаты ЭВ будут подтверждены либо методами обратной проточной цитометрии, либо методами ELISA.
Цитометрический анализ с обратным потоком будет проводиться путем выделения ЭВ с помощью улавливающих шариков, покрытых антителами против CD9-CD63-CD81 (EpCam; JSR Micro), а затем инкубации с конъюгированными с флюорохромом антителами против отдельных поверхностных антигенов ЭВ, что связано с диагнозом пациента на начальном этапе. скрининг с помощью анализа MACSPlex. Бусины, инкубированные с антителами, совпадающими по изотипу, и гранулы, инкубированные в отсутствие везикул, будут служить контролем. Биомаркеры-кандидаты на ЭВ также будут подтверждены методом ELISA с использованием специфических антител в соответствии с инструкциями производителя.
Тип исследования
Регистрация (Оцененный)
Контакты и местонахождение
Контакты исследования
- Имя: Carlo Walter Cereda, PI
- Номер телефона: +41918116691
- Электронная почта: carlo.cereda@eoc.ch
Учебное резервное копирование контактов
- Имя: Giovanni Bianco
- Номер телефона: +41918117073
- Электронная почта: giovanni.bianco@eoc.ch
Места учебы
-
-
Ticino
-
Lugano, Ticino, Швейцария, CH-6900
- Рекрутинг
- Neurocenter of Southern Switzerland, Ospedale Civico
-
Главный следователь:
- Carlo Cereda
-
Контакт:
- Carlo Cereda, MD
- Номер телефона: +41 91 811 6691
- Электронная почта: carlo.cereda@eoc.ch
-
Младший исследователь:
- Giovanni Bianco
-
Младший исследователь:
- Lucio Barile
-
-
Критерии участия
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
- Взрослый
- Пожилой взрослый
Принимает здоровых добровольцев
Метод выборки
Исследуемая популяция
Описание
Критерии включения:
Затронуто:
I. Подозрение на малый ишемический инсульт (острая потеря фокальной функции головного мозга предположительно сосудистой этиологии и NIHSS ≤327, 28) в течение 48 часов после появления симптомов или II. ТИА (определяется как острое начало очаговых неврологических симптомов, продолжающихся менее 24 часов и предположительно вызванных ишемией головного мозга на момент обращения)19 III. Симптомы, имитирующие I. или II. с высокой степенью подозрения, что причиной события является неишемическое состояние;
2) возраст ≥18 лет; 3) если магнитно-резонансная томография головного мозга будет проведена в течение 48-72 часов с момента поступления; 4) если исходная КТ/МРТ не выявила кровотечения; 5) если получено информированное согласие.
Критерий исключения:
- глазная ТИА (amaurosis fugax);
- противопоказания к МРТ;
- беременность;
- сопутствующее острое/хроническое воспалительное заболевание (например, инфекции, аутоиммунное заболевание);
- сопутствующие гематологические заболевания;
- Инфекция ЦНС в течение 30 дней;
- серьезная травма головы в течение 30 дней;
- серьезная операция в течение 90 дней.
Учебный план
Как устроено исследование?
Детали дизайна
Когорты и вмешательства
Группа / когорта |
Вмешательство/лечение |
|---|---|
|
Гладить
|
Пациенты сдают образец крови для анализа ЭВ: ЭВ будут охарактеризованы с помощью анализа отслеживания наночастиц, вестерн-блоттинга, проточной цитометрии на основе шариков (прямой и обратный подход) и ИФА. Мы будем оценивать диаметр и концентрацию наночастиц сыворотки (НЧ) с помощью анализа отслеживания наночастиц (NTA) с использованием NanoSight LM10. Вестерн-блот-анализ будет проводиться на лизате белка после иммунозахвата EV (с использованием гранул, покрытых антителами против специфичных для EV тетраспанинов, CD9, CD63 и CD81). Профилирование EV будет выполняться с использованием стандартизированного мультиплексного проточного цитометрического анализа на основе шариков с использованием набора экзосом человека MACSPlex (MilteNY Biotec; Бергиш-Гладбах, Германия), как описано ранее. 22 Будет одновременно выполняться обнаружение 37 различных поверхностных антигенов, обычно экспрессируемых на мембране ЭВ (включая маркеры активированных тромбоцитов, эндотелия и воспалительных клеток). |
|
ТИА
|
Пациенты сдают образец крови для анализа ЭВ: ЭВ будут охарактеризованы с помощью анализа отслеживания наночастиц, вестерн-блоттинга, проточной цитометрии на основе шариков (прямой и обратный подход) и ИФА. Мы будем оценивать диаметр и концентрацию наночастиц сыворотки (НЧ) с помощью анализа отслеживания наночастиц (NTA) с использованием NanoSight LM10. Вестерн-блот-анализ будет проводиться на лизате белка после иммунозахвата EV (с использованием гранул, покрытых антителами против специфичных для EV тетраспанинов, CD9, CD63 и CD81). Профилирование EV будет выполняться с использованием стандартизированного мультиплексного проточного цитометрического анализа на основе шариков с использованием набора экзосом человека MACSPlex (MilteNY Biotec; Бергиш-Гладбах, Германия), как описано ранее. 22 Будет одновременно выполняться обнаружение 37 различных поверхностных антигенов, обычно экспрессируемых на мембране ЭВ (включая маркеры активированных тромбоцитов, эндотелия и воспалительных клеток). |
|
Имитация инсульта
|
Пациенты сдают образец крови для анализа ЭВ: ЭВ будут охарактеризованы с помощью анализа отслеживания наночастиц, вестерн-блоттинга, проточной цитометрии на основе шариков (прямой и обратный подход) и ИФА. Мы будем оценивать диаметр и концентрацию наночастиц сыворотки (НЧ) с помощью анализа отслеживания наночастиц (NTA) с использованием NanoSight LM10. Вестерн-блот-анализ будет проводиться на лизате белка после иммунозахвата EV (с использованием гранул, покрытых антителами против специфичных для EV тетраспанинов, CD9, CD63 и CD81). Профилирование EV будет выполняться с использованием стандартизированного мультиплексного проточного цитометрического анализа на основе шариков с использованием набора экзосом человека MACSPlex (MilteNY Biotec; Бергиш-Гладбах, Германия), как описано ранее. 22 Будет одновременно выполняться обнаружение 37 различных поверхностных антигенов, обычно экспрессируемых на мембране ЭВ (включая маркеры активированных тромбоцитов, эндотелия и воспалительных клеток). |
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Отличие ТИА от имитаторов ТИА
Временное ограничение: 72 часа от появления симптомов
|
определить эффективность профилирования EV (анализ антигенов, экспрессируемых на поверхности везикул), добавленного к структурированной клинической (оценка PREDISC) и визуализационной оценке (МРТ головного мозга), чтобы отличить ТИА от имитирующих ТИА (неишемические события).
|
72 часа от появления симптомов
|
Вторичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Дифференциация ТИА от инсульта
Временное ограничение: острая фаза, 3 и 12 месяцев
|
определить эффективность профилирования EV для дифференциации ТИА (с отрицательным МРТ при остром поражении) и острых ишемических инсультов (АИС, подтвержденное МРТ).
|
острая фаза, 3 и 12 месяцев
|
|
Этиология инсульта
Временное ограничение: острая фаза, 3 и 12 месяцев
|
определить эффективность профилирования ЭВ для классификации заранее определенных причин ишемических событий
|
острая фаза, 3 и 12 месяцев
|
Соавторы и исследователи
Спонсор
Даты записи исследования
Изучение основных дат
Начало исследования (Действительный)
Первичное завершение (Оцененный)
Завершение исследования (Оцененный)
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
Первый опубликованный (Действительный)
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Действительный)
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
Последняя проверка
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Дополнительные соответствующие термины MeSH
Другие идентификационные номера исследования
- NSISTRCR_2201
Планирование данных отдельных участников (IPD)
Планируете делиться данными об отдельных участниках (IPD)?
Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы
Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.
Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .