小児外科におけるメラトニンの鎮痛効果と抗酸化効果

メラトニンは、手術を受ける新生児を酸化ストレス (OS) の有害な影響から保護する上で潜在的な役割を果たしていることが示されています。 外因性メラトニンの投与後、新生児では術後期間の脂質およびタンパク質の過酸化が大幅に減少することが報告されています。 最近、ソン氏らは、は、サーチュイン 1 (SIRT1) が痛みの発症にも重要な役割を果たし、神経因性疼痛や炎症性疼痛などの慢性疼痛状態に鎮痛効果を示すことを報告しました。 この前向き無作為化二重盲検パイロット研究では、メラトニンが手術を受ける小児のOSとサーチュイン経路に関連する術後疼痛を軽減するという仮説を検証します。

メラトニン (Dicoson、Dicofarm、イタリア、5 滴 = 1 mg) を経口投与しました。 この製品は、保健省のウェブサイト (http://www.ministerosalute.it/alimenti/dietetica) の栄養補助食品登録簿に掲載されています。 コードは 943314283 で分類されます。 この製品は、DL n に従って食品に関する欧州指令の対象となります。 2004 年 5 月 21 日の欧州医薬品指令 2001/20/EC ではなく、イタリアレベルで D.L. n. 2003 年 6 月 24 日の第 211 号。 メラトニンの投与には良好な安全性プロファイルがあり、既知の副作用はありません。

Antibodies.com (A87093) の競合酵素結合免疫吸着測定法 (cELISA) キットを製造業者の指示に従って使用し、各実験時点 (T0、T1、T2) でメラトニン血漿レベルを評価しました。 最高基準（500 pg/mL）よりも高い濃度を含む疑いのある Mel 治療を受けた小児からの T1 および T2 血漿サンプルは、分析前にサンプル希釈液で 1:100 (v/v) に希釈されました。 発色を Thermo Scientific (MultiSkan FC) マイクロプレート リーダーで 450 nm で監視し、4 パラメーター ロジスティック (4-PL) 曲線フィットを使用して標準曲線 (範囲 7.813 ～ 500 pg/mL) を作成しました。 アッセイの感度は 4.688 pg/mL でした。アッセイ内およびアッセイ間の変動係数はそれぞれ <8% および <10% でした。

Antibodies.com の cELISA キット (A86962) を使用して、脂質過酸化のマーカーとしての 4-ヒドロキシノネナール (4-HNE) を測定し、OS を評価しました。 血漿濃度は、450 nm での吸光度を読み取り、標準曲線 (範囲 31.25 ～ 2000) を参照することによって計算されました。 pg/mL）。 アッセイの感度は 18.75 pg/mL でした。アッセイ内およびアッセイ間の変動係数はそれぞれ <8% および <10% でした。

SIRT1 は、Invitrogen の ELISA キット (EH427RB) を使用して定量されました。 血漿サンプルは、分析前に製造業者の指示に従って 1:2 に希釈されました。 SIRT1 濃度は、450 nm での吸光度を読み取り、標準曲線 (範囲 1.23 ～ 300 ng/mL) を参照して計算しました。 アッセイの感度は 1.23 ng/mL でした。アッセイ内およびアッセイ間の変動係数はそれぞれ <10% および <12% でした。

利用可能な定定量血漿サンプルに基づいてマイクロRNA分析を実行しました（各時点、T0、T1、およびT2でN = 3）。 Norgen トータル RNA 単離キット 13 を使用して、マイクロ RNA (miR-34 および miR-124a) を血漿から単離しました。血漿マイクロ RNA とスパイクイン cel-miR-39 発現は、TaqMan miRNA アッセイを使用して評価しました。 TaqMan miRNA 逆転写キットを使用して miRNA を逆転写しました。 続いて、PCR プライマーおよびプローブ (5'-FAM) を含む 1 μL の 20× TaqMan miRNA アッセイ、10 μL の 2× TaqMan Universal PCR Master Mix No Amp Erase UNG を含む 20 μL の PCR ミックスで RT-qPCR を実行しました。および5μLの逆転写産物。 反応物を最初に95℃で10分間インキュベートし、続いて95℃で15秒間および60℃で1分間を40サイクル行った。 定量的リアルタイム PCR (RT-qPCR) は、ABIPRISM 7500 リアルタイム PCR システムで実行されました。 データは、ベースラインを適応させるための自動比較閾値 (Ct) 設定を備えた 7500 システム ソフトウェア (1 1.4.0) によって分析されました。 検出閾値は 35 Ct に設定されました。 miR-34 および miR-124a の相対量は、Ct 法を使用して計算されました。ΔCt = Ct (miR-34/miR-124a) - Ct (参照 miRNA)。 2-ΔCt.