Effets analgésiques et antioxydants de la mélatonine en chirurgie pédiatrique

La mélatonine joue un rôle potentiel dans la protection des nouveau-nés subissant une intervention chirurgicale contre les effets délétères du stress oxydatif (OS). Après administration de mélatonine exogène, une réduction significative de la peroxydation lipidique et protéique au cours de la période postopératoire a été rapportée chez les nouveau-nés. Récemment, Song et al. rapporté que la sirtuine 1 (SIRT1) joue également un rôle essentiel dans la pathogenèse de la douleur, montrant des effets analgésiques dans les douleurs chroniques telles que les douleurs neuropathiques et inflammatoires. Dans cette étude pilote prospective, randomisée et en double aveugle, nous testons l'hypothèse selon laquelle la mélatonine réduit la SG et la douleur postopératoire impliquant la voie de la sirtuine chez les enfants subissant une intervention chirurgicale.

La mélatonine (Dicoson, Dicofarm, Italie, 5 gouttes = 1 mg) a été administrée par voie orale. Le produit est inscrit au Registre des compléments alimentaires sur le site Internet du Ministère de la Santé (http://www.ministerosalute.it/alimenti/dietetica) et est classé avec le code suivant : 943314283. Ce produit est soumis à la Directive Européenne sur les denrées alimentaires selon DL n. 169 du 21 mai 2004, et non à la Directive Européenne sur les Médicaments 2001/20/CE transposée au niveau italien avec D.L. n. 211 du 24 juin 2003. L'administration de mélatonine présente un bon profil d'innocuité, sans effets indésirables connus.

Les taux plasmatiques de mélatonine ont été évalués à chaque instant expérimental (T0, T1, T2) à l'aide d'un kit de test immuno-enzymatique compétitif (cELISA) d'Antibodies.com (A87093) conformément aux instructions du fabricant. Les échantillons de plasma T1 et T2 provenant d'enfants traités par Mel soupçonnés de contenir des concentrations supérieures à la norme la plus élevée (500 pg/mL) ont été dilués au 1:100 (v/v) avec un diluant d'échantillon avant analyse. Le développement de la couleur a été surveillé à 450 nm dans un lecteur de microplaques Thermo Scientific (MultiSkan FC) et une courbe standard (plage de 7,813 à 500 pg/mL) a été générée à l'aide d'un ajustement de courbe logistique à quatre paramètres (4-PL). La sensibilité du test était de 4,688 pg/mL ; les coefficients de variation intra- et inter-essais étaient respectivement <8 % et <10 %.

Le 4-hydroxynonénal (4-HNE) en tant que marqueur de la peroxydation lipidique a été mesuré pour évaluer la SG à l'aide d'un kit cELISA d'Antibodies.com (A86962). Les concentrations plasmatiques ont été calculées en lisant l'absorbance à 450 nm et en se référant à la courbe standard (plage 31,25-2000 pg/mL). La sensibilité du test était de 18,75 pg/mL ; les coefficients de variation intra- et inter-essais étaient respectivement <8 % et <10 %.

SIRT1 a été quantifié à l'aide d'un kit ELISA d'Invitrogen (EH427RB). Les échantillons de plasma ont été dilués au 1:2 comme indiqué par le fabricant avant analyse. Les concentrations de SIRT1 ont été calculées par lecture d'absorbance à 450 nm et en se référant à la courbe standard (plage de 1,23 à 300 ng/mL). La sensibilité du test était de 1,23 ng/mL ; les coefficients de variation intra- et inter-essais étaient respectivement <10 % et <12 %.

Nous avons effectué des analyses de microARN sur la base de l'échantillon de plasma quali-quantitatif disponible (N = 3 à chaque instant, T0, T1 et T2). Les microARN (miR-34 et miR-124a) ont été isolés du plasma à l'aide du kit d'isolement d'ARN total Norgen13. Les microARN plasmatiques et les expressions de pointe de cel-miR-39 ont été évalués à l'aide du test TaqMan miARN. Le kit de transcription inverse TaqMan miRNA a été utilisé pour transcrire de manière inverse les miARN. Par la suite, la RT-qPCR a été réalisée dans 20 μL de mélange PCR contenant 1 μL de test miARN 20 × TaqMan, qui contenait des amorces et des sondes PCR (5'-FAM), 10 μL de 2 × TaqMan Universal PCR Master Mix No Amp Erase UNG. et 5 μL de produit de transcription inverse. La réaction a d'abord été incubée à 95 °C pendant 10 min, suivie de 40 cycles à 95 °C pendant 15 s et à 60 °C pendant 1 min. La PCR quantitative en temps réel (RT-qPCR) a été réalisée sur un système de PCR en temps réel ABIPRISM 7500. Les données ont été analysées par un logiciel système 7500 (1 1.4.0) avec le réglage automatique du seuil comparatif (Ct) pour adapter la ligne de base. Les seuils de détection ont été fixés à 35 Ct. Les quantités relatives de miR-34 et de miR-124a ont été calculées à l'aide de la méthode Ct : ΔCt = Ct (miR-34/miR-124a) - Ct (miARN de référence) ; 2-ΔCt.