소아외과에서 멜라토닌의 진통 및 항산화 효과

멜라토닌은 산화 스트레스(OS)의 유해한 영향으로부터 수술을 받는 신생아를 보호하는 데 잠재적인 역할을 보여줍니다. 외인성 멜라토닌 투여 후, 신생아에서 수술 후 지질 및 단백질 과산화의 상당한 감소가 보고되었습니다. 최근에는 Song et al. 시르투인 1(SIRT1)도 통증 발병에 중요한 역할을 하며 신경병증성 통증 및 염증성 통증과 같은 만성 통증 상태에서 진통 효과를 나타내는 것으로 보고되었습니다. 이 전향적, 무작위, 이중 맹검 예비 연구에서 우리는 멜라토닌이 수술을 받는 어린이의 시르투인 경로와 관련된 OS 및 수술 후 통증을 감소시킨다는 가설을 테스트합니다.

멜라토닌(Dicoson, Dicofarm, Italy, 5방울 = 1mg)을 경구 투여했습니다. 이 제품은 보건부 웹사이트(http://www.ministerosalute.it/alimenti/dietetica)의 식이보충제 등록부에 등재되어 있습니다. 943314283 코드로 분류됩니다. 이 제품은 DL n에 따른 유럽 식품 지침의 적용을 받습니다. 2004년 5월 21일자 169. 유럽 의약품 지침 2001/20/EC가 아닌 이탈리아 수준에서 D.L. N. 2003년 6월 24일자 211호. 멜라토닌 투여는 알려진 부작용 없이 우수한 안전성 프로필을 가지고 있습니다.

멜라토닌 혈장 수준은 제조업체의 지침에 따라 Antibodies.com(A87093)의 경쟁적 효소 결합 면역흡착 분석(cELISA) 키트를 사용하여 각 실험 시점(T0, T1, T2)에서 평가되었습니다. 최고 표준(500 pg/mL)보다 높은 농도를 함유한 것으로 의심되는 Mel 치료를 받은 어린이의 T1 및 T2 혈장 샘플을 분석 전에 샘플 희석제로 1:100(v/v)으로 희석했습니다. Thermo Scientific(MultiSkan FC) 마이크로플레이트 판독기에서 450 nm에서 발색을 모니터링하고 4-매개변수 로지스틱(4-PL) 곡선 맞춤을 사용하여 표준 곡선(범위 7.813-500 pg/mL)을 생성했습니다. 분석의 민감도는 4.688 pg/mL였습니다. 분석 내 및 분석 간 변동 계수는 각각 <8% 및 <10%였습니다.

OS를 평가하기 위해 Antibodies.com(A86962)의 cELISA 키트를 사용하여 지질 과산화 지표인 4-Hydroxynonenal(4-HNE)을 측정했습니다. 혈장 농도는 450nm에서 흡광도를 읽고 표준 곡선(범위 31.25-2000)을 참조하여 계산되었습니다. pg/mL). 분석의 민감도는 18.75pg/mL였습니다. 분석 내 및 분석 간 변동 계수는 각각 <8% 및 <10%였습니다.

SIRT1은 Invitrogen(EH427RB)의 ELISA 키트를 사용하여 정량화되었습니다. 혈장 샘플은 분석 전에 제조업체가 지시한 대로 1:2로 희석되었습니다. SIRT1 농도는 450 nm에서의 흡광도 판독 및 표준 곡선(범위 1.23-300 ng/mL)을 참조하여 계산되었습니다. 분석의 민감도는 1.23ng/mL였습니다. 분석 내 및 분석 간 변동 계수는 각각 <10% 및 <12%였습니다.

우리는 이용 가능한 정성적 혈장 샘플(각 시점에서 N=3, T0, T1 및 T2)을 기반으로 microRNA 분석을 수행했습니다. MicroRNA(miR-34 및 miR-124a)는 Norgen 총 RNA 분리 키트를 사용하여 혈장에서 분리되었습니다. 혈장 microRNA 및 스파이크인 cel-miR-39 발현은 TaqMan miRNA 분석을 사용하여 평가되었습니다. TaqMan miRNA 역전사 키트는 miRNA를 역전사하는 데 사용되었습니다. 이어서, RT-qPCR은 PCR 프라이머 및 프로브(5'-FAM)가 포함된 1μL의 20× TaqMan miRNA 분석, 10μL의 2×TaqMan Universal PCR Master Mix No Amp Erase UNG를 포함하는 20μL의 PCR 믹스에서 수행되었습니다. 역전사된 제품의 5 μL. 반응은 먼저 95°C에서 10분 동안 인큐베이션된 후 95°C에서 15초, 60°C에서 1분 동안 40회 반복되었습니다. 정량적 실시간 PCR(RT-qPCR)은 ABIPRISM 7500 실시간 PCR 시스템에서 수행되었습니다. 기준선 조정을 위한 자동 비교 임계값(Ct) 설정을 사용하여 7500 시스템 소프트웨어(11.4.0)로 데이터를 분석했습니다. 검출 임계값은 35 Ct로 설정되었습니다. miR-34 및 miR-124a의 상대적 양은 Ct 방법을 사용하여 계산되었습니다: ΔCt = Ct(miR-34/miR-124a) - Ct(기준 miRNA); 2-ΔCt.