Melatoniinin analgeettiset ja antioksidanttiset vaikutukset lastenkirurgiassa
Melatoniinin vaikutusten arviointi leikkauksen jälkeisen kivun ja oksidatiivisen stressin vähentämisessä leikkausta saavilla lapsilla. Trought Circulating MiR-34 ja MiR-124a, 4-Hydroxynonenal ja Sirtuin 1 (SIRT1) plasmapitoisuudet.
Tausta. Leikkauksen jälkeisen kivun pitkäaikaiset seuraukset ovat haitallisia lapsille. Testasimme hypoteesia, että melatoniini vähentää leikkauksen jälkeistä kipua ja oksidatiivista stressiä, johon liittyy sirtuiinireitti leikkausvaiheessa olevilla lapsilla.
menetelmät. Ennen leikkausta 31 lasta sai satunnaisesti suun kautta annettavaa melatoniinia tai lumelääkettä. Plasman 4-hydroksinonenaalin (4-HNE), melatoniinin, sirtuiini 1:n (SIRT1) ja verenkierron miR-34:n ja miR-124a:n tasot analysoitiin T0:ssa (ennen sairaalahoitoa), T1:ssä (ennen leikkausta) ja T2:ssa (1 tunti). leikkauksen päätyttyä).
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Melatoniinilla on potentiaalinen rooli leikkauksen saaneiden vastasyntyneiden suojelemisessa oksidatiivisen stressin (OS) haitallisilta vaikutuksilta. Eksogeenisen melatoniinin antamisen jälkeen vastasyntyneillä on raportoitu merkittävää lipidien ja proteiinien peroksidaatioiden vähenemistä leikkauksen jälkeisenä aikana. Äskettäin Song et ai. raportoi, että sirtuiini 1:llä (SIRT1) on myös kriittinen rooli kivun patogeneesissä, ja sillä on analgeettisia vaikutuksia kroonisissa kiputiloissa, kuten neuropaattisessa ja tulehduksellisessa kivussa. Tässä prospektiivisessa, satunnaistetussa, kaksoissokkoutetussa pilottitutkimuksessa testaamme hypoteesia, jonka mukaan melatoniini vähentää OS:tä ja leikkauksen jälkeistä kipua sirtuiinireitin yhteydessä leikkausvaiheessa olevilla lapsilla.
Melatoniinia (Dicoson, Dicofarm, Italia, 5 tippaa = 1 mg) annettiin suun kautta. Tuote on listattu terveysministeriön verkkosivuilla olevaan ravintolisärekisteriin (http://www.ministerosalute.it/alimenti/dietetica) ja se on luokiteltu seuraavalla koodilla: 943314283. Tämä tuote on Euroopan elintarvikedirektiivin alainen DL n:n mukaisesti. 169, 21. toukokuuta 2004, eikä Euroopan lääkedirektiiviin 2001/20/EY, joka on siirretty Italian tasolla osaksi kansallista lainsäädäntöä D.L. n. 211, 24. kesäkuuta 2003. Melatoniinin antamisella on hyvä turvallisuusprofiili, eikä sillä ole tunnettuja haittavaikutuksia.
Melatoniinin plasmatasot arvioitiin kussakin kokeellisessa ajankohtana (T0, T1, T2) käyttämällä kilpailevaa entsyymi-immunosorbenttimääritystä (cELISA) osoitteesta Antibodies.com (A87093) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Mel-hoitoa saaneiden lasten T1- ja T2-plasmanäytteet, joiden epäiltiin sisältävän korkeinta standardia (500 pg/ml) korkeampia pitoisuuksia, laimennettiin 1:100 (v/v) näytelaimentimella ennen analyysiä. Värin kehitystä seurattiin 450 nm:ssä Thermo Scientific (MultiSkan FC) -mikrolevylukijassa, ja standardikäyrä (alue 7,813-500 pg/ml) muodostettiin käyttämällä neliparametrista logistista (4-PL) käyräsovitusta. Määrityksen herkkyys oli 4,688 pg/ml; kokeiden sisäiset ja väliset variaatiokertoimet olivat < 8 % ja < 10 %.
4-hydroksinonenaali (4-HNE) lipidien peroksidaatiomarkkerina mitattiin käyttöjärjestelmän arvioimiseksi käyttämällä cELISA-pakkausta osoitteesta Antibodies.com (A86962). Plasman pitoisuudet laskettiin lukemalla absorbanssi aallonpituudella 450 nm ja viittaamalla standardikäyrään (alue 31,25-2000 pg/ml). Määrityksen herkkyys oli 18,75 pg/ml; kokeiden sisäiset ja väliset variaatiokertoimet olivat < 8 % ja < 10 %.
SIRT1 kvantifioitiin käyttämällä Invitrogenin ELISA-sarjaa (EH427RB). Plasmanäytteet laimennettiin suhteessa 1:2, kuten valmistaja on ilmoittanut ennen analyysiä. SIRT1-pitoisuudet laskettiin absorbanssilukemalla aallonpituudella 450 nm ja viittaamalla standardikäyrään (alue 1,23-300 ng/ml). Määrityksen herkkyys oli 1,23 ng/ml; kokeiden sisäiset ja väliset variaatiokertoimet olivat <10 % ja <12 %.
Suoritimme mikroRNA-analyysejä saatavilla olevan laadullisesti kvantitatiivisen plasmanäytteen perusteella (N=3 kullakin aikapisteellä, T0, T1 ja T2). MikroRNA:t (miR-34 ja miR-124a) eristettiin plasmasta käyttämällä Norgen-kokonais-RNA:n eristyspakkausta13. Plasman mikro-RNA:t ja cel-miR-39:n ilmentymien piikit arvioitiin käyttämällä TaqMan-miRNA-määritystä. TaqMan miRNA-käänteistranskriptiosarjaa käytettiin miRNA:iden käänteiskopioimiseen. Myöhemmin RT-qPCR suoritettiin 20 µl:ssa PCR-seosta, joka sisälsi 1 µl 20× TaqMan-miRNA-määritystä, joka sisälsi PCR-alukkeita ja -koettimia (5'-FAM), 10 µl 2×TaqMan Universal PCR Master Mix No Amp Erase UNG. ja 5 μl käänteistranskriptoitua tuotetta. Reaktiota inkuboitiin ensin 95 °C:ssa 10 minuuttia, mitä seurasi 40 sykliä 95 °C:ssa 15 s ja 60 °C:ssa 1 minuutin ajan. Kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR (RT-qPCR) suoritettiin ABIPRISM 7500 Real Time PCR -järjestelmällä. Tiedot analysoitiin 7500-järjestelmän ohjelmistolla (1 1.4.0) automaattisen vertailukynnyksen (Ct) asetuksella perustason mukauttamiseksi. Havaintokynnyksiksi asetettiin 35 Ct. MiR-34:n ja miR-124a:n suhteelliset määrät laskettiin käyttämällä Ct-menetelmää: ΔCt = Ct (miR-34/miR-124a) - Ct (viite miRNA); 2-ΔCt.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Vaihe
- Ei sovellettavissa
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Messina, Italia, 98125
- University Hospital of Messina, Italy
-
Parma, Italia, 43126
- Neonatology Unit, Department of Medicine and Surgery, University of Parma, Pietro Barilla Children's Hospital
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
- Lapsi
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Kuvaus
Sisällön kriteerit:
3–5-vuotiaat lapset on määrä leikkaukseen
Poissulkemiskriteerit:
Lapset, joilla on aivojen epämuodostumia ja/tai vammoja tai leikkaus iltapäivällä tai yöllä melatoniinin tuotantoon vaikuttavien olosuhteiden poistamiseksi
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Diagnostiikka
- Jako: Satunnaistettu
- Inventiomalli: Rinnakkaistehtävä
- Naamiointi: Kaksinkertainen
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Kokeellinen: Melatoniini käsi
Mel-hoitoa saaneet lapset saavat kerta-annoksen melatoniinia suun kautta 0,5 mg/kg (enintään 10 mg).
Melatoniinia (Dicoson, Dicofarm, Italia) valmistaa omistettu asukas kiinteässä 5 ml:n tilavuudessa lisäämällä vettä ruiskuun ilman neulaa.
|
Melatoniinilla hoidetut lapset saavat kerta-annoksen melatoniinia suun kautta 0,5 mg/kg (enintään 10 mg) kiinteässä tilavuudessa 5 ml vettä 1 tunti ennen anestesian induktiota leikkausta varten
|
|
Placebo Comparator: Ohjausvarsi
Kontrolliryhmän lapset saavat 5 ml 5 % dekstroosiliuosta.
|
Kontrolliryhmän lapset saavat 5 ml 5 % dekstroosiliuosta kerran 1 tunti ennen anestesian aloittamista
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
4-hydroksinonenaalin (4-HNE), melatoniinin, sirtuiini 1:n (SIRT1) ja verenkierron miR-34:n ja miR-124a:n plasmatasojen arviointi
Aikaikkuna: Näytteitä 0,2 ml plasmaa kerättiin T0 (ennen sairaalahoitoa, 1 päivä ennen leikkausta), T1 (ennen leikkausta, esianestesia) ja T2 (1 h leikkauksen päättymisen jälkeen ja herääminen nukutuksen jälkeen) ja biokemialliset näytteet. tehdyt analyysit.
|
Melatoniinin plasmapitoisuudet arvioitiin käyttämällä kilpailevaa entsyymikytkettyä immunosorbenttimääritystä (cELISA) Antibodies.com-sivustolta (A87093) valmistajan ohjeiden mukaisesti. 4-hydroksinonenaali (4-HNE) lipidien peroksidaatiomarkkerina mitattiin käyttöjärjestelmän arvioimiseksi käyttämällä cELISA-pakkausta osoitteesta Antibodies.com (A86962). SIRT1 kvantifioitiin käyttämällä Invitrogenin ELISA-sarjaa (EH427RB). MikroRNA:t (miR-34 ja miR-124a) eristettiin plasmasta käyttämällä Norgen-kokonais-RNA:n eristyspakkausta13. Plasman mikro-RNA:t ja cel-miR-39:n ilmentymien piikit arvioitiin käyttämällä TaqMan-miRNA-määritystä. |
Näytteitä 0,2 ml plasmaa kerättiin T0 (ennen sairaalahoitoa, 1 päivä ennen leikkausta), T1 (ennen leikkausta, esianestesia) ja T2 (1 h leikkauksen päättymisen jälkeen ja herääminen nukutuksen jälkeen) ja biokemialliset näytteet. tehdyt analyysit.
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
kontrolloi leikkauksen jälkeistä kipua melatoniinilla hoidetuilla lapsilla verrattuna lumelääkkeeseen
Aikaikkuna: 48 tuntia leikkauksen jälkeen katsottiin leikkauksen jälkeiseksi ajanjaksoksi
|
Parasetamoliannoksia leikkauksen jälkeisen kivun hallintaan kirjattiin melatoniinilla hoidetuilla lapsilla verrattuna lumelääkkeeseen
|
48 tuntia leikkauksen jälkeen katsottiin leikkauksen jälkeiseksi ajanjaksoksi
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- ethics committee 125222022
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Yhdysvalloissa valmistettu ja sieltä viety tuote
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .