Анальгезирующее и антиоксидантное действие мелатонина в детской хирургии

Мелатонин демонстрирует потенциальную роль в защите новорожденных, перенесших операцию, от вредного воздействия окислительного стресса (ОС). После введения экзогенного мелатонина у новорожденных сообщалось о значительном снижении перекисного окисления липидов и белков в послеоперационном периоде. Недавно Сонг и др. сообщили, что сиртуин 1 (SIRT1) также играет решающую роль в патогенезе боли, проявляя анальгетический эффект при хронических болевых состояниях, таких как нейропатическая и воспалительная боль. В этом проспективном рандомизированном двойном слепом пилотном исследовании мы проверяем гипотезу о том, что мелатонин снижает ОВ и послеоперационную боль, затрагивающую сиртуиновый путь, у детей, перенесших операцию.

Мелатонин («Дикозон», «Дикофарм», Италия, 5 капель = 1 мг) назначали перорально. Продукт внесен в Реестр пищевых добавок на сайте Министерства здравоохранения (http://www.ministerosalute.it/alimenti/dietetica). и классифицируется по следующему коду: 943314283. На этот продукт распространяется действие Европейской директивы по пищевым продуктам согласно DL n. 169 от 21 мая 2004 г., а не в Европейскую директиву по лекарственным средствам 2001/20/EC, транспонированную на итальянском уровне Д.Л. н. 211 от 24 июня 2003 г. Применение мелатонина имеет хороший профиль безопасности, без каких-либо известных побочных эффектов.

Уровни мелатонина в плазме оценивали в каждый момент времени эксперимента (Т0, Т1, Т2) с использованием набора для конкурентного иммуноферментного анализа (cELISA) от Antibodies.com (A87093) в соответствии с инструкциями производителя. Образцы плазмы T1 и T2 от детей, получавших Mel, с подозрением на концентрацию, превышающую самый высокий стандарт (500 пг/мл), перед анализом были разбавлены 1:100 (по объему) разбавителем образца. Развитие цвета контролировали при 450 нм с помощью микропланшета Thermo Scientific (MultiSkan FC) и строили стандартную кривую (диапазон 7,813-500 пг/мл) с использованием четырехпараметрической логистической (4-PL) аппроксимации кривой. Чувствительность анализа составила 4,688 пг/мл; коэффициенты вариации внутри и между анализами составляли <8% и <10% соответственно.

4-Гидроксиноненаль (4-HNE) в качестве маркера перекисного окисления липидов измеряли для оценки общей выживаемости с использованием набора cELISA от Antibodies.com (A86962). Концентрации в плазме рассчитывали путем измерения оптической плотности при 450 нм и обращения к стандартной кривой (диапазон 31,25-2000 нм). пг/мл). Чувствительность анализа составила 18,75 пг/мл; коэффициенты вариации внутри и между анализами составляли <8% и <10% соответственно.

SIRT1 определяли количественно с использованием набора ELISA от Invitrogen (EH427RB). Перед анализом образцы плазмы разбавляли 1:2, как указано производителем. Концентрации SIRT1 рассчитывали по показаниям поглощения при 450 нм и относительно стандартной кривой (диапазон 1,23-300 нг/мл). Чувствительность анализа составила 1,23 нг/мл; коэффициенты вариации внутри и между анализами составляли <10% и <12% соответственно.

Мы провели анализ микроРНК на основе доступного качественно-количественного образца плазмы (N = 3 в каждый момент времени, T0, T1 и T2). МикроРНК (миР-34 и миР-124а) выделяли из плазмы с использованием набора для выделения тотальной РНК Norgen13. Плазменные микроРНК и экспрессию экспрессии cel-миР-39 оценивали с помощью анализа микроРНК TaqMan. Для обратной транскрипции микроРНК использовали набор для обратной транскрипции микроРНК TaqMan. Впоследствии RT-qPCR выполняли в 20 мкл смеси для ПЦР, содержащей 1 мкл 20 × TaqMan miRNA для анализа, который содержал праймеры и зонды для ПЦР (5'-FAM), 10 мкл 2 × TaqMan Universal PCR Master Mix No Amp Erase UNG. и 5 мкл продукта обратной транскрипции. Реакцию сначала инкубировали при 95°С в течение 10 мин, затем проводили 40 циклов при 95°С в течение 15 с и при 60°С в течение 1 мин. Количественную ПЦР в реальном времени (RT-qPCR) проводили на системе ПЦР в реальном времени ABIPRISM 7500. Данные анализировались с помощью программного обеспечения системы 7500 (1 1.4.0) с автоматической настройкой сравнительного порога (Ct) для адаптации базового уровня. Пороги обнаружения были установлены на уровне 35 Ct. Относительные количества миР-34 и миР-124а рассчитывали методом Ct: ΔCt = Ct (миР-34/миР-124а) - Ct (эталонная миРНК); 2-ΔCt.