Pijnstillende en antioxiderende effecten van melatonine bij kinderchirurgie

Melatonine speelt een potentiële rol bij het beschermen van pasgeborenen die een operatie ondergaan tegen de schadelijke effecten van oxidatieve stress (OS). Na toediening van exogeen melatonine is bij pasgeborenen een significante vermindering van de peroxidatie van lipiden en eiwitten in de postoperatieve periode gemeld. Onlangs hebben Song et al. rapporteerde dat sirtuin 1 (SIRT1) ook een cruciale rol speelt in de pathogenese van pijn, en pijnstillende effecten vertoont bij chronische pijnaandoeningen zoals neuropathische en inflammatoire pijn. In deze prospectieve, gerandomiseerde, dubbelblinde pilotstudie testen we de hypothese dat melatonine de OS en postoperatieve pijn vermindert waarbij de sirtuin-route betrokken is bij kinderen die een operatie ondergaan.

Melatonine (Dicoson, Dicofarm, Italië, 5 druppels = 1 mg) werd oraal toegediend. Het product is opgenomen in het Register van Voedingssupplementen op de website van het Ministerie van Volksgezondheid (http://www.ministerosalute.it/alimenti/dietetica) en is geclassificeerd met de volgende code: 943314283. Dit product valt onder de Europese levensmiddelenrichtlijn volgens DL n. 169 van 21 mei 2004, en niet op de Europese Geneesmiddelenrichtlijn 2001/20/EG, omgezet op Italiaans niveau met D.L. N. 211 van 24 juni 2003. Toediening van melatonine heeft een goed veiligheidsprofiel, zonder bekende bijwerkingen.

De melatonineplasmaspiegels werden op elk experimenteel tijdstip (TO, T1, T2) beoordeeld met behulp van een competitieve enzymgekoppelde immunosorbenttest (cELISA)-kit van Antibodies.com (A87093) volgens de instructies van de fabrikant. T1- en T2-plasmamonsters van met Mel behandelde kinderen waarvan werd vermoed dat ze concentraties bevatten die hoger waren dan de hoogste standaard (500 pg/ml), werden voorafgaand aan de analyse 1:100 (v/v) verdund met monsterverdunningsmiddel. De kleurontwikkeling werd gevolgd bij 450 nm in een Thermo Scientific (MultiSkan FC) microplaatlezer, en een standaardcurve (bereik 7,813-500 pg/ml) werd gegenereerd met behulp van een logistieke (4-PL) curve-fit met vier parameters. De gevoeligheid van de test was 4,688 pg/ml; de intra- en inter-assayvariatiecoëfficiënten waren respectievelijk <8% en <10%.

4-Hydroxynonenal (4-HNE) als marker voor lipideperoxidatie werd gemeten om OS te evalueren met behulp van een cELISA-kit van Antibodies.com (A86962). Plasmaconcentraties werden berekend door de absorptie bij 450 nm af te lezen en te verwijzen naar de standaardcurve (bereik 31,25-2000 nm). pg/ml). De gevoeligheid van de test was 18,75 pg/ml; de intra- en inter-assayvariatiecoëfficiënten waren respectievelijk <8% en <10%.

SIRT1 werd gekwantificeerd met behulp van een ELISA-kit van Invitrogen (EH427RB). Plasmamonsters werden vóór analyse 1:2 verdund zoals aangegeven door de fabrikant. SIRT1-concentraties werden berekend door de absorptie af te lezen bij 450 nm en te verwijzen naar de standaardcurve (bereik 1,23-300 ng/ml). De gevoeligheid van de test was 1,23 ng/ml; de intra- en inter-assayvariatiecoëfficiënten waren respectievelijk <10% en <12%.

We voerden microRNA-analyses uit op basis van het beschikbare quali-kwantitatieve plasmamonster (N = 3 op elk tijdstip, T0, T1 en T2). MicroRNA's (miR-34 en miR-124a) werden uit plasma geïsoleerd met behulp van de Norgen totaal RNA-isolatiekit . De plasma-microRNA's en piek-in cel-miR-39-expressies werden geëvalueerd met behulp van de TaqMan miRNA-test. De TaqMan miRNA reverse transcriptiekit werd gebruikt om miRNA's omgekeerd te transcriberen. Vervolgens werd RT-qPCR uitgevoerd in 20 μl PCR-mix met 1 μl 20 x TaqMan miRNA-assay, die PCR-primers en -probes (5'-FAM) bevatte, 10 μl 2 x TaqMan Universal PCR Master Mix No Amp Erase UNG en 5 μl omgekeerd getranscribeerd product. De reactie werd eerst gedurende 10 minuten bij 95 °C geïncubeerd, gevolgd door 40 cycli gedurende 15 seconden bij 95 °C en gedurende 1 minuut bij 60 °C. De kwantitatieve real-time PCR (RT-qPCR) werd uitgevoerd op een ABIPRISM 7500 Real Time PCR-systeem. Gegevens werden geanalyseerd door 7500-systeemsoftware (1: 1.4.0) met de automatische vergelijkende drempel (Ct)-instelling voor het aanpassen van de basislijn. Detectiedrempels werden vastgesteld op 35 Ct. De relatieve hoeveelheden miR-34 en miR-124a werden berekend met behulp van de Ct-methode: ΔCt = Ct (miR-34/miR-124a) - Ct (referentie miRNA); 2-ΔCt.