Smertestillende og antioxidantvirkninger af melatonin i pædiatrisk kirurgi

Melatonin viser en potentiel rolle i at beskytte nyfødte, der gennemgår operation mod de skadelige virkninger af oxidativt stress (OS). Efter administration af eksogent melatonin er en signifikant reduktion i lipid- og proteinperoxidation i den postoperative periode blevet rapporteret hos nyfødte. For nylig har Song et al. rapporterede, at sirtuin 1 (SIRT1) også spiller en kritisk rolle i patogenesen af ​​smerte og viser smertestillende virkninger ved kroniske smertetilstande såsom neuropatisk og inflammatorisk smerte. I dette prospektive, randomiserede, dobbeltblindede pilotstudie tester vi hypotesen om, at melatonin reducerer OS og postoperativ smerte, der involverer sirtuin-vejen hos børn, der gennemgår operation.

Melatonin (Dicoson, Dicofarm, Italien, 5 dråber = 1 mg) blev administreret oralt. Produktet er opført i registret over kosttilskud på sundhedsministeriets hjemmeside (http://www.ministerosalute.it/alimenti/dietetica) og er klassificeret med følgende kode: 943314283. Dette produkt er underlagt det europæiske fødevaredirektiv i henhold til DL n. 169 af 21. maj 2004, og ikke til det europæiske lægemiddeldirektiv 2001/20/EF omsat på italiensk niveau med D.L. n. 211 af 24. juni 2003. Indgivelse af melatonin har en god sikkerhedsprofil uden kendte bivirkninger.

Melatoninplasmaniveauer blev vurderet på hvert eksperimentelt tidspunkt (TO, T1, T2) ved hjælp af et konkurrerende enzym-linked immunosorbent assay (cELISA) kit fra Antibodies.com (A87093) i henhold til producentens instruktioner. T1- og T2-plasmaprøver fra Mel-behandlede børn, der mistænkes for at indeholde koncentrationer højere end den højeste standard (500 pg/mL), blev fortyndet 1:100 (v/v) med prøvefortynder før analyse. Farveudvikling blev overvåget ved 450 nm i en Thermo Scientific (MultiSkan FC) mikropladelæser, og en standardkurve (interval 7.813-500 pg/ml) blev genereret ved hjælp af en fire-parameter logistisk (4-PL) kurvepasning. Følsomheden af ​​assayet var 4,688 pg/ml; variationskoefficienterne for intra- og inter-assay var <8% og <10%.

4-Hydroxynonenal (4-HNE) som markør for lipidperoxidation blev målt for at evaluere OS ved at bruge et cELISA-kit fra Antibodies.com (A86962). Plasmakoncentrationer blev beregnet ved at aflæse absorbansen ved 450 nm og referere til standardkurven (interval 31,25-2000) pg/ml). Følsomheden af ​​assayet var 18,75 pg/ml; variationskoefficienterne for intra- og inter-assay var <8% og <10%.

SIRT1 blev kvantificeret ved hjælp af et ELISA-kit fra Invitrogen (EH427RB). Plasmaprøver blev fortyndet 1:2 som angivet af producenten før analyse. SIRT1-koncentrationer blev beregnet ved absorbansaflæsning ved 450 nm og med henvisning til standardkurven (interval 1,23-300 ng/ml). Følsomheden af ​​assayet var 1,23 ng/ml; variationskoefficienterne for intra- og interassay var <10 % og <12 %, henholdsvis.

Vi udførte mikroRNA-analyser baseret på den tilgængelige kvali-kvantitative plasmaprøve (N=3 på hvert tidspunkt, T0, T1 og T2). MikroRNA'er (miR-34 og miR-124a) blev isoleret fra plasma ved hjælp af Norgen total RNA isolation kit13. Plasma microRNA'erne og spike-in cel-miR-39 udtryk blev evalueret ved hjælp af TaqMan miRNA assayet. TaqMan miRNA revers transkriptionssættet blev brugt til at reversere transskribere miRNA'er. Efterfølgende blev RT-qPCR udført i 20 μL PCR-blanding indeholdende 1 μL 20x TaqMan miRNA-assay, som indeholdt PCR-primere og prober (5'-FAM), 10 μL 2xTaqMan Universal PCR Master Mix No Amp Erase UNG og 5 μL omvendt transskriberet produkt. Reaktionen blev først inkuberet ved 95 °C i 10 minutter efterfulgt af 40 cyklusser ved 95 °C i 15 sekunder og ved 60 °C i 1 minut. Den kvantitative real-time PCR (RT-qPCR) blev udført på et ABIPRISM 7500 Real Time PCR System. Data blev analyseret af en 7500-systemsoftware (1 1.4.0) med den automatiske komparative tærskelværdi (Ct) indstilling til tilpasning af basislinjen. Detektionstærskler blev sat til 35 Ct. De relative mængder af miR-34 og miR-124a blev beregnet ved hjælp af Ct-metoden: ΔCt = Ct (miR-34/miR-124a) - Ct (reference miRNA); 2-Act.