Efectos analgésicos y antioxidantes de la melatonina en cirugía pediátrica

La melatonina muestra un papel potencial en la protección de los recién nacidos sometidos a cirugía de los efectos nocivos del estrés oxidativo (OS). Después de la administración de melatonina exógena, se ha informado en recién nacidos una reducción significativa de la peroxidación de lípidos y proteínas en el período postoperatorio. Recientemente, Song et al. informaron que la sirtuina 1 (SIRT1) también juega un papel fundamental en la patogénesis del dolor, mostrando efectos analgésicos en condiciones de dolor crónico como el dolor neuropático e inflamatorio. En este estudio piloto prospectivo, aleatorizado y doble ciego, probamos la hipótesis de que la melatonina reduce la SG y el dolor posoperatorio que involucra la vía de la sirtuina en niños sometidos a cirugía.

La melatonina (Dicoson, Dicofarm, Italia, 5 gotas = 1 mg) se administró por vía oral. El producto está inscrito en el Registro de Suplementos Dietéticos en el sitio web del Ministerio de Sanidad (http://www.ministerosalute.it/alimenti/dietetica) y está clasificado con el siguiente código: 943314283. Este producto está sujeto a la Directiva Europea sobre Productos Alimenticios según DL n. 169 del 21 de mayo de 2004, y no a la Directiva europea sobre medicamentos 2001/20/CE transpuesta a nivel italiano con el D.L. norte. 211 de 24 de junio de 2003. La administración de melatonina tiene un buen perfil de seguridad, sin efectos adversos conocidos.

Los niveles plasmáticos de melatonina se evaluaron en cada punto temporal experimental (T0, T1, T2) utilizando un kit competitivo de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (cELISA) de Antibodies.com (A87093) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las muestras de plasma T1 y T2 de niños tratados con Mel que se sospechaba que contenían concentraciones superiores al estándar más alto (500 pg/ml) se diluyeron 1:100 (v/v) con diluyente de muestra antes del análisis. El desarrollo del color se controló a 450 nm en un lector de microplacas Thermo Scientific (MultiSkan FC) y se generó una curva estándar (rango 7,813-500 pg/ml) utilizando un ajuste de curva logística de cuatro parámetros (4-PL). La sensibilidad del ensayo fue de 4,688 pg/ml; los coeficientes de variación intra e interensayo fueron <8% y <10%, respectivamente.

Se midió el 4-hidroxinonenal (4-HNE) como marcador de peroxidación lipídica para evaluar la SG utilizando un kit cELISA de Antibodies.com (A86962). Las concentraciones plasmáticas se calcularon leyendo la absorbancia a 450 nm y haciendo referencia a la curva estándar (rango 31,25-2000 pg/mL). La sensibilidad del ensayo fue de 18,75 pg/ml; los coeficientes de variación intra e interensayo fueron <8% y <10%, respectivamente.

SIRT1 se cuantificó utilizando un kit ELISA de Invitrogen (EH427RB). Las muestras de plasma se diluyeron 1:2 según lo indicado por el fabricante antes del análisis. Las concentraciones de SIRT1 se calcularon mediante lectura de absorbancia a 450 nm y con referencia a la curva estándar (rango 1,23-300 ng/ml). La sensibilidad del ensayo fue de 1,23 ng/ml; los coeficientes de variación intra e interensayo fueron <10% y <12%, respectivamente.

Realizamos análisis de microARN basados ​​en la muestra de plasma cuali-cuantitativa disponible (N = 3 en cada momento, T0, T1 y T2). Los microARN (miR-34 y miR-124a) se aislaron del plasma utilizando el kit de aislamiento de ARN total Norgen13. Los microARN de plasma y las expresiones de cel-miR-39 se evaluaron utilizando el ensayo de miARN TaqMan. El kit de transcripción inversa de miARN TaqMan se utilizó para transcribir de forma inversa los miARN. Posteriormente, se realizó RT-qPCR en 20 μL de mezcla de PCR que contenía 1 μL de ensayo de miARN TaqMan 20×, que contenía cebadores y sondas de PCR (5'-FAM), 10 μL de 2×TaqMan Universal PCR Master Mix No Amp Erase UNG. y 5 μL de producto con transcripción inversa. La reacción se incubó primero a 95 °C durante 10 min, seguido de 40 ciclos a 95 °C durante 15 s y a 60 °C durante 1 min. La PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR) se realizó en un sistema de PCR en tiempo real ABIPRISM 7500. Los datos se analizaron mediante un software del sistema 7500 (1 1.4.0) con la configuración automática del umbral comparativo (Ct) para adaptar la línea de base. Los umbrales de detección se establecieron en 35 Ct. Las cantidades relativas de miR-34 y miR-124a se calcularon utilizando el método Ct: ΔCt = Ct (miR-34/miR-124a) - Ct (miARN de referencia); 2-ΔCt.