アルコール関連肝硬変における最適化された寛解 (Pro-ALC)

デンマークでは、肝硬変の発生率は男性の5倍に増加し、過去40年間に女性の3倍になりました。 2008年、肝硬変と約15,000人が診断されました。 病院に再入院した患者は、再入院を避ける患者よりも90日間の死亡率が高くなっています。

肝臓肝硬変の臨床経過には、腹水、肝脳症、静脈瘤出血、腎機能障害、および病院への繰り返しの入院による感染症の合併症が含まれます。 これらの合併症は、肝臓の門脈高血圧の発達によって促進されます。 代償不全はさらなる合併症と死亡のリスクが著しく増加することに関連しているため、この「非代償性」段階への進行は、病気のコースの特徴と見なされます。

いくつかの臨床研究では、門脈高血圧に関連する合併症を防ぐか、肝硬変のさらなる進行を遅らせる医療療法を見つけようとしています。 しかし、増加する証拠は、肝臓疾患の根本的な原因の治療と肝硬変を引き起こす毒性薬の除去の積極的な測定が疾患の進行を遅らせるか、肝硬変の退縮を誘発する可能性があることを示しています。 この概念は、肝補償として説明されています。

BMIやアルブミンのレベルなどの臨床的および生化学的特徴は、補償に関連している可能性がありますが、アルコールの影響なしで、および肝硬変の改善を予測および監視する能力を備えた新しいバイオマーカーを調査する臨床研究の著しい必要性があります。

デンマークの肝硬変患者の75％から80％の間で、アルコールを有害で使用しています。 アルコールの依存は、社会的孤立、失業のリスク、およびヘルスケアのコンプライアンスの減少につながります（8）。 肝硬変は生活の質の低下に関連しており、感情的および社会経済的に患者や親relativeに影響を与えます。

アルコール関連の肝疾患（ARLD）は、患者の健康と生活に大きな影響を及ぼし、治療は症候性の緩和とさらなる合併症の予防を中心に展開します。 合併症を緩和するだけでなく、アルコール関連の肝臓疾患の基礎となる経路にも対処する治療オプションを調査する必要がありません。アルコール関連肝硬変（ALC）の重度の段階でも。 ARLDでの補償を調査する以前の研究は遡及的であり、正確な目的のために設計されていません。

BMI、女性の性別、マイナーポータル高血圧などの要因は、補償の可能性の増加に関連していることが知られています。 プロテオームとリピドームからの遺伝的活性化と分子バイオマーカーの追加要因は、わずかな注目を集めているだけであり、代償不全、門脈高血圧、アルコール使用のドライバーの治療の影響、および疾患の自然原因への影響は対処されていません。

ガストロユニット、Amager-Hvidovre Hospital（AHH）は、コペンハーゲンの南と西550,000人の市民の記録的なエリアを持っています。 ガストロユニットは、デンマークで最大のアプリです。 毎日90の入学。 140人は、一般的な診療からの紹介または入院中の病気のデビューにより、私たちの部門で毎年肝硬変と診断されます。 2019年11月から2022年3月まで、357人の患者がガストロユニットの肝硬変について評価されました。 これらの20％は12か月以内に死亡しました。 75％が肝硬変の主な原因としてアルコールを使用していました。

新しい分子技術とリスク予測ARLDの分子病理学は不完全に理解されています。 ALDのスペクトル全体にわたるプロテオームダイナミクスの特性評価は、疾患の進行と寛解の両方の疾患メカニズムに関する新しい洞察を提供する可能性があります。 MSベースのプロテオミクスの最近の進歩により、生物医学および臨床研究への影響が大きく拡大しています。 これにより、数千のタンパク質の同定と定量化が可能になり、疾患メカニズムの研究やバイオマーカーの特定に適しています。 以前の研究では、代謝機能障害関連脂肪肝疾患（MASH）およびアルコール関連の線維症におけるプロテオームが評価されており、プロテオームプロファイルは肝疾患の重症度と強い関連性を示しました。 ALCの厳しい段階で連続した追跡調査を伴う研究はまだ欠落しています。

MSベースのプロテオミクスは、特に疾患の寛解の見通しにおいて、クリニックの予測価値のバイオマーカーを特定するかもしれません。 臨床データと結果との連携は、AHの寛解の予測とALCの補償の予測と監視におけるプロテオームバイオマーカーの使用をサポートする可能性があります。

炎症とサイトカインのいくつかのマーカーは、減価補償の促進に関与しており、早期死のリスクを予測する可能性があります。 そのようなマーカーがALCおよびAHの寛解と補償を予測できるかどうかは不明です。 以前の研究では、炎症と死亡率の関係を評価していますが、ALCの代謝と予後、モニタリング、有効性OG治療の間の関連性を調査する前向き研究が欠落しています。

肝臓疾患の進行と寛解におけるトランクリプトミクスと遺伝子の活性化肝臓の微小環境の分子および細胞の複雑さは、潜在的な治療の発達を妨げる重要な障害のままです。 RNAシーケンスの以前の研究は小さく、フォローアップがありません。

遺伝子チップとハイスループットシーケンスの進歩により、肝硬変の全生存率を予測するために、いくつかの予後遺伝子シグネチャが確立されています。

最近の単一細胞RNAシーケンスおよびバルクRNAシーケンス研究により、特定の間葉系、内皮、および単球系統が肝硬変肝臓で濃縮されることが示されています。

組織全体（バルク）RNAシーケンスは、サンプルのRNA含有量の平均読み出しを提供します。これは、組織内に存在する異なる細胞からの混合RNAシグナルを表し、したがって細胞型の有病率によって大きく影響されます。 単一の細胞RNAシーケンス（SCRNA-seq）と比較して、バルクRNAシーケンスは、まれな細胞集団、または特定の病原性細胞亜集団を研究するために使用することはできませんが、特に臨床的表現型にリンクされている場合、およびSCRNA-seqライブラリと比較した場合、病原性遺伝子転写および細胞機能障害のパターンへの洞察を提供します。

肝臓の損傷を引き起こす毒性剤を除去した後、トランスクリプトームの変化を以前に比較した研究はありません。

ALCでは、肝硬変の重度の段階で、ARLDの基礎となる経路に対処する治療オプションを調査するための満たされていない必要性があります。 補償の誘導は、ALC患者の生存と「入場無料」の日常生活の両方を延長します。

目的本研究の全体的な目的は、ALDの人の分子プロファイルと経路を調査して、肝硬変のパーソナライズされた監視と追跡調査をサポートすることです。

仮説ALCの予後は、連続または停止したアルコール摂取によって異なります。 アルコールは、ALCの生存と補償に影響を与える可能性があります。 アルコールは、ALCの各人の分子プロファイルに影響を与える可能性があり、したがって、肝硬変の入院、再入院、進行に影響を与えます。

ALCを持つ人の分子プロファイルのより良い知識は、患者の健康と身体パフォーマンスの臨床的特徴と組み合わせて、ALCの人のパーソナライズされた治療、監視、フォローアップの行動を計画および管理できるようになります。

肝臓の駆動進行と肝硬変の寛解の分子メカニズムに対するより深い洞察は、臨床データとの組み合わせで、肝硬変の転帰を予測し、パーソナライズされた監視を促進し、適切な患者の適切でタイムリーな治療をサポートする能力をサポートします。 この調査結果は、将来の肝硬変の治療と予防のための新しい分子薬標的の開発をサポートする可能性もあります。

方法研究は、診断から死亡またはコホートからの離脱、または患者が追跡される発生率コホートです。 診断から3か月以内に連続して患者を含めるよう努めます。 結果は、Strobeガイドラインの後に報告されます。

調査対象のすべての人は、胃ユニットにおけるアルコール関連の肝臓肝硬変のための調査および診断のための最初の紹介と、入院の理由に関係なく入院中にアルコール関連肝硬変のデビューを担当するすべての患者は、包含の資格があります。

この研究では、肝硬変または併存疾患の診断や治療を妥協しません。また、将来の追跡期間中に介入研究に含めることは可能です。

募集肝臓肝硬変のデビューのすべての患者は、アルコールの使用に関連していると疑われ、診断の時間と状況に関係なく、併存疾患と疾患の重症度がコホートに含まれます。 すべての参加者は、医師または看護師のいずれかが標準的なケアを提供することに従事します。 すべての参加者は、研究捜査官とプロジェクト看護師によって口頭での書面で通知されます。

アルコール停止介入と標準ケアAHH、したがって、この研究のすべての参加者には、胃ユニットで治療されたALCのすべての患者には、標準的なケア治療が提供されます。 これには、標準的な生化学、超音波、フィブロスカン、CTスキャンおよび内視鏡検査の調査、栄養補助食品、肝硬変および合併症の治療、および併存疾患が含まれます。

アルコール停止介入は、ALCのすべての患者に標準的なケア治療として提供されます。 介入には、離脱症状の治療と渇望の治療、およびアルコール治療の地方自治体の申し出への紹介への支援が含まれます。 さらに、アルコールの停止を促進し、一次セクターでのさらなるアルコール治療を支援することを目的として、患者は治療の一環として動機付け面接（MI）を提供されます。

患者と可能な介護者は、診断後最初の3か月以内に肝臓クリニックの専門看護師が実施した3つのMIセッションに招待されます。

患者ジャーナルからのデータこの研究では、書面による同意が提供された後、患者ジャーナルから情報を取得します。

同意を得る前に患者ジャーナルから取得したデータは、ALCの診断、診断の時間、およびARLDの診断につながった入院または紹介の原因に限定されます。 参加に対する書面による同意の前に得られた生体認証データは、研究のために取得されません。 このデータは、包含の前にゼロから30日の期間から収集される場合があり、臨床医師、および研究要員に渡されます。

データと個人情報は、現在の法律、データ保護法、および一般的なデータ保護規則で述べられている後に登録および監視されます。

遺伝分析DNAは、血球、全血、および参加者から便から抽出されます。 DNAは、さらに分析するまで-80cで保存されます。 ジェノタイピングは、GWAS-chipで実行されます（つまり、 タンパク質変化の大きな効果バリアントのために濃縮されたイルミナのエクソメーシップを使用したターゲットゲノムマッピング）。 ウルトラレアバリアント（<1/1000）はキャプチャされません。 臨床データと組み合わせた遺伝子分析の結果は、「リスクプロファイリング」の文脈における疾患の死亡、生存、重症度に関連する遺伝子を特定する場合があります。 ゲノム分析には、一般的なバリアントと共通バリアントのポリジェニックリスクスコアプロファイリングが含まれます。 全ゲノムシーケンスは実行されません。

便の細菌DNAの遺伝子分析は、腸の機能不全と肝硬変の相互作用の比較分析に使用されます。

ALC、転写腫、メタボロミクス、プロテオミクスの発達、進行および寛解に関与する新規潜在的なマーカーの同定のためのトランスクリプトミクス、メタボロミクス、およびプロテオミクスは、肝臓組織および血液で行われます。 分析では、受容体やリガンドを含む可能性のあるバイオマーカーの発現レベルと細胞局在を評価し、下流のシグナル伝達分子を評価します。 適用された手法を以下に説明します。 臨床データとともに、結果は、ARLDの寛解と進行のための可能な要因の理解を改善します。

発見の分野は急速に進化しており、方法は、品質、関連性、および分析に最適な賞品を確保するための適応の影響を受ける可能性があります。

プラズマサンプルのプロテオミクス分析分析により、高い成功率が保証され、患者は長期にわたって繰り返しサンプリングが容易に許容されます。 SNAP凍結肝生検は、ベースラインで、分析のために12か月で収集されます。 サンプルと液体クロマトグラフィーおよび質量分析（LC/MS）分析の調製は、コペンハーゲン大学のTorben HansenおよびBasic代謝研究センター（CBMR）から以前に説明された技術に従っています。 シングルショットプラズマプロテオーム解析では、ペプチド混合物が溶出され、Evosep One LCシステム（Evosep Biosystems）がオンラインで結合され、Exploris 480質量分析計を軌道に乗せます。

リピドミクス分析：

分析は、最先端の既存の手順に従って実行され、最適なテクノロジーを適用するために変更されます。

プラズマの調製後、2つの標準的な携帯電話の勾配を使用して、水域の獲得ベーチC18カラム（1.7μmx 2.1mm x 100 mm）でクロマトグラフィー分離が行われます（移動相Aには水、0.1％ギ酸、酢酸アンモニウム、モーメントフェーズBがイソプロパノールとアコプロパノールとアコプロパノール（1：1）を含む）を含みます。

化合物の質量分析の同定は、血漿中の標的代謝産物の事前に作られたライブラリに基づいて標的にされます。

リピドミクス分析の結果に基づいて、診断マーカーのパネルを選択します。これは、疾患の進行の速度を最も効率的に説明します。 選択したバイオマーカーでは、LC-MS-MS（MRMモードのトリプル四重極MS）方法論に基づいて、内部標準として安定した同位体標識化合物を含む市販の標準化合物を使用して、絶対的な定量的方法を開発します。 この方法は、標準化されたプロトコルに従って検証されます。 成功した結果の場合、パネルバイオマーカーの濃度制限を設定して、ゆっくり、中程度、および迅速な疾患の進行を予測することができます。また、長期にわたって、臨床検査室と個別化医療に移行する方法を準備することができます。

プロテオミクスと脂肪剤の生物学的分析とデータ管理は、CBMRで行われます。

トランスクリプトモミクス分析の分析と生物統計学は、基本的な代謝研究センターで行われます。

バルクRNAシーケンスは、組織全体の転写環境を提供し、トランスクリプトームを深く調査できるようにしますが、個々の細胞を区別しません。 AHの進行または再補償に重要な役割を果たす遺伝子を特定するために、AHのバルクRNAシーケンスからのデータセットを、肝臓の単一細胞RNSシーケンスからすでに確立されたデータセットと比較します。

サンプルとSCRNaseQでバルク-RNAによって同時に示唆されている遺伝子に基づいて、ALCの主要な転写調節因子を探索できます。

このリソースを利用して、肝生検のバルクトランスクリプトームデータを計算して、各患者の各細胞タイプ（肝細胞、肝細胞酸細胞、肝正弦類の上皮細胞など）の相対存在量を推定します。 進行と補償の両方の可能な疾患調節因子が評価されます。

Research Biobank Biobankが研究のために確立されます。 バイオバンクには、ベースラインで収集された血液、3ヶ月、1年、3年、ベースラインで収集された肝臓組織と便が含まれます。 各時点で、15 mlの血液と3グラムの便が収集されます。 ベースラインで、1年後に0、2グラムの肝臓組織が収集されます。 参加者が腹水を持っており、パラセシスが必要な場合、腹部の皮下脂肪生検が腹部の切開スポットから採取されます。

研究の余剰物質は、将来の研究のためにバイオバンクに移されます。

この研究は、アルコールに関連する進行性肝疾患のより良い特性評価に貢献し、肝疾患の患者に対する治療およびリハビリテーションの提供の将来の組織化の改善に貢献します。 徹底的な特性評価と連続的な包含により、人口におけるALCの発生率、有病率、影響、およびその治療に割り当てられた医療資源の利用に関する理解が向上します。

肝臓の進行と寛解の分子メカニズムに対するより深い洞察は、臨床データと組み合わせて、肝硬変の結果を予測する能力をサポートし、適切な患者の適切な治療を適切なタイミングで提供することを目的としたパーソナライズされた監視を促進します。

前向きコホート研究は、生存とヘルスケアサービスの使用に重要な以前は特定されていないリスク要因の特定にさらに貢献します。それにより、経済的および医学的利益の両方を提供する健康慣行の変化を実施する基礎を形成します。 さらに、この研究では、臨床的に関連するエンドポイントを使用した介入研究のための新しい分野を明らかにする可能性があります。