Optimoitu remissio alkoholiin liittyvässä maksakirroosissa (Pro-ALC)

Tanskassa maksakirroosin esiintyvyys kasvaa viisinkertaisesti miehille ja kolminkertaistuu naisille viimeisen 40 vuoden aikana. Vuonna 2008 noin 15 000 ihmisellä diagnosoitiin maksakirroosi. Potilailla, jotka on otettu takaisin sairaalaan, on korkeampi 90 päivän kuolleisuus kuin potilailla, jotka välttävät takaisinottoa.

Maksakirroosin kliininen kulku sisältää askiittien komplikaatioita, maksan enkefalopatiaa, erilaisia ​​verenvuotoja, munuaisten toimintahäiriöitä ja infektioita toistuvilla sairaalaan pääsyillä, jotka huomattavasti pahenevat ennustetta. Näitä komplikaatioita ohjaa portaalin verenpainetaudin kehitys maksassa. Tätä etenemistä 'dekompensoituun' vaiheeseen pidetään taudin kurssin tunnusmerkkinä, koska dekompensaatioon liittyy huomattavasti lisääntynyt jatkokomplikaatioiden ja kuoleman riski.

Useissa kliinisissä tutkimuksissa on pyritty löytämään lääketieteellisiä lääkkeitä, jotka estävät portaalien verenpaineeseen liittyvät komplikaatiot tai hidastavat lisää etenemistä maksakirroosissa. Kuitenkin kasvavat todisteet osoittavat, että maksasairauden taustalla olevan syyn ja maksakirroosin aiheuttamien myrkyllisten aineiden poistamisen aktiiviset hoidot voivat hidastaa sairauden etenemistä tai jopa indusoida maksakirroosin regression. Tätä käsitettä kuvataan maksan korvaamiseksi.

Kliiniset ja biokemialliset piirteet, kuten BMI- ja albumiinitasot, voivat liittyä korvauksiin, mutta kliinisiin tutkimuksiin on huomattava tarve, jossa tutkitaan uusia biomarkkereita, joilla on kyky ennustaa ja seurata maksakirroosin paranemista ja alkoholin vaikutuksia ja ilman sitä.

75–80%: lla maksakirroosia sairastavista potilaista Tanskassa on ollut tai niillä on ollut haitallista alkoholia. Alkoholin riippuvuus johtaa sosiaaliseen eristykseen, työttömyysriskiin ja terveydenhuollon vähentymiseen (8). Kirroosi liittyy heikentyneeseen elämänlaatuun ja vaikuttaa potilaisiin ja sukulaisiin sekä tunne- että sosioekonomisesti.

Alkoholiin liittyvässä maksasairaudessa (ARLD) on suuri vaikutus potilaiden terveyteen ja elämiin, ja hoito pyörii oireenmukaista helpotusta ja uusien komplikaatioiden ehkäisyä. Hoitovaihtoehtoja on tyydyttämätön tutkia, joka ei vain lievittää komplikaatioita, vaan myös käsitellä alkoholiin liittyvän maksasairauden taustalla olevia reittejä, myös alkoholiin liittyvän maksakirroosin vakavissa vaiheissa (ALC). Aikaisemmat tutkimukset, joissa tutkitaan korvausta ARLD: ssä, ovat retrospektiivisia, eikä niitä ole suunniteltu tarkkaan tarkoitukseen.

Tekijöiden, kuten BMI: n, naispuolisten sukupuolten ja pienten portaalien verenpainetaudin, tiedetään liittyvän lisääntyneeseen korvauksen todennäköisyyteen. Geneettisen aktivaation ja proteomin ja lipidomin molekyylibiomarkkereiden lisätekijöitä ovat herättäneet vain vähäistä huomiota, ja dekompensaation, portaalien verenpainetaudin ja alkoholin käytön tekijöiden hoitamisen vaikutuksia ei ole käsitelty.

Gastro-yksikön, Amager-Hvidovren sairaalan (AHH) ennätyspinta-ala on 550 000 kansalaista Kööpenhaminasta etelään ja länteen. Gastro -yksikkö on Tanskan suurin, sovellus. 90 pääsyä päivittäin. 140 ihmiselle diagnosoidaan maksakirroosi vuosittain osastollamme joko yleiskäytännön lähettämällä tai taudin debyyttillä sairaalahoidon aikana. Marraskuusta 2019 maaliskuuhun 2022 357 potilasta arvioitiin maksakirroosista mahayksikössä. 20 % näistä kuoli kahdentoista kuukauden kuluessa. 75 prosentilla alkoholin käyttö maksakirroosin ensisijaisena syynä.

Uudet molekyylitekniikat ja riskien ennustaminen ARLD: n molekyylin patofysiologia ymmärretään puutteellisesti. Proteomidynamiikan karakterisointi ALD: n spektrissä voisi tarjota uusia näkemyksiä sekä etenemisen että sairauden remission sairausmekanismeista. Viimeaikaiset edistykset MS-pohjaisessa proteomiikassa ovat laajentaneet huomattavasti sen vaikutusta lääketieteelliseen ja kliiniseen tutkimukseen. Se mahdollistaa tuhansien proteiinien tunnistamisen ja kvantifioinnin, mikä tekee siitä sopivan sairausmekanismien tutkimiseen ja biomarkkereiden tunnistamiseen. Aikaisemmissa tutkimuksissa on arvioitu proteomia metabolisessa toimintahäiriöön liittyvässä steatoottisessa maksasairaudessa (MASH) ja alkoholiin liittyvässä fibroosissa, ja proteomiset profiilit osoittivat voimakkaan yhteyden maksasairauden vakavuuteen. Tutkimukset peräkkäisissä seurannassa ALC: n vakavissa vaiheissa puuttuvat edelleen.

MS-pohjainen proteomiikka voi tunnistaa ennustavan arvon biomarkkerit klinikalla etenkin taudin remissiomahdollisuuksissa. Yhteys kliinisiin tietoihin ja tuloksiin voi tukea proteomisten biomarkkereiden käyttöä remission ennustamisessa ja seurannassa AH: ssa ja korvaus ALC: ssä.

Useat tulehduksen ja sytokiinien markkerit osallistuvat dekompensaatioon, ja heillä on mahdollisuus ennustaa varhaisen kuoleman riski. Ei tiedetä, voivatko tällaiset markkerit ennustaa remission ja korvauksen ALC: ssä ja AH: ssa. Aikaisemmissa tutkimuksissa on arvioitu tulehduksen ja kuolleisuuden välisiä suhteita, mutta mahdollisissa tutkimuksissa, joissa tutkitaan aineenvaihdunnan ja ennusteen biomarkkereiden välisiä assosiaatioita, seurantaa ja tehokkuutta OG -hoidossa IN ALC: ssä.

Maksasairauden etenemisen ja remission transkriptiikka ja geenin aktivaatio Maksan mikroympäristön molekyyli- ja solujen monimutkaisuus on edelleen keskeinen este, joka estää potentiaalisten hoidon kehitystä. Aikaisemmat tutkimukset RNA-sekvensoinnissa ovat pieniä ja ja seurannassa.

Geenisirujen ja korkean suorituskyvyn sekvensoinnin edistymisen myötä on todettu useita prognostisten geenien allekirjoituksia, jotka ennustavat yleistä eloonjäämistä maksakirroosissa.

Viimeaikaiset yksisoluisen RNA -sekvensointi- ja irtotavarana RNA -sekvensointitutkimukset ovat osoittaneet, että spesifiset mesenkymaaliset, endoteeli- ja monosyyttien linjat rikastuvat maksakirroottisissa maksassa.

Koko kudoksen (irtotavarana) RNA -sekvensointi tarjoaa keskimääräisen lukemisen näytteen RNA -pitoisuudesta, joka edustaa kudoksessa olevien eri solujen sekoitettuja RNA -signaaleja ja siten solutyypin esiintyvyys vaikuttaa merkittävästi. Verrattuna yksisoluiseen RNA-sekvensointiin (SCRNA-Seq), irtotavarana RNA-sekvensointia ei voida käyttää harvinaisten solupopulaatioiden tai spesifisten patogeenisten solujen alaryhmien tutkimiseen, mutta se tarjoaa käsityksen patogeenisen geenin transkription ja solujen toimintahäiriöiden malleista, etenkin kun se on kytketty kliiniseen fenotyyppiin ja verrattuna maksakudoksen SCRNA-Seq-kirjastoon.

Yhdessäkään tutkimuksessa ei ole aikaisemmin verrattu transkriptomin muutoksia maksavaurioita aiheuttavien myrkyllisten aineiden poistamisen jälkeen.

ALC: ssä on tyydyttämätön tarve tutkia hoitovaihtoehtoja, jotka käsittelevät ARLD: n taustalla olevia reittejä, myös maksakirroosin vakavissa vaiheissa. Kompensaation induktio pidentää sekä eloonjäämistä että 'pääsyvapaa' jokapäiväistä elämää potilailla, joilla on ALC.

Tavoitteet Tämän tutkimuksen yleisen tavoitteena on tutkia ALD: n henkilöiden molekyyliprofiilia ja reittejä henkilökohtaisen seurannan ja seurannan tukemiseksi maksakirroosissa.

Hypoteesi ALC: n ennuste vaihtelee jatkuvan tai lopetetun alkoholin saannin mukaan. Alkoholi voi vaikuttaa selviytymiseen ja korvaukseen ALC: ssä. Alkoholi voi vaikuttaa jokaisen ALC: n molekyyliprofiiliin ja siten vaikuttaa sairaalahoitoon, takaisinottoihin ja maksakirroosin etenemiseen.

Parempi tuntemus ALC: n henkilöiden molekyyliprofiilista tulee yhdessä potilaan terveyden ja fyysisen suorituskyvyn kliinisten piirteiden kanssa antaa meille mahdollisuuden suunnitella ja antaa henkilökohtaisen hoidon, seurannan ja seurannan ALC-potilailla.

Syvempi käsitys maksakirroosin etenemisen ja remission molekyylimekanismeista-yhdistelmä kliinisen tiedon kanssa-tukee kykyämme ennustaa maksakirroosin tuloksia, helpottaa henkilökohtaista seurantaa ja seurantaa sekä tukea oikean potilaan oikean ja oikea-aikaisen hoidon. Tulokset voivat myös tukea uusien maksakirroosin hoidon ja ehkäisemisen kehitystä tulevaisuudessa.

Menetelmät Tutkimus on esiintyvyyskohortti, jossa potilaita seurataan diagnoosista kuolemaan tai vetäytymiseen kohortista. Pyrimme sisällyttämään potilaat peräkkäin kolmen kuukauden kuluessa diagnoosista. Tulokset ilmoitetaan Strobe -ohjeiden jälkeen.

Tutkimushenkilöt Kaikki henkilöt, joilla on alkuperäinen alkoholiin liittyvän maksakirroosi- ja diagnosointi gastro-yksikössä, ja kaikki potilaat, joilla debytoi alkoholiin liittyvästä maksakirroosista maahanpääsyn aikana riippumatta pääsyn syystä, ovat oikeutettuja.

Tämä tutkimus ei vaaranna maksakirroosin tai lisävaikeuksien diagnostiikkaa tai hoitoa, ja interventiotutkimuksiin osallistuminen tulevaisuuden seurannan aikana on mahdollista.

Rekrytointi kaikille potilaille, joiden maksan maksakirroosin debyytti epäillään liittyvän alkoholin käyttöön, ja diagnoosin ajasta ja olosuhteista riippumatta tarjotaan taudin vakavuutta. Joko lääkäri tai sairaanhoitaja harjoittaa kaikkia osallistujia, jotka tarjoavat standardia. Tutkijat ja projekti sairaanhoitajat ilmoittavat kaikille osallistujille sekä suun kautta.

Alkoholin lopettamisen interventio ja hoidon standardi kaikille potilaille, joilla on ALC -hoidettu Gastro -yksikössä, AHH, ja siksi kaikille tämän tutkimuksen osallistujille tarjotaan hoitomenettely. Tähän sisältyy tutkimuksia tavanomaisella biokemialla, ultraäänellä, fibroscanilla, CT-SCAN: lla ja endoskopialla sekä ravitsemuslisäaineilla, maksakirroosin ja komplikaatioiden lääketieteellisellä hoidolla sekä lisävaikutuksia.

Alkoholin lopettamisen interventiota tarjotaan hoitomenettelynä kaikille potilaille, joilla on ALC. Interventio sisältää vieroitusoireiden ja halun lääketieteellisen hoidon sekä tuen alkoholihoitotarjouksiin. Lisäksi potilaille tarjotaan motivaatiohaastattelua (MI) osana hoitoa tavoitteena helpottaa alkoholin lopettamista ja tukemaan alkoholin jatkamista primaarisektorilla.

Potilaat ja mahdolliset hoitajat kutsutaan kolmeen MI -istuntoon, jotka erikoistuneet sairaanhoitajat suorittavat maksaklinikalla kolmen ensimmäisen kuukauden aikana diagnoosin jälkeen.

Potilaslehtien tiedot Tässä tutkimuksessa haetaan tietoja potilaspäivätiltä, ​​kun kirjallinen suostumus on annettu.

Potilaan lehdistä haetut tiedot ennen suostumuksen saamista rajoittuvat ALC: n diagnoosiin, diagnoosin aikaan ja sairaalahoitoon tai lähetykseen, joka johti ARLD: n diagnoosiin. Ennen kirjallista suostumusta osallistumiseen saatua biometristä tietoa ei haeta tutkimusta varten. Nämä tiedot voidaan kerätä nollasta kolmekymmeneen päivään ennen sisällyttämistä, ja ne siirretään lääkärin tutkijoille ja tutkimushenkilöstölle.

Tiedot ja henkilökohtaiset tiedot rekisteröidään ja seurataan nykyisen lainsäädännön, tietosuojalain ja yleisen tietosuoja -asetuksen mukaisesti.

Geneettiset analyysit DNA uutetaan verisoluista, kokoverestä ja jakkarasta osallistujilta. DNA: ta säilytetään -80C: lla lisäanalyysiin saakka. Genotyyppien määritys suoritetaan GWAS-sirulla (ts. Kohdennettu genomikartoitus) käyttämällä Illumina Exomechip -tuotteita, jotka on rikastettu proteiinia muuttaviin, suurten vaikutusten variantteihin. Ultra-harvinaisia ​​variantteja (<1/1000) ei vangita. Geneettisten analyysien tulokset yhdistettynä kliinisiin tietoihin voivat tunnistaa kuolleisuuteen, eloonjäämiseen ja sairauden vakavuuteen liittyvät geenit ”riskin profilointi” -ympäristössä. Genomianalyysi käsittää yleiset variantit ja polygeeniset riskipisteen profiloinnin yleisiin variantteihin. Koko genomisekvensointia ei suoriteta.

Stoolin bakteeria -DNA: n geneettisiä analyysejä käytetään vertaileviin analyyseihin suoliston toimintahäiriöiden ja maksakirroosin välisestä vuorovaikutuksesta.

Transkriptiikka, metabolomia ja proteomiikka uusien potentiaalisten markkerien tunnistamiseksi ALC: n kehitykseen, etenemiseen ja remissioon, transkriptiikkaan, metabolomiin ja proteomikkaan suoritetaan maksakudoksella ja verellä. Analyysit arvioivat ekspressiotasot ja mahdollisten biomarkkereiden solujen sijainnin, mukaan lukien reseptori ja ligandit sekä alavirran signalointimolekyylit. Käytetyt tekniikat on kuvattu alla. Yhdessä kliinisen tiedon kanssa tulokset parantavat ARLD: n remission ja etenemisen mahdollisten ohjaimien ymmärtämistä.

Discovery Omics Tenchnologies -kenttä kehittyy nopeasti, ja menetelmät voidaan soveltaa sopeutumaan laatuun, relevanssiin ja parhaisiin palkintoihin analyysille.

Plasmanäytteiden proteomiikan analyysi varmistaa, että potilaat sietäävät helposti korkean onnistumisnopeuden ja toistuvan näytteenoton ajan myötä. Snap-jäädytettyjen maksabiopsiat kerätään lähtötilanteessa ja 12 kuukauden ajan analysoitavaksi. Näytteiden ja nestekromatografian ja massaspektrometrian (LC/MS) analyysin valmistus noudattaa Torben Hansenin aiemmin kuvattuja tekniikoita ja Kööpenhaminan yliopiston perustutkimuksen perustutkimusta (CBMR). Yhden kuvan plasmaproteomianalyysissä peptidiseos eluoituu EvoSep One LC -järjestelmä (EVOSEP Biosystems) kytkettynä verkossa Orbitrap Exploris 480 -massaspektrometriin.

Lipidomian analyysit:

Analyysi suoritetaan huipputeknisten olemassa olevien menettelyjen mukaisesti ja muokataan parhaan käytettävissä olevan tekniikan soveltamiseksi.

Plasmanvalmistuksen jälkeen kromatografinen erotus suoritetaan vesien Acquity Beh C18 -pylväällä (1,7 μm x 2,1 mm x 100 mM) käyttämällä kahden standardin liikkuvan vaiheen gradienttia (liikkuva vaihe A sisältää vettä, 0,1% muurahaishappoa ja 10 ml 1M: n ammoniumasetaattia, liikkuva faasia B -koostumuksia, jotka koostuvat samassa muodossa ja ammoniumin ja ammonitriilin (1: 1).

Yhdisteiden massaspektrometrian tunnistaminen on kohdistettu plasman kohdemetaboliittien esivalmistettuun kirjastoon.

Lipidomianalyysien tulosten perusteella valitsemme diagnoosimarkkereiden paneelin, joka kuvaa tehokkaimmin taudin etenemisen nopeutta. Valituille biomarkkereille kehitämme absoluuttisen kvantitatiivisen menetelmän, joka perustuu LC-MS-MS (Triple Quadrupole MS MRM-tilassa) -menetelmään, käyttämällä kaupallisesti saatavissa olevia standardiyhdisteitä, mukaan lukien stabiilit isotooppimerkinnät yhdisteet sisäisinä standardeina. Menetelmä validoidaan standardoitujen protokollien mukaisesti. Menestyneiden tulosten tapauksessa pystymme asettamaan paneelien biomarkkereiden pitoisuusrajat hitaan, keskipitkän ja nopean taudin etenemisen ennustamiseksi, samoin kuin pitkällä aikavälillä, menetelmän valmistautuu siirtymään kliinisiin laboratorioihin ja henkilökohtaiseen lääketieteeseen.

CBMR: ssä tapahtuu proteomiikan ja lipidomian biologinen analyysi ja tiedonhallinta.

Transcriptomomiikka -analyysit ja biostatistiikka suoritetaan aineenvaihduntatutkimuksen keskuksessa.

Irtotavarana RNA-sekvensointi tarjoaa kudoksen laajuisen transkriptiomaiseman ja mahdollistaa transkription syvän tutkimuksen, mutta se ei eroa yksittäisiä soluja. Tunnistaaksemme geenit, joilla on tärkeä rooli AH: n etenemisessä tai korvauksessa, vertaamme tietojoukkoja AH: n irtotavarana RNA -sekvensoinnista jo vakiintuneisiin tietojoukkoihin maksan yksisoluisen RNS -sekvensointiin.

Perustuen geeneihin, joita bulkki-RNA ehdottaa samanaikaisesti näytteissämme ja SCRNaseQ: ssa, voimme tutkia ALC: n keskeisiä transkriptionaalisia säätelijöitä.

Käytämme tätä resurssia maksan biopsioiden irtotavarana olevien transkriptotietojen laskemiseksi laskenta -transkriptitietojen arvioimiseksi maksan kunkin solutyypin suhteellisen runsauden (hepatosyytti, maksan Stellar -solujen, maksan sinimuotoisten epiteelisolujen jne.) Suhteellisen runsauden arvioimiseksi. Sekä etenemisen että korvauksen mahdolliset sairauden säätelijät arvioidaan.

Tutkimuksen biopankki on biopankki, joka perustetaan tutkimukselle. Biopankki sisältää veri, joka on kerätty lähtötilanteessa, kolme kuukautta, 1 ja 3 vuotta, ja maksakudosta ja jakkarasta, joka on kerätty lähtötilanteessa ja yhden vuoden kuluttua. Kussakin ajankohdassa kerätään 15 ml verta ja 3 grammaa jakkaraa. Lähtötilanteessa ja yhden vuoden kuluttua 0,2 grammaa maksakudosta kerätään. Jos osallistujalla on askiitti ja tarvitsee paracenteesiä, vatsan viiltopaikasta otetaan ihonalainen rasvabiopsia.

Tutkimuksen ylijäämämateriaali siirretään biopankkiin tulevaa tutkimusta varten.

Perspektiivit Tutkimus edistää alkoholiin liittyvän edistyneen maksasairauden parempaa karakterisointia ja myötävaikuttaa parantuneeseen tulevaisuuden hoito- ja kuntoutustarjousten organisointiin maksasairauksille. Perusteellinen karakterisointi ja peräkkäinen osallisuus parantaa ymmärrystämme ALC: n esiintyvyydestä, esiintyvyydestä ja vaikutuksista väestössä sekä sen hoitoon osoitettujen terveydenhuollon resurssien hyödyntämisestä.

Syvempi käsitys maksan etenemisen ja remission molekyylimekanismeista tukee yhdessä kliinisen tiedon kanssa kykyämme ennustaa maksakirroosin tuloksia helpottaa henkilökohtaista seurantaa, jonka tavoitteena on tarjota oikea hoito oikealle potilaalle oikeaan aikaan.

Mahdollinen kohorttitutkimus edistää edelleen aikaisemmin tuntemattomien riskitekijöiden tunnistamista, jotka ovat merkittäviä selviytymiselle ja terveydenhuoltopalvelujen käytölle; ja muodostavat siten perustan terveyskäytäntöjen muutosten toteuttamiselle, jotka tarjoavat sekä taloudellisia että lääketieteellisiä etuja. Lisäksi tutkimus voi paljastaa uusia alueita interventiotutkimukselle kliinisesti merkityksellisillä päätepisteillä.