Optimalizovaná remise při cirhóze jater související s alkoholem (Pro-ALC)

V Dánsku je výskyt cirhózy jater zvýšen pětkrát pro muže a ztrojnásobil ženy za posledních čtyřicet let. V roce 2008 bylo diagnostikováno přibližně 15 000 lidí s cirhózou jater. Pacienti, kteří jsou readmitováni do nemocnice, mají vyšší 90denní úmrtnost než ti, kteří se vyhýbají zpětnému přebírání.

Klinický průběh cirhózy jater zahrnuje komplikace ascitu, jaterní encefalopatie, krvácení z variceálního, dysfunkci ledvin a infekce opakovanými přijetími do nemocnice, která výrazně zhoršuje prognózu. Tyto komplikace jsou poháněny vývojem hypertenze portálu v játrech. Tento postup do fáze „dekompenzovaného“ je považován za charakteristický znak v průběhu nemoci, protože dekompenzace je spojena s výrazně zvýšeným rizikem dalších komplikací a smrti.

Několik klinických studií se snažilo najít lékařské opravné prostředky, které zabraňují komplikacím souvisejícím s hypertenzí portálu nebo zpomalují další progresi v cirhóze. Zvyšující se důkazy však naznačují, že aktivní měření léčby základní příčiny onemocnění jater a odstranění toxických látek způsobujících cirhózu může zpomalit progresi onemocnění nebo dokonce vyvolat regresi cirhózy. Tento koncept je popsán jako rekonstrukce jater.

Klinické a biochemické rysy, jako jsou BMI a hladiny albuminu, mohou být spojeny s překompenzací, ale je zde výrazná potřeba klinických studií zkoumajících nové biomarkery se schopností předpovídat a sledovat zlepšení cirhózy jater a bez dopadu alkoholu.

Mezi 75% a 80% pacientů s cirhózou jater v Dánsku má nebo má škodlivé užívání alkoholu. Závislost alkoholu vede k sociální izolaci, riziku nezaměstnanosti a snížení dodržování zdravotní péče (8). Cirhóza souvisí se sníženou kvalitou života a ovlivňuje pacienty a příbuzné emocionální i socioekonomicky.

Onemocnění jater souvisejících s alkoholem (ARLD) má velký dopad na zdraví a životy pacientů a léčba se točí kolem symptomatické úlevy a prevence dalších komplikací. Je neuspokojená potřeba zkoumat možnosti léčby, které nejen zmírňují komplikace, ale také řeší základní cesty onemocnění jater související s alkoholem, také v závažných stádiích cirhózy související s alkoholem (ALC). Předchozí studie zkoumající přehodnocení v ARLD jsou retrospektivní a nejsou navrženy pro přesný účel.

Je známo, že je spojeno se zvýšenou pravděpodobností přehodnocení, jako je BMI, ženská pohlaví a menší portální hypertenze. Další faktory genetické aktivace a molekulárních biomarkerů z proteomu a lipidomu přitahovaly pouze malou pozornost a dopad léčby řidičů dekompenzace, portální hypertenze a užívání alkoholu a jejich dopad na přirozenou příčinu onemocnění nebyl řešen.

Jednotka Gastro, nemocnice Amager-Hvidovre (AHH) má rekordní oblast 550 000 občanů jižně a západně od Kodaně. Jednotka Gastro je největší v Dánsku s App. 90 přijímání denně. 140 lidí je diagnostikována jaterní cirhóza ročně v našem oddělení, buď doporučením z obecné praxe nebo debutem nemoci během přijetí do nemocnice. Od listopadu 2019 do března 2022 bylo hodnoceno 357 pacientů na jaterní cirhózu v jednotce gastro. 20 % z nich zemřelo během dvanácti měsíců. 75% mělo užívání alkoholu jako primární příčinu cirhózy jater.

Nové molekulární technologie a predikce rizika Molekulární patofyziologie ARLD je neúplně pochopena. Charakterizace dynamiky proteomu napříč spektrem ALD by mohla poskytnout nový vhled do mechanismů nemoci jak progresi, tak pro remisi onemocnění. Nedávné pokroky v proteomice založené na MS výrazně rozšířily svůj dopad na biomedicínský a klinický výzkum. Umožňuje identifikaci a kvantifikaci tisíců proteinů, díky čemuž je vhodná pro studium mechanismů onemocnění a identifikaci biomarkerů. Předchozí studie hodnotily proteom v metabolické dysfunkci steatotickém onemocnění jater (MASH) a fibrózu související s alkoholem a proteomické profily vykazovaly silnou asociaci závažnosti onemocnění jater. Studie s po sobě jdoucím sledováním v závažných stádiích ALC stále chybí.

Proteomika založená na MS může na klinice identifikovat biomarkery prediktivní hodnoty, zejména při vyhlídce na remisi onemocnění. Propojení na klinické údaje a výsledky mohou podporovat použití proteomických biomarkerů při predikci a monitorování remise při AH a přehodnocení v ALC.

Několik markerů zánětu a cytokinů se podílí na dekompenzaci řízení a má potenciál předpovídat riziko včasné smrti. Není známo, zda takové markery mohou předpovídat remisi a přehodnocení v ALC a AH. Předchozí studie hodnotily vztahy mezi zánětem a úmrtností, ale chybí se prospektivní studie zkoumající souvislosti mezi biomarkery metabolismu a prognózy, monitorováním a účinnosti OG léčby v ALC.

Transcriptomika a aktivace genů při progresi a remisi onemocnění jater Molekulární a buněčná složitost jaterního mikroprostředí zůstává klíčovou překážkou, která brání vývoji potenciálních ošetření. Předchozí studie sekvenování RNA jsou malé a s následkem.

S pokrokem v genových čipech a vysoce výkonném sekvenování bylo stanoveno několik prognostických genových podpisů, které předpovídají celkové přežití v cirhóze jater.

Nedávné studie sekvenování RNA s jednou buňkou RNA a sekvenování hromadného RNA ukázaly, že specifické mezenchymální, endoteliální a monocytové linie jsou obohaceny v cirrhotických játrech.

Celá tkáňová (hromadná) RNA sekvenování poskytuje průměrný odečet obsahu RNA ve vzorku, který představuje smíšené RNA signály z různých buněk přítomných v tkáni, a je tedy významně ovlivněn prevalencí typu buněk. Ve srovnání se sekvenováním RNA s jednou buňkou (ScRNA-SEQ) nelze sekvenování hromadného RNA použít ke studiu vzácných buněčných populací nebo specifických subpopulací patogenních buněk, ale poskytuje vhled do vzorců transkripce patogenních genů a buněčné dysfunkce, zejména pokud je spojeno s klinickým fenotypem a při porovnání s Scran-seq libraárou jaterní tkáně.

Žádné studie dříve nesrovnávaly změny v transkriptu po odstranění toxických látek způsobujících poškození jater.

V ALC existuje neuspokojená potřeba prozkoumat možnosti léčby, které se zabývají základními cestami ARLD, také v závažných stádiích cirhózy. Indukce překompenzace prodlouží přežití i „přijetí bez přijetí“ každodenního života pacientů s ALC.

Cíle Celkovým cílem této studie je prozkoumat molekulární profil a dráhy u osob s ALD na podporu personalizovaného monitorování a sledování v jaterní cirhóze.

Hypotéza Prognóza ALC se liší v závislosti na nepřetržitém příjmu alkoholu. Alkohol může ovlivnit přežití a přehodnocení v ALC. Alkohol může ovlivnit molekulární profil každé osoby s ALC, a tedy ovlivnit hospitalizační přijetí, readmise a progresi cirhózy jater.

Lepší znalost molekulárního profilu osob s ALC bude v kombinaci s klinickými rysy zdravotního a fyzického výkonu pacienta naplánovat a spravovat akce personalizované léčby, monitorování a sledování lidí s ALC.

Hlubší vhled do molekulárních mechanismů progrese jater a remise cirhózy bude v kombinaci s klinickými údaji-podporuje naši schopnost předpovídat výsledky v cirhóze, usnadnit personalizované monitorování a sledování a podporovat správné a včasné ošetření pro správné pacienta. Zjištění mohou také podpořit vývoj nových cílů molekulárních léčiv pro léčbu a prevenci cirhózy v budoucnosti.

Metody Studie je kohorta incidence, ve které budou pacienti sledováni z diagnózy k smrti nebo stažení z kohorty. Budeme se snažit zahrnout pacienty postupně do tří měsíců od diagnózy. Výsledky budou vykazovány po pokynech strobo.

Studijní subjekty Všichni osoby s počátečním doporučením k vyšetřování a diagnóze cirhózy jater související s alkoholem v jednotky Gastro a všichni pacienti s debutem cirhózy jater související s alkoholem během přijetí bez ohledu na důvod přijetí jsou pro zařazení.

Tato studie neohrožuje diagnostiku ani léčbu cirhózy nebo komorbidit a je možné zahrnout do intervenčních studií během budoucího sledování.

Nábor všem pacientům s debutem cirhózy jater podezřelých z toho, že souvisí s užíváním alkoholu, a bez ohledu na čas a okolnosti diagnostiky, komorbidit a závažnosti onemocnění bude do kohorty nabídnut. Všichni účastníci budou zapojeni buď lékařem nebo zdravotní sestrou poskytující standard péče. Všichni účastníci budou informováni písemně i orálně vyšetřovateli studií a projektovými sestrami.

Intervence ukončení alkoholu a standard péče Všichni pacienti s ALC ošetřeni v jednotce Gastro, AHH, a proto budou všem účastníkům této studie nabídnut standard léčby péče. To zahrnuje vyšetřování se standardní biochemií, ultrazvukem, fibroscan, CT-skenovou a endoskopií, jakož i výživové doplňky, lékařské ošetření cirhózy a komplikací a komorbidity.

Intervence ukončení alkoholu bude nabízen jako standard léčby péče všem pacientům s ALC. Intervence zahrnuje lékařskou léčbu abstinenčních symptomů a touhy a podporu při doporučení na obecní nabídky léčby alkoholu. Kromě toho, s cílem usnadnit zastavení alkoholu a podporovat další léčbu alkoholu v primárním sektoru, budou pacienti nabízeni motivační pohovory (MI) v rámci jejich léčby.

Pacienti a možní pečovatelé budou pozváni na tři MI sezení prováděné specializovanými sestrami na jaterní klinice během prvních tří měsíců po diagnóze.

Údaje z časopisů pro pacienta v této studii získáme informace z deníku pacientů po poskytnutí písemného souhlasu.

Údaje získané z časopisů pacienta před získání souhlasu jsou omezeny na diagnostiku ALC, čas diagnózy a příčinu přijetí nebo doporučení nemocnice, která vedla k diagnostice ARLD. Biometrické údaje získané před písemným souhlasem s účastí nebudou pro studii získány. Tato data mohou být shromažďována z období nuly do třiceti dnů před zařazením a budou předány vyšetřovatelům klinického lékaře a studujte personál.

Údaje a osobní údaje jsou registrovány a monitorovány po současné legislativě, zákonu o ochraně údajů a jak je uvedeno v obecném nařízení o ochraně údajů.

Genetická analýza DNA bude extrahována z krevních buněk, plné krve a stolice od účastníků. DNA bude uložena při -80 ° C, až do další analýzy. Genotypizace bude prováděna pomocí GWAS-CHIP (tj. cílené genomické mapování) pomocí Illumina exomechip obohaceného o varianty měnící se protein, velké účinky. Ultra vzácné varianty (<1/1000) nebudou zachyceny. Výsledky genetických analýz kombinovaných s klinickými údaji mohou identifikovat geny spojené s úmrtností, přežití a závažností onemocnění v kontextu „profilování rizika“. Genomická analýza zahrnuje běžné varianty a profilování skóre polygenních rizik na běžných variantách. Sekvenování celého genomu nebude provedeno.

Pro srovnávací analýzy souhry mezi střevní dysfunkcí a cirhózou jater budou použity genetické analýzy na bakteriální DNA ze stolice.

Na jaterní tkáni a krvi budou provedeny transkriptomika, metabolomika a proteomika pro identifikaci nových potenciálních markerů zapojených do vývoje, progrese a remise ALC, transkriptomiky, metabolomiky a proteomiky. Analýzy vyhodnotí hladiny exprese a buněčnou lokalizaci možných biomarkerů včetně receptoru a ligandů, jakož i po proudu signalizačních molekul. Aplikované techniky jsou popsány níže. Spolu s klinickými údaji zlepší výsledky porozumění možným faktorům pro remisi a progresi ARLD.

Pole objevu OMICS OMICS Tenchnologie se rychle vyvíjí a metody mohou podléhat adaptacím pro zajištění kvality, relevance a nejlepších cen pro analýzu.

Analýza proteomické analýzy vzorků plazmy zajišťuje vysokou míru úspěšnosti a opakované vzorkování v průběhu času je pacienty snadno tolerováno. Snap zmrazená biopsie jater budou shromažďována na začátku a po 12 měsících pro analýzu. Příprava vzorků a kapalinové chromatografie a analýzy hmotnostní spektrometrie (LC/MS) bude následovat technologie dříve popsané z Torbena Hansena a Centra pro základní metabolický výzkum (CBMR), Kodaňské univerzity. V analýze proteomu s jedním střelem je peptidová směs eluovaná evosep One LC System (Evosep Biosystems) spojené online s orbitrap Exploris 480 hmotnostním spektrometrem.

Lipidomické analýzy:

Analýza se provádí podle nejmodernějších existujících postupů a upravena tak, aby byla aplikována nejlepší dostupná technologie.

Po přípravě plazmy se provádí chromatografická separace na sloupci vody BEH CH18 (1,7 μm x 2,1 mm x 100 mm) s použitím gradientu dvou standardních mobilních fází (mobilní fáze A obsahuje vodu, 0,1% kyselinu mravenčí a 10 ml 1M octanu amonium a ammonium a ammonium a ammonium a ammonium a ammonium a ammonium se skládá.

Identifikace sloučenin hmotnostní spektrometrie je zacílena na základě předem vyrobené knihovny cílových metabolitů v plazmě.

Na základě výsledků z lipidomických analýz vybereme panel diagnostických markerů, které budou nejúčinněji popisovat rychlost progrese onemocnění. Pro vybrané biomarkery vyvineme absolutní kvantitativní metodu založenou na metodologii LC-MS-MS (Triple Quadrupol MS v režimu MRM) pomocí komerčně dostupných standardních sloučenin, včetně stabilních izotopů označených sloučenin jako vnitřní standardy. Metoda bude ověřena podle standardizovaných protokolů. V případě úspěšných výsledků budeme moci stanovit koncentrační limity panelových biomarkerů pro predikci pomalé, střední a rychlé progrese onemocnění, a také v dlouhodobém horizontu, aby metoda byla připravena k přenosu do klinických laboratoří a personalizované medicíny.

V CBMR se bude konat biologická analýza a správa dat proteomiky a lipidomiky.

Analýzy transkriptomomiky a biostatistiky budou provedeny v centru pro základní metabolický výzkum.

Sekvenování hromadného RNA poskytuje transkripční prostředí na celé tkáně a umožňuje hluboké zkoumání transkriptu, ale nerozlišuje mezi jednotlivými buňkami. Abychom identifikovali geny, které hrají důležitou roli v progresi nebo rekontenzi a AH, porovnáme datové sady ze sekvenování objemové RNA v AH již zavedené datové sady ze sekvenování RN s jednou buňkou.

Na základě genů, které jsou v našich vzorcích a ScRNASEQ současně navrženy hromadnou RNA, můžeme prozkoumat klíčové transkripční regulátory v ALC.

Tento zdroj využijeme k výpočtu dekonvoluce objemových transkriptomových dat jaterních biopsií pro odhad relativní hojnosti každého typu buněk jater (hepatocyt, jaterní hvězdicové buňky, jaterní sinusoidální epitelové buňky atd.)). Budou hodnoceny možné regulátory nemoci jak progresi, tak rekonstrukce.

Pro studii bude zřízena výzkumná biobanka Biobank. Biobanka bude obsahovat krev odebranou na začátku, tři měsíce, 1 a 3 roky a jaterní tkáň a stolice shromážděná na začátku a po 1 roce. V každém časovém bodě se shromažďuje 15 ml krve a 3 gram stolice. Na začátku a po 1 roce bude odebráno 0,2 gramu jaterní tkáně. Pokud má účastník ascites a potřebuje paracentézu, bude z místa řezu na břiše odebrána subkutánní biopsie tuku.

Přebytečný materiál ze studie bude přenesen na biobank pro budoucí výzkum.

Perspektivy Studie přispěje k lepší charakterizaci pokročilého onemocnění jater související s alkoholem a přispěje ke zlepšené budoucí organizaci léčby a rehabilitace nabídek pacientů s onemocněním jater. Důkladná charakterizace a po sobě jdoucí začlenění zvýší naše porozumění výskytu, prevalenci a dopadu ALC na populaci, jakož i využití zdrojů zdravotní péče přidělených na jeho léčbu.

Hlubší vhled do molekulárních mechanismů progrese a remise jater bude v kombinaci s klinickými údaji podpořit naši schopnost předpovídat výsledky v cirhóze, usnadňuje personalizované monitorování zaměřené na zajištění správného léčby správnému pacientovi ve správný čas.

Prospektivní kohortová studie dále přispěje k identifikaci dříve neidentifikovaných rizikových faktorů významných pro přežití a využití zdravotnických služeb; a tím tvoří základ provádění změn ve zdravotnických postupech, které nabízejí ekonomické i zdravotní výhody. Studie může navíc odhalit nové oblasti pro intervenční výzkum s klinicky relevantními koncovými body.