Оптимизированная ремиссия при циррозе печени, связанной с алкоголем (Pro-ALC)

В Дании частота цирроза печени увеличивается в пять раз для мужчин и утроилась для женщин за последние сорок лет. В 2008 году около 15 000 человек были диагностированы с циррозом печени. Пациенты, которые в больнице сдаются в больницу, имеют более высокую 90-дневную смертность, чем те, кто избегает реадмиссии.

Клинический курс цирроза печени включает осложнения асцита, печеночную энцефалопатию, кровотечение в вариковое кровотечение, дисфункцию почек и инфекции с неоднократным поступлением в больницу, которая заметно ухудшает прогноз. Эти осложнения обусловлены развитием портальной гипертонии в печени. Этот прогрессирование на «декомпенсированную» стадию считается отличительной чертой в течение болезни, поскольку декомпенсация связана с заметно повышенным риском дальнейших осложнений и смерти.

Несколько клинических исследований направлены на то, чтобы найти медицинские средства, которые предотвращают осложнения, связанные с портальной гипертонией, или замедляют дальнейшее прогрессирование при циррозе. Тем не менее, все больше свидетельств указывают на то, что активные измерения лечения основной причины заболевания печени и удаления токсичных агентов, вызывающих цирроз, могут замедлить прогрессирование заболевания или даже вызвать регрессию цирроза. Эта концепция описывается как переполнение печени.

Клинические и биохимические особенности, такие как ИМТ и уровни альбумина, могут быть связаны с компенсацией, но существует заметная потребность в клинических исследованиях, исследующих новые биомаркеры с способностью прогнозировать и контролировать улучшение в циррозе печени, с и без воздействия алкоголя.

От 75% до 80% пациентов с циррозом печени в Дании имели или имели вредное употребление алкоголя. Зависимость алкоголя приводит к социальной изоляции, риску безработицы и снижению соответствия в области здравоохранения (8). Цирроз связан со снижением качества жизни и поражает пациентов и родственников как эмоциональных, так и социально -экономически.

Болезнь печени, связанные с алкоголем (ARLD), оказывает большое влияние на здоровье и жизнь пациентов, а лечение вращается вокруг симптоматического облегчения и профилактики дальнейших осложнений. Существует неудовлетворенная необходимость в изучении вариантов лечения, которые не только снимают осложнения, но также рассматривают основные пути заболевания печени, связанного с алкоголем, а также на тяжелых стадиях цирроза, связанного с алкоголем (ALC). Предыдущие исследования, исследующие компенсацию в ARLD, являются ретроспективными и не предназначены для точной цели.

Известно, что такие факторы, как ИМТ, пол и второстепенный портал, связаны с повышенной вероятностью компенсации. Дополнительные факторы генетической активации и молекулярных биомаркеров из протеома и липида привлекла лишь незначительное внимание, и влияние лечения драйверов декомпенсации, портальной гипертонии и употребления алкоголя, а также их влияние на естественную причину заболевания не было рассмотрено.

Гастро-подразделение, больница Amager-Hvidovre (AHH) имеет рекордную площадь из 550 000 граждан на юге и западе Копенгагена. Гастро -подразделение является крупнейшим в Дании, с приложением. 90 поступлений ежедневно. 140 человек диагностируют цирроз печени ежегодно в нашем отделе, либо путем направления от общей практики, либо в результате дебюта заболевания во время госпитализации. С ноября 2019 года по март 2022 года 357 пациентов были оценены по циррозу печени в гастро. 20 % из них умерли в течение двенадцати месяцев. 75% имели употребление алкоголя в качестве основной причины цирроза печени.

Новые молекулярные технологии и прогноз риска Молекулярная патофизиология ARLD не полностью понята. Характеристика динамики протеома в спектре ALD может дать новое понимание механизмов заболевания как прогрессирования, так и ремиссии заболевания. Недавние достижения в протеомике на основе MS значительно расширили его влияние на биомедицинские и клинические исследования. Это обеспечивает идентификацию и количественную оценку тысяч белков, что делает его подходящим для изучения механизмов заболевания и идентификации биомаркеров. Предыдущие исследования оценивали протеом при метаболической дисфункции, связанной с стеатотическим заболеванием печени (MASH), и фиброзе, связанного с алкоголем, и протеомные профили показали сильную связь с тяжестью заболеваний печени. Исследования с последовательным наблюдением на тяжелых стадиях ALC все еще отсутствуют.

Протеомика на основе MS может идентифицировать биомаркеры прогнозной ценности в клинике, особенно в перспективе ремиссии заболевания. Связь с клиническими данными и результатами может поддерживать использование протеомных биомаркеров в прогнозировании и мониторинге ремиссии в AH и компенсации в ALC.

Несколько маркеров воспаления и цитокинов участвуют в управлении декомпенсацией и могут предсказать риск ранней смерти. Неизвестно, могут ли такие маркеры предсказать ремиссию и разбивку в ALC и AH. Предыдущие исследования оценивали отношения между воспалением и смертностью, но проспективные исследования, изучающие связи между биомаркерами метаболизма и прогнозом, мониторинг и эффективность лечения OG в ALC отсутствуют.

Транскриптомика и активация генов при прогрессировании и ремиссии заболевания печени. Молекулярная и клеточная сложность микроокружения печени остается ключевым препятствием, препятствующим развитию потенциальных методов лечения. Предыдущие исследования в секвенировании РНК являются небольшими и без последующего наблюдения.

С достижениями в области чипов генов и высокопроизводительного секвенирования было установлено несколько прогностических генных сигнатур для прогнозирования общей выживаемости при циррозе печени.

Недавние исследования секвенирования РНК одноклеточной РНК и объемного секвенирования РНК показали, что специфические мезенхимальные, эндотелиальные и моноциты линии обогащаются в цирротических печени.

Секвенирование РНК цельной ткани (объемная) обеспечивает среднее значение содержания РНК в образце, которое представляет собой смешанные РНК -сигналы из различных клеток, присутствующих в ткани и, таким образом, значительно зависит от распространенности типа клеток. По сравнению с секвенированием РНК одноклеточной РНК (SCRNA-Seq), секвенирование объемной РНК не может использоваться для изучения популяций редких клеток или специфических субпопуляций патогенных клеток, но оно дает представление о паттернах транскрипции патогенных генов и клеточной дисфункции, особенно при связи с клиническим фенотипом и по сравнению с библиотекой SCRNA-SEQ библиотеки ткани печени.

Ни в одном из исследований ранее сравнивались изменения в транскриптоме после удаления токсичных агентов, вызывающих повреждение печени.

В ALC существует неудовлетворенная необходимость для изучения вариантов лечения, которые касаются основных путей ARLD, а также на тяжелых стадиях цирроза. Индукция разкомпений продлит как выживаемость, так и «свободную от поступления» повседневную жизнь пациентов с ALC.

Цели Общей целью настоящего исследования является изучение молекулярного профиля и путей у лиц с ALD для поддержки персонализированного мониторинга и последующего наблюдения при циррозе печени.

Гипотеза Прогноз ALC варьируется в зависимости от непрерывного или прекращенного потребления алкоголя. Алкоголь может влиять на выживание и компенсацию в ALC. Алкоголь может влиять на молекулярный профиль каждого человека с ALC и, следовательно, воздействовать на госпитализацию, реадмиссии и прогрессирование цирроза печени.

Лучшее знание молекулярного профиля лиц с ALC в сочетании с клиническими особенностями здоровья и физической работы пациента позволит нам планировать и управлять действиями персонализированного лечения, мониторинга и последующего наблюдения людей с ALC.

Более глубокое понимание молекулярных механизмов прогрессирования вождения печени и ремиссии цирроза-в сочетании с клиническими данными-поддерживают нашу способность прогнозировать результаты при циррозе, облегчить персонализированный мониторинг и наблюдение и поддержать правильное и своевременное лечение для правильного пациента. Результаты могут также поддерживать развитие новых целевых молекулярных лекарств для лечения и профилактики цирроза в будущем.

Методы. Исследование - это когорта заболеваемости, в которой пациенты будут следить от диагностики до смерти или отмены от когорты. Мы будем стремиться включить пациентов в течение трех месяцев с момента диагноза. Результаты будут сообщены после руководящих принципов строба.

Исследование субъектов всех людей с первоначальным направлением к исследованию и диагностике цирроза печени, связанного с алкоголем в гастро, и все пациенты с дебютом цирроза печени, связанной с алкоголем во время поступления, независимо от причины приема, имеют право на включение.

Это исследование не ставит под угрозу диагностику или лечение цирроза или сопутствующих заболеваний, а также возможно включение в интервенционные исследования во время проспективного наблюдения.

Рекрутирование всех пациентов с дебютом цирроза печени, подозреваемых в употреблении алкоголя, и независимо от времени и обстоятельств диагноза, сопутствующих заболеваний и тяжести заболевания будет включено в когорту. Все участники будут заниматься врачом или медсестрой, обеспечивая стандарт ухода. Все участники будут проинформированы в письменной форме, а также перорально исследователями и медсестрами проекта.

Вмешательство по прекращению алкоголя и стандарт медицинской помощи всем пациентам с ALC, получавшими лечение в гастро, ааа, и, следовательно, всем участникам этого исследования будут предложены стандарт лечения ухода. Это включает в себя исследования со стандартной биохимией, ультразвуковым, фибросканом, компьютерной томографией и эндоскопией, а также питательными добавками, лечением цирроза и осложнений, а также сопутствующих заболеваний.

Вмешательство по прекращению алкоголя будет предложено в качестве стандарта лечения ухода для всех пациентов с ALC. Вмешательство включает в себя медицинское лечение симптомов отмены и тягу, а также поддержку направления к муниципальным предложениям лечения алкоголя. Кроме того, с целью облегчения прекращения алкоголя и поддержки дальнейшего лечения алкоголя в первичном секторе пациентам будет предлагаться мотивационное интервьюирование (МИ) в рамках своего лечения.

Пациенты и возможные лиц, осуществляющие уход, будут приглашены на три сеанса MI, проведенные специализированными медсестрами в клинике печени в течение первых трех месяцев после постановки диагноза.

Данные из журналов пациентов В этом исследовании Мы получим информацию из журнала пациентов после предоставления письменного согласия.

Данные, полученные в журналах пациентов до получения согласия, ограничены диагнозом ALC, временем диагноза и причиной госпитализации или направления, что привело к диагностике ARLD. Биометрические данные, полученные до письменного согласия на участие, не будут извлечены для исследования. Эти данные могут быть собраны с периода от нуля до тридцати дней до включения и будут переданы следователям -клиницистам, а также сотрудникам исследования.

Данные и личная информация зарегистрированы и контролируются после текущего законодательства, Закона о защите данных и, как указано в общем регулировании защиты данных.

Генетический анализ ДНК будет экстрагироваться из клеток крови, цельной крови и стула от участников. ДНК будет храниться при -80C, до дальнейшего анализа. Генотипирование будет выполняться с помощью GWAS-Chip (т.е. целенаправленное картирование генома) с использованием ExeMeChip, обогащенного для изменяющих белок, широкоэффективных вариантов. Ультра-редкие варианты (<1/1000) не будут захвачены. Результаты генетического анализа в сочетании с клиническими данными могут идентифицировать гены, связанные со смертностью, выживаемостью и тяжестью заболевания в контексте «профилирования риска». Геномный анализ включает в себя общие варианты и профилирование баллов полигенного риска на общих вариантах. Секвенирование всего генома не будет выполнено.

Генетический анализ бактериальной ДНК от стула будет использоваться для сравнительного анализа взаимодействия между кишечной дисфункцией и циррозом печени.

Транскриптомика, метаболомика и протеомика для идентификации новых потенциальных маркеров, участвующих в развитии, прогрессировании и ремиссии ALC, транскриптомики, метаболомики и протеомике, будут выполняться на тканях и крови печени. Анализы будут оценивать уровни экспрессии и клеточную локализацию возможных биомаркеров, включая рецепторные и лиганды, а также нижестоящие сигнальные молекулы. Прикладные методы описаны ниже. Вместе с клиническими данными результаты улучшат понимание возможных драйверов для ремиссии и прогрессирования ARLD.

Сфера обнаружения Tenchnologies быстро развивается, и методы могут подвергаться адаптации для обеспечения качества, актуальности и лучших призов для анализа.

Протеомический анализ анализа образцов плазмы обеспечивает высокую скорость успеха, и пациенты легко переносят высокую скорость успеха, и повторная выборка с течением времени легко переносится. Биопсия печени с зановозами будет собираться на исходном уровне и через 12 месяцев для анализа. Приготовление образцов и жидкостной хроматографии и масс -спектрометрии (LC/MS) будет следовать технологиям, ранее описанным в Торбене Хансене и Центре базовых метаболических исследований (CBMR), Университете Копенгагена. В анализе протеома с одним выстрелом пептидная смесь представляет собой элюированную систему Evosep One LC (Evosep Biosystems), соединенную онлайн с масс-спектрометром Orbitrap Exploris 480.

Анализ липидомики:

Анализ выполняется в соответствии с современными существующими процедурами и модифицируется для применения наилучшей доступной технологии.

После приготовления плазмы хроматографическое разделение проводится на колонке «Особость воды» (1,7 мкм x 2,1 мм x 100 мм), используя градиент двух стандартных подвижных фаз (подвижная фаза А содержит воду, 0,1% муравьиновой кислоты и 10 мл ацетата аммония 1 мл, а -а -ацетонийный ацетонийный и ацетонический аценитрий (1: 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1).

Масс-спектрометрическая идентификация соединений нацелена на основе готовой библиотеки целевых метаболитов в плазме.

Основываясь на результатах анализа липидомики, мы выберем панель диагностических маркеров, которая наиболее эффективно опишем скорость прогрессирования заболевания. Для выбранных биомаркеров мы разработаем абсолютный количественный метод, основанный на методологии LC-MS-MS (тройной квадрупольной MS в режиме MRM), используя коммерчески доступные стандартные соединения, включая стабильные изотопные соединения в качестве внутренних стандартов. Метод будет подтвержден в соответствии со стандартизированными протоколами. В случае успешных результатов мы сможем установить пределы концентрации панельных биомаркеров для прогнозирования медленного, среднего и быстрого прогрессирования заболевания, а также в долгосрочной перспективе сделают метод готовым к передаче в клинические лаборатории и персонализированную медицину.

Биологический анализ и управление данными протеомики и липидомики будут проходить в CBMR.

Анализ транскриптомамики и биостатистика будет проводиться в Центре базовых метаболических исследований.

Секвенирование объемного РНК обеспечивает ландшафт транскрипции в тканях и позволяет глубоко исследовать транскриптом, но он не различает отдельные клетки. Чтобы идентифицировать гены, которые играют важную роль в прогрессировании или рекомпенсации AH, мы будем сравнивать наборы данных из секвенирования объемной РНК в AH с уже установленными наборами данных из секвенирования одноклеточных RNS печени.

Основываясь на генах, которые одновременно предложены объемной РНК в наших образцах и SCRNASEQ, мы можем исследовать ключевые регуляторы транскрипции в ALC.

Мы используем этот ресурс для вычисления в вычислительном отношении деконволютовать данные о объемном транскриптоме биопсии печени для оценки относительной численности каждого типа клеток печени (гепатоциты, печеночные звездчатые клетки, синусоидальные эпителии печени, и т. Д.) У каждого пациента. Возможные регуляторы заболеваний как прогрессирования, так и откомпенсации будут оценены.

Исследование биобанка будет создана для исследования. Биобанк будет содержать кровь, собранную на исходном уровне, три месяца, 1 и 3 года, а также ткань печени и стул, собранные в начале исследования и через 1 год. В каждый момент времени собирается 15 мл крови и 3 грамма стула. На исходном уровне и через 1 год 0,2 грамма печени будет собрана. Если участник имеет асцит и нуждается в парацентезе, биопсия подкожного жира будет взята из места разреза на животе.

Избыточный материал из исследования будет перенесен в биобанк для будущих исследований.

Перспективы исследования будут способствовать лучшей характеристике развития заболевания печени, связанной с алкоголем, и способствуют улучшению будущей организации предложений лечения и реабилитации для пациентов с заболеванием печени. Тщательная характеристика и последовательное включение повысят наше понимание заболеваемости, распространенности и влияния ALC в населении, а также использование ресурсов здравоохранения, выделяемых для его лечения.

Более глубокое понимание молекулярных механизмов прогрессирования и ремиссии печени в сочетании с клиническими данными поддержит нашу способность прогнозировать результаты при циррозе, способствуя персонализированному мониторингу, направленному на обеспечение правильного лечения для правильного пациента в нужное время.

Проспективное когортное исследование еще больше способствует выявлению ранее неопознанных факторов риска, значимых для выживаемости и использования медицинских услуг; и тем самым составляют основу внедрения изменений в практике здравоохранения, которые предлагают как экономические, так и медицинские выгоды. Кроме того, исследование может раскрыть новые области для интервенционных исследований с клинически значимыми конечными точками.