Optimierte Remission bei alkoholbedingter Leberzirrhose (Pro-ALC)

In Dänemark ist die Inzidenz von Leberzirrhose für Männer das Fünffache und in den letzten vierzig Jahren für Frauen verdreifacht. Im Jahr 2008 wurde bei ungefähr 15.000 Menschen Leberzirrhose diagnostiziert. Patienten, die im Krankenhaus wieder aufgenommen werden, haben eine höhere 90-Tage-Sterblichkeit als diejenigen, die eine Rückübernahme vermeiden.

Der klinische Verlauf der Leberzirrhose umfasst Komplikationen von Aszites, hepatische Enzephalopathie, Varizenblutungen, Nierenfunktionsstörungen und Infektionen mit wiederholten Aufnahmen in ein Krankenhaus, die die Prognose deutlich verschlimmern. Diese Komplikationen werden durch die Entwicklung einer portalen Hypertonie in der Leber angetrieben. Dieser Fortschreiten in das "dekompensierte" Stadium wird im Krankheitsverlauf als Kennzeichen angesehen, da die Dekompensation mit einem deutlich erhöhten Risiko für weitere Komplikationen und Todesfälle verbunden ist.

In mehreren klinischen Studien wurde versucht, medizinische Mittel zu finden, die Komplikationen im Zusammenhang mit portaler Hypertonie verhindern oder ein weiteres Fortschreiten der Zirrhose verlangsamen. Zunehmende Beweise deuten jedoch darauf hin, dass aktive Messungen der Behandlung der zugrunde liegenden Ursache für Lebererkrankungen und die Entfernung der toxischen Wirkstoffe, die Zirrhose verursachen, das Fortschreiten der Erkrankung verlangsamen oder sogar die Regression der Zirrhose induzieren können. Dieses Konzept wird als hepatische Verbesserung beschrieben.

Klinische und biochemische Merkmale wie BMI- und Albuminspiegel können mit der Entschädigung in Verbindung gebracht werden, aber es besteht ein deutlicher Bedarf an klinischen Studien, die neuartige Biomarker untersuchen, um die Verbesserung der Leberzirrhose und ohne den Einfluss von Alkohol vorherzusagen und zu überwachen.

Zwischen 75% und 80% der Patienten mit Leberzirrhose in Dänemark haben oder haben sie einen schädlichen Alkoholkonsum. Die Abhängigkeit von Alkohol führt zu sozialer Isolation, Arbeitslosenrisiko und einer verminderten Einhaltung der Gesundheitsversorgung (8). Zirrhose hängt mit einer verminderten Lebensqualität zusammen und betrifft Patienten und Verwandte sowohl emotional als auch sozioökonomisch.

Alkoholbezogene Lebererkrankungen (ARLD) hat einen großen Einfluss auf die Gesundheit und das Leben der Patienten, und die Behandlung dreht sich um symptomatische Linderung und Vorbeugung weiterer Komplikationen. Es besteht die Notwendigkeit, Behandlungsoptionen zu untersuchen, die nicht nur Komplikationen lindert, sondern auch die zugrunde liegenden Wege von alkoholbedingten Lebererkrankungen in schweren Stadien von Alkoholzirrhose (ALC) behandeln. Frühere Studien zur Untersuchung der Nachverdauerung in ARLD sind retrospektiv und nicht für den genauen Zweck ausgelegt.

Faktoren wie BMI, weibliches Geschlecht und geringfügige Portalhypertonie sind mit einer erhöhten Wahrscheinlichkeit einer Entschädigung verbunden. Zusätzliche Faktoren der genetischen Aktivierung und der molekularen Biomarker aus Proteom und Lipidom haben nur geringfügige Aufmerksamkeit erregt, und die Auswirkungen der Behandlung der Treiber der Dekompensation, der portalen Hypertonie und des Alkoholkonsums und deren Auswirkungen auf die natürliche Ursache der Krankheit wurden nicht angesprochen.

Die Gastro-Einheit Amager-Hvidovre Hospital (AHH) verfügt über einen Rekordbereich von 550.000 Bürgern südlich und westlich von Kopenhagen. Die Gastro -Einheit ist die größte in Dänemark mit App. 90 Zulassungen täglich. In 140 Menschen wird in unserer Abteilung jährlich Leberzirrhose diagnostiziert, entweder durch Überweisung aus der Allgemeinmedizin oder durch Debüt der Krankheit während des Krankenhausauftrags. Von November 2019 bis März 2022 wurden 357 Patienten auf Leberzirrhose in der Gastro -Einheit bewertet. 20 % davon starben innerhalb von zwölf Monaten. 75% hatten Alkoholkonsum als Hauptursache für Leberzirrhose.

Neuartige molekulare Technologien und Risikovorhersage Die molekulare Pathophysiologie von ARLD ist unvollständig verstanden. Die Charakterisierung der Proteomdynamik im gesamten Spektrum von ALD könnte neue Erkenntnisse in Krankheitsmechanismen sowohl für das Fortschreiten als auch für die Remission von Krankheiten liefern. Jüngste Fortschritte in der MS-basierten Proteomik haben ihre Auswirkungen auf die biomedizinische und klinische Forschung erheblich erweitert. Es ermöglicht die Identifizierung und Quantifizierung von Tausenden von Proteinen, wodurch es für die Untersuchung von Krankheitsmechanismen und die Identifizierung von Biomarkern geeignet ist. Frühere Studien haben das Proteom bei metabolischen Dysfunktions-assoziierten Steatotikernerkrankungen (MASH) und alkoholbedingter Fibrose bewertet, und proteomische Profile zeigten einen starken Assoziation zur Schwere der Lebererkrankung. Studien mit aufeinanderfolgender Follow-up in den schweren Stadien von ALC fehlen noch.

MS-basierte Proteomik kann Biomarker für den Prädiktivwert in der Klinik insbesondere in der Aussicht auf eine Erkrankung von Krankheiten identifizieren. Die Verknüpfung mit klinischen Daten und Ergebnissen kann die Verwendung von proteomischen Biomarkern bei der Vorhersage und Überwachung der Remission bei AH und Recompensation in ALC unterstützen.

Mehrere Marker für Entzündung und Zytokine sind an der Antrieb der Dekompensation beteiligt und haben das Potenzial, das Risiko eines frühen Todes vorherzusagen. Es ist nicht bekannt, ob solche Marker die Remission und Rekompensation in ALC und AH vorhersagen können. Frühere Studien haben die Beziehungen zwischen Entzündung und Mortalität bewertet, aber prospektive Studien, die die Assoziationen zwischen Biomarkern des Stoffwechsels und der Prognose untersuchen, überwachen und die Wirksamkeit von OG -Behandlung in ALC.

Transkriptomik und Genaktivierung bei der Progression und Remission von Lebererkrankungen Die molekulare und zelluläre Komplexität der hepatischen Mikroumgebung bleibt ein wesentliches Hindernis, das die Entwicklung potenzieller Behandlungen behindert. Frühere Studien zur RNA-Sequenzierung sind klein und ohne Nachuntersuchung.

Mit Fortschritten in den Genchips und der Hochdurchsatzsequenzierung wurden mehrere prognostische Gensignaturen festgestellt, um das Gesamtüberleben bei der Leberzirrhose vorherzusagen.

Neuere Einzelzell -RNA -Sequenzierung und Bulk -RNA -Sequenzierungsstudien haben gezeigt, dass spezifische mesenchymale, Endothel- und Monozytenlinien in Zirrhose -Lebern angereichert sind.

Die RNA -Sequenzierung des gesamten Gewebes (Bulk) liefert eine durchschnittliche Anzeige des RNA -Gehalts einer Probe, die gemischte RNA -Signale aus den verschiedenen im Gewebe vorhandenen Zellen darstellt und somit durch die Zelltypprävalenz signifikant beeinflusst wird. Im Vergleich zur Einzelzell-RNA-Sequenzierung (SCRNA-seq) kann die Bulk-RNA-Sequenzierung nicht zur Untersuchung seltener Zellpopulationen oder spezifischen pathogenen Zellsubpopulationen verwendet werden, sondern liefert Einblicke in Muster der pathogenen Gentranskription und der zellulären Dysfunktion, insbesondere wenn sie mit dem klinischen Phänotyp verbunden sind.

Keine Studien haben zuvor Veränderungen im Transkriptom nach Entfernung der toxischen Mittel verglichen, die Leberschäden verursachen.

In ALC besteht die Bedürfnis, Behandlungsoptionen zu untersuchen, die sich mit den zugrunde liegenden Wegen der ARLD befassen, ebenfalls in schweren Stadien der Zirrhose. Die Induktion der Entschädigung verlängert sowohl das Überleben als auch das „Zulassungsfreie“ tägliche Leben von Patienten mit ALC.

Ziele Das Gesamtziel der vorliegenden Studie ist es, das molekulare Profil und die Wege bei Personen mit ALD zu untersuchen, um die personalisierte Überwachung und Follow-up bei Leberzirrhose zu unterstützen.

Hypothese Die Prognose von ALC variiert je nach kontinuierlicher oder eingestellter Alkoholkonsum. Alkohol kann das Überleben und die Entschädigung in ALC beeinflussen. Alkohol kann das molekulare Profil jeder Person mit ALC beeinflussen und daher die Krankenhauseinweisungen, -übernahmen und das Fortschreiten der Leberzirrhose beeinflussen.

Bessere Kenntnis des molekularen Profils von Personen mit ALC ermöglicht es uns in Kombination mit den klinischen Merkmalen der Gesundheit und der körperlichen Leistung des Patienten, um Maßnahmen der personalisierten Behandlung, Überwachung und Follow-up von Menschen mit ALC zu planen und zu verwalten.

Ein tieferer Einblick in die molekularen Mechanismen des Fortschreitens der Leberantrieb und die Remission von Zirrhose wird mit klinischen Daten kombiniert. Unterstützung unserer Fähigkeit, Ergebnisse bei der Zirrhose vorherzusagen, die personalisierte Überwachung und Nachuntersuchung zu erleichtern und die richtige und zeitnahe Behandlung für den richtigen Patienten zu unterstützen. Die Ergebnisse können auch die Entwicklung neuartiger molekularer Arzneimittelziele zur Behandlung und Prävention von Zirrhose in Zukunft unterstützen.

Methoden Die Studie ist eine Inzidenzkohorte, bei der die Patienten von der Diagnose bis zum Tod oder des Entzugs aus der Kohorte befolgt werden. Wir werden versuchen, Patienten innerhalb von drei Monaten nach der Diagnose nacheinander einzubeziehen. Die Ergebnisse werden nach den Strobe -Richtlinien gemeldet.

Studienpersonen alle Personen mit einer ersten Überweisung zur Untersuchung für und diagnostizieren alkoholbedingter Leberzirrhose in der Mageneinheit, und alle Patienten mit einem Debüt von alkoholbedingter Leberzirrhose während der Aufnahme sind unabhängig vom Grund für die Aufnahme berechtigt.

Diese Studie beeinträchtigt keine Diagnostik oder Behandlung von Zirrhose oder Komorbiditäten, und die Einbeziehung in interventionelle Studien während der prospektiven Follow-up ist möglich.

Rekrutierung Alle Patienten mit einem Debüt der Leberzirrhose, bei denen vermutet wird, dass sie mit Alkohol verwendet werden, und unabhängig von Zeit und Umständen der Diagnose, Komorbiditäten und Schweregrad der Krankheit wird in die Kohorte einbezogen. Alle Teilnehmer werden entweder vom Arzt oder von der Krankenschwester beauftragt. Alle Teilnehmer werden sowohl schriftlich als auch mündlich durch Studienermittler und Projektschwestern informiert.

Intervention der Alkoholsteuerung und des Standards der Versorgung Alle Patienten mit ALC, die in der Gastro -Einheit AHH behandelt werden, und daher werden allen Teilnehmern dieser Studie den Standard für die Versorgungsbehandlung angeboten. Dies umfasst Untersuchungen mit Standardbiochemie, Ultraschall, Fibroscan, CT-Scan und Endoskopie sowie Ernährungsmittel, medizinische Behandlung für Zirrhose und Komplikationen sowie Komorbiditäten.

Die Intervention zur Alkoholstillung wird allen Patienten mit ALC als Standard für die Behandlung der Versorgung angeboten. Die Intervention umfasst die medizinische Behandlung von Entzugssymptomen und das Verlangen sowie die Unterstützung bei der Überweisung an städtische Angebote für Alkoholbehandlung. Darüber hinaus werden den Patienten im Rahmen ihrer Behandlung mit dem Ziel, die Alkoholstillung zu erleichtern und eine weitere Alkoholbehandlung im Primärsektor zu unterstützen.

Die Patienten und mögliche Betreuer werden innerhalb der ersten drei Monate nach der Diagnose zu drei MI -Sitzungen eingeladen, die von spezialisierten Krankenschwestern in der Leberklinik durchgeführt werden.

Daten von Patientenzeitschriften in dieser Studie Wir werden Informationen aus dem Patient Journal abrufen, nachdem schriftliche Einwilligung erfolgt.

Daten, die aus Patientenjournalen vor der Einwilligung abgerufen wurden, beschränken sich auf die Diagnose der ALC, die Zeit der Diagnose und die Ursache für Krankenhauseintritt oder Überweisung, die zur Diagnose von ARLD führte. Biometrische Daten, die vor der schriftlichen Zustimmung zur Teilnahme erhalten wurden, werden für die Studie nicht abgerufen. Diese Daten können aus einem Zeitraum von null bis dreißig Tagen vor der Inklusion gesammelt werden und werden an Klinikerforscher und Studienpersonal weitergegeben.

Daten und persönliche Informationen werden nach der aktuellen Gesetzgebung, dem Datenschutzgesetz und der Angabe der allgemeinen Datenschutzverordnung registriert und überwacht.

Genetische Analysen DNA werden aus Blutkörperchen, Vollblut und Stuhl der Teilnehmer extrahiert. Die DNA wird bis zur weiteren Analyse bei -80 ° C gespeichert. Die Genotypisierung wird mit einem GWAS-Chip durchgeführt (d.h. gezielte genomische Kartierung) unter Verwendung von Illumina-Exomechip-Angrenzungen für Proteinveränderung, große Effektvarianten. Ultra-servierende Varianten (<1/1000) werden nicht erfasst. Ergebnisse aus genetischen Analysen in Kombination mit klinischen Daten können Gene identifizieren, die mit Mortalität, Überleben und Schweregrad der Krankheit im Kontext „Risikoprofilerstellung“ verbunden sind. Die Genomanalyse umfasst häufige Varianten und polygene Risiko -Score -Profile für gemeinsame Varianten. Die gesamte Genomsequenzierung wird nicht durchgeführt.

Genetische Analysen zur bakteriellen DNA aus dem Stuhl werden für vergleichende Analysen des Zusammenspiels zwischen Darmfunktionsstörungen und Leberzirrhose verwendet.

Transkriptomik, Metabolomik und Proteomik zur Identifizierung neuer potenzieller Marker, die an der Entwicklung, Fortschreitung und Remission von ALC, Transkriptomik, Metabolomik und Proteomik beteiligt sind, werden an Lebergewebe und Blut durchgeführt. Analysen werden die Expressionsniveaus und die zelluläre Lokalisierung möglicher Biomarker einschließlich Rezeptor und Liganden sowie nachgeschaltete Signalmoleküle bewerten. Die angewendeten Techniken sind nachstehend beschrieben. Zusammen mit klinischen Daten verbessern die Ergebnisse das Verständnis möglicher Treiber für die Remission und das Fortschreiten von ARLD.

Das Gebiet der Entdeckung Omics Tenchnologies entwickelt sich rasch weiter, und Methoden können Anpassungen an die sichere Qualität, Relevanz und die besten Preise für die Analyse unterliegen.

Die Analyse der Proteomikanalyse von Plasmaproben sorgt dafür, dass eine hohe Erfolgsrate und eine wiederholte Probenahme im Laufe der Zeit von Patienten leicht toleriert werden. Für die Analyse werden zu Studienbeginn und nach 12 Monaten nach 12 Monaten gesammelt. Die Herstellung von Proben und Flüssigchromatographie- und Massenspektrometrieanalyse (LC/MS) folgt Technologien, die zuvor von Torben Hansen und Center for Basic Metabolic Research (CBMR) der Universität Kopenhagen beschrieben wurden. In der Einzel-Schuss-Plasma-Proteomanalyse ist das Peptidgemisch ein eluiertes EVOSEP-Ein-LC-System (EVOSEP Biosystems) online zu einem Orbitrap Exploris 480-Massenspektrometer.

Lipidomikanalysen:

Die Analyse erfolgt nach vorhandenen vorhandenen Verfahren und modifiziert, um die beste verfügbare Technologie anzuwenden.

Nach der Plasma -Präparation wird die chromatographische Trennung in den Gewässern Kauf -Säule (1,7 μm x 2,1 mm x 100 mm) unter Verwendung des Gradienten zweier Standard -Mobilphasen (mobile Phase A enthält Wasser, 0,1% Ammisäure und 10 ml 1M Ammoniumacetat, mobile Phase B enthält Isopropan -und Acetonitril (1: 1) (1: 1: 1) und Acetonitril (1: 1) und Acetonitril -Acetonitril -Acetonitril -Acetonitril enthält.

Die Massenspektrometrieidentifizierung von Verbindungen wird auf einer vorgefertigten Bibliothek von Zielmetaboliten im Plasma gezielt.

Basierend auf den Ergebnissen aus den Lipidomikanalysen werden wir ein Panel von diagnostischen Markern auswählen, das die Geschwindigkeit des Krankheitsverlaufs am effizientesten beschreibt. Für die ausgewählten Biomarker entwickeln wir eine absolute quantitative Methode, die auf LC-MS-MS-Methoden (Triple Quadrupol MS im MRM-Modus) basiert, unter Verwendung von kommerziell erhältlichen Standardverbindungen, einschließlich stabiler Isotopenmarkierungsverbindungen als interne Standards. Die Methode wird gemäß standardisierten Protokollen validiert. Bei erfolgreichen Ergebnissen können wir die Konzentrationsgrenzen von Panel-Biomarkern für die Vorhersage eines langsamen Fortschreitens langsamer, mittlerer und schneller Krankheiten festlegen, und damit die Methode, die Methode in klinische Laboratorien und personalisierte Medizin zu übertragen, bereit macht.

Die biologische Analyse und das Datenmanagement von Proteomik und Lipidomik findet am CBMR statt.

Transkriptomomics -Analysen und Biostatistiken werden im Zentrum für grundlegende Stoffwechselforschung durchgeführt.

Die Bulk-RNA-Sequenzierung liefert eine gewebeweite Transkriptionslandschaft und ermöglicht eine tiefe Untersuchung des Transkriptoms, unterscheidet jedoch nicht zwischen einzelnen Zellen. Um Gene zu identifizieren, die eine wichtige Rolle bei der Progression oder Wiederbelichtung von AH spielen, werden wir Datensätze von der Bulk -RNA -Sequenzierung in AH mit bereits etablierten Datensätzen aus einer Einzelzell -RNS -Sequenzierung der Leber vergleichen.

Basierend auf Genen, die gleichzeitig von Bulk-RNA in unseren Proben und Scrnaseq vorgeschlagen werden, können wir die wichtigsten Transkriptionsregulatoren in ALC untersuchen.

Wir werden diese Ressource nutzen, um die Daten der Leberbiopsien rechnerisch zu entfassen, um die relative Häufigkeit jeder Zelltyp der Leber (Hepatozyten, Leberstellatzellen, Leber -sinusoidaler Epithelzellen usw.) bei jedem Patienten abzuschätzen. Mögliche Krankheitsregulatoren sowohl des Fortschreitens als auch der Entschädigung werden bewertet.

Forschungsbiobank Eine Biobank wird für die Studie eingerichtet. Die Biobank wird zu Studienbeginn, drei Monaten, 1 und 3 Jahren Blut und Lebergewebe und Stuhl zu Studienbeginn und nach 1 Jahr enthalten. Zu jedem Zeitpunkt werden 15 ml Blut und 3 Gramm Stuhl gesammelt. Zu Studienbeginn und nach 1 Jahr werden 0,2 Gramm Lebergewebe gesammelt. Wenn ein Teilnehmer Aszites hat und eine Parazentese benötigt, wird eine subkutane Fettbiopsie aus dem Schnittspot auf dem Bauch entnommen.

Überschüssiges Material aus der Studie wird zur zukünftigen Forschung in eine Biobank übertragen.

Perspektiven Die Studie wird zu einer besseren Charakterisierung fortgeschrittener Lebererkrankungen im Zusammenhang mit Alkohol beitragen und Patienten mit Lebererkrankungen zu einer verbesserten zukünftigen Organisation von Behandlungs- und Rehabilitationsangeboten beitragen. Eine gründliche Charakterisierung und aufeinanderfolgende Eingliederung wird unser Verständnis der Inzidenz, Prävalenz und Auswirkungen von ALC in der Bevölkerung sowie die Nutzung von Ressourcen für die Gesundheitsversorgung verbessern, die der Behandlung zugewiesen wurden.

Ein tieferer Einblick in die molekularen Mechanismen des Fortschreitens und der Remission von Leber wird in Kombination mit klinischen Daten unsere Fähigkeit unterstützen, die Ergebnisse bei der Zirrhose vorherzusagen, und erleichtern die personalisierte Überwachung, die darauf abzielt, die richtige Behandlung für den richtigen Patienten zur richtigen Zeit zu liefern.

Die prospektive Kohortenstudie wird weiter zur Identifizierung zuvor nicht identifizierter Risikofaktoren beitragen, die für das Überleben und den Einsatz von Gesundheitsdiensten von Bedeutung sind. und bilden dadurch die Grundlage für die Umsetzung von Veränderungen der Gesundheitspraktiken, die sowohl wirtschaftliche als auch medizinische Vorteile bieten. Darüber hinaus kann die Studie neue Bereiche für interventionelle Forschung mit klinisch relevanten Endpunkten aufdecken.