Geoptimaliseerde remissie bij alcoholgerelateerde levercirrose (Pro-ALC)

In Denemarken wordt de incidentie van levercirrose vijfvoudig verhoogd voor mannen en verdrievoudigd voor vrouwen in de afgelopen veertig jaar. In 2008 werden ongeveer 15.000 mensen gediagnosticeerd met levercirrose. Patiënten die naar het ziekenhuis worden overgenomen, hebben een hogere sterfte van 90 dagen dan degenen die overname vermijden.

Het klinische verloop van levercirrose omvat complicaties van ascites, hepatische encefalopathie, variceale bloedingen, nierdisfunctie en infecties met herhaalde opnames in het ziekenhuis die de prognose aanzienlijk verergeren. Deze complicaties worden aangedreven door de ontwikkeling van portale hypertensie in de lever. Deze progressie naar het 'gedecompenseerde' stadium wordt beschouwd als een kenmerk in het ziekteverloop, omdat de decompensatie wordt geassocieerd met een duidelijk verhoogd risico op verdere complicaties en overlijden.

Verschillende klinische studies hebben getracht medische remedies te vinden die complicaties met betrekking tot portale hypertensie voorkomen of verdere progressie bij cirrose vertragen. Toch wijst het toenemende aanwijzingen aan dat actieve behandelingsmaten van de onderliggende oorzaak van leverziekte en verwijdering van de toxische middelen die cirrose veroorzaken de ziekteprogressie kunnen vertragen of zelfs regressie van cirrhose kunnen induceren. Dit concept wordt beschreven als hepatische herstel.

Klinische en biochemische kenmerken zoals BMI en albuminespiegels kunnen worden gekoppeld aan recompensatie, maar er is een duidelijke behoefte aan klinische studies die nieuwe biomarkers onderzoeken met het vermogen om verbetering van levercirrose te voorspellen en te volgen, en zonder de impact van alcohol.

Tussen 75% en 80% van de patiënten met levercirrose in Denemarken hebben of hebben een schadelijk gebruik van alcohol gehad. Afhankelijkheid van alcohol leidt tot sociaal isolement, het risico op werkloosheid en een verminderde naleving van de gezondheidszorg (8). Cirrose is gerelateerd aan een verminderde kwaliteit van leven en treft patiënten en familieleden zowel emotioneel als sociaal -economisch.

Alcoholgerelateerde leverziekte (ARLD) heeft een grote impact op de gezondheid en levens van patiënten, en de behandeling draait om symptomatische verlichting en preventie van verdere complicaties. Er is een onvervulde behoefte om behandelingsopties te onderzoeken die niet alleen complicaties verlichten, maar ook de onderliggende paden van alcoholgerelateerde leverziekte aanpakken, ook in ernstige stadia van alcoholgerelateerde cirrose (ALC). Eerdere studies die de recompensatie in ARLD onderzoeken, zijn retrospectief en niet ontworpen voor het exacte doel.

Van factoren zoals BMI, vrouwelijke geslacht en kleine portaalhypertensie is bekend dat ze worden geassocieerd met een verhoogde kans op recompensatie. Aanvullende factoren van genetische activering en moleculaire biomarkers van het proteoom en lipidoom hebben slechts kleine aandacht getrokken, en de impact van de behandeling van de factoren van decompensatie, portale hypertensie en alcoholgebruik en hun impact op de natuurlijke oorzaak van ziekte, zijn niet aangepakt.

De Gastro-eenheid, Amager-Hvidovre Hospital (AHH) heeft een recordoppervlak van 550.000 burgers ten zuiden en ten westen van Kopenhagen. De gastro -eenheid is de grootste in Denemarken, met app. 90 toelating dagelijks. 140 mensen worden jaarlijks gediagnosticeerd met levercirrose op onze afdeling, hetzij door verwijzing uit de algemene praktijk of door debuut van ziekten tijdens ziekenhuisopname. Van november 2019 tot maart 2022 werden 357 patiënten geëvalueerd op levercirrose in de gastro -eenheid. 20 % van deze stierf binnen twaalf maanden. 75% had alcoholgebruik als de primaire oorzaak van levercirrose.

Nieuwe moleculaire technologieën en risicovoorspelling De moleculaire pathofysiologie van ARLD wordt onvolledig begrepen. Karakterisatie van de proteoomdynamiek over het spectrum van ALD kan nieuwe inzichten bieden in ziektemechanismen van zowel progressie als remissie van ziekten. Recente ontwikkelingen in MS-gebaseerde proteomica hebben de impact ervan op biomedisch en klinisch onderzoek sterk uitgebreid. Het maakt de identificatie en kwantificering van duizenden eiwitten mogelijk, waardoor het geschikt is voor het bestuderen van ziektemechanismen en identificatie van biomarkers. Eerdere studies hebben het proteoom beoordeeld in metabole disfunctie-geassocieerde steatotische leverziekte (MASH) en alcoholgerelateerde fibrose, en proteomische profielen vertoonden een sterke associatie voor de ernst van de leverziekte. Studies met opeenvolgende follow-up in de ernstige stadia van ALC ontbreken nog steeds.

Op MS gebaseerde proteomica kan biomarkers van voorspellende waarde in de kliniek identificeren, met name bij het vooruitzicht op remissie van ziekten. Koppeling aan klinische gegevens en resultaten kan het gebruik van proteomische biomarkers ondersteunen bij de voorspelling en monitoring van remissie in AH en recompensatie in ALC.

Verschillende markers van ontstekingen en cytokines zijn betrokken bij het stimuleren van decompensatie en hebben het potentieel om het risico op vroege dood te voorspellen. Het is onbekend of dergelijke markers remissie en herstel in ALC en AH kunnen voorspellen. Eerdere studies hebben de relaties tussen ontsteking en mortaliteit beoordeeld, maar prospectieve studies die de associaties onderzoeken tussen biomarkers van metabolisme en prognose, monitoring en werkzaamheid OG -behandeling in ALC ontbreken.

Transcriptomics en genactivering bij progressie en remissie van leverziekte De moleculaire en cellulaire complexiteit van de levermicro -omgeving blijft een belangrijk obstakel dat de ontwikkeling van potentiële behandelingen belemmert. Eerdere studies bij RNA-sequencing zijn klein en zonder follow-up.

Met vooruitgang in genchips en high-throughput sequencing zijn verschillende prognostische gensignaturen vastgesteld om de algehele overleving bij levercirrose te voorspellen.

Recente RNA -sequencing met één cel en bulk RNA -sequencingstudies hebben aangetoond dat specifieke mesenchymale, endotheliale en monocytenlijnen verrijkt zijn in cirrhotische levers.

Hele weefsel (bulk) RNA -sequencing biedt een gemiddelde uitlezing van het RNA -gehalte van een monster, dat gemengde RNA -signalen weergeeft van de verschillende cellen die aanwezig zijn in het weefsel en dus aanzienlijk wordt beïnvloed door de prevalentie van celtype. In vergelijking met RNA-sequencing met één cel (scRNA-seq), kan bulk-RNA-sequencing niet worden gebruikt om zeldzame celpopulaties te bestuderen, of specifieke pathogene cel subpopulaties, maar het geeft wel inzicht in patronen van pathogene gentranscriptie en cellulaire disfunctie, vooral wanneer gekoppeld aan klinisch fenotype en wanneer een scrial-bibliotheek van leveringsgebied van leverweissue.

Geen studies hebben eerder veranderingen in het transcriptoom vergeleken na verwijdering van de toxische middelen die leverschade veroorzaken.

In ALC is er een onvervulde behoefte om behandelingsopties te onderzoeken die de onderliggende paden van ARLD aanpakken, ook in ernstige stadia van cirrose. Inductie van de herstel zal zowel overleving als 'opnamevrij' dagelijkse leven van patiënten met ALC verlengen.

Doelstellingen De algemene doelstelling van de huidige studie is het onderzoeken van het moleculaire profiel en de routes bij personen met ALD ter ondersteuning van gepersonaliseerde monitoring en follow-up bij levercirrose.

Hypothese De prognose van ALC varieert afhankelijk van de continue of stopgezette alcoholinname. Alcohol kan overleving en beloning in ALC beïnvloeden. Alcohol kan het moleculaire profiel van elke persoon met ALC beïnvloeden en dus impact van ziekenhuisopnames, overname en progressie van levercirrose.

Betere kennis van het moleculaire profiel van personen met ALC zal, in combinatie met klinische kenmerken van de gezondheid en fysieke prestaties van de patiënt, ons in staat stellen om acties van gepersonaliseerde behandeling, monitoring en follow-up van mensen met ALC te plannen en te beheren.

Een dieper inzicht in de moleculaire mechanismen van de leverstimuleringsprogressie en remissie van cirrose zal in combinatie met klinische gegevens ons vermogen ondersteunen om resultaten in cirrose te voorspellen, gepersonaliseerde monitoring en follow-up te vergemakkelijken en de juiste en tijdige behandeling voor de juiste patiënt te ondersteunen. De bevindingen kunnen ook de ontwikkeling van nieuwe moleculaire geneesmiddelendoelen ondersteunen voor behandeling en preventie van cirrose in de toekomst.

Methoden De studie is een incidentiecohort waarin patiënten worden gevolgd van diagnose tot dood of terugtrekking uit het cohort. We zullen proberen achtereenvolgens patiënten op te nemen binnen drie maanden na diagnose. De resultaten zullen worden gerapporteerd na stroboscooprichtlijnen.

Studie-proefpersonen Alle personen met een eerste verwijzing naar onderzoek naar en diagnose van alcoholgerelateerde levercirrose in de gastro-eenheid, en alle patiënten met een debuut van alcoholgerelateerde levercirrose tijdens opname, ongeacht de reden voor opname, komen in aanmerking voor inclusie.

Deze studie brengt geen compromis met diagnostiek of behandeling van cirrose of comorbiditeiten, en opname in interventionele studies tijdens de prospectieve follow-up is mogelijk.

Werving Alle patiënten met een debuut van levercirrose waarvan wordt vermoed dat ze verband houden met het gebruik van alcohol, en ongeacht tijd en omstandigheden van diagnose, comorbiditeiten en ernst van de ziekte zullen worden aangeboden inclusie in het cohort. Alle deelnemers zullen worden betrokken door de arts of verpleegkundige die zorg standaard voor zorgt. Alle deelnemers worden schriftelijk en oraal op de hoogte gebracht door onderzoekers en projectverpleegkundigen.

Alcoholbewegingsinterventie en zorgstandaard Alle patiënten met ALC behandeld in de gastro -eenheid, AHH, en daarom zullen alle deelnemers aan deze studie de standaard voor zorgbehandeling worden aangeboden. Dit omvat onderzoeken met standaard biochemie, echografie, fibroscan, CT-scan en endoscopie, evenals voedingssupplementen, medische behandeling voor cirrose en complicaties en comorbiditeiten.

De interventie van alcoholbeweging wordt aangeboden als standaard voor zorgbehandeling aan alle patiënten met ALC. De interventie omvat medische behandeling van ontwenningsverschijnselen en verlangen, en ondersteuning naar verwijzing naar gemeentelijke aanbiedingen van alcoholbehandeling. Bovendien zullen de patiënten, met als doel het stoppen met alcohol te vergemakkelijken en verdere alcoholbehandeling in de primaire sector te ondersteunen, motiverende interviews (MI) aangeboden als onderdeel van hun behandeling.

De patiënten en mogelijke zorgverleners worden uitgenodigd voor drie MI -sessies uitgevoerd door gespecialiseerde verpleegkundigen in de leverkliniek binnen de eerste drie maanden na de diagnose.

Gegevens van patiëntbladen in deze studie zullen we informatie ophalen van het Patient Journal nadat schriftelijke toestemming is verstrekt.

Gegevens die zijn opgehaald uit patiëntbladen voorafgaand aan het verkrijgen van toestemming zijn beperkt tot de diagnose van ALC, tijd van de diagnose en de oorzaak van ziekenhuisopname of verwijzing die leidde tot de diagnose van ARLD. Biometrische gegevens verkregen vóór schriftelijke toestemming voor deelname worden niet opgehaald voor de studie. Deze gegevens kunnen worden verzameld van een periode van nul tot dertig dagen voorafgaand aan de opname en zullen worden doorgegeven aan onderzoekers van artsen en studiepersoneel.

Gegevens en persoonlijke informatie worden geregistreerd en gecontroleerd na de huidige wetgeving, de wet op de gegevensbescherming en zoals vermeld door de algemene verordening gegevensbescherming.

Genetische analyses DNA zullen worden geëxtraheerd uit bloedcellen, volbloed en van ontlasting van de deelnemers. Het DNA wordt opgeslagen op -80c, tot verdere analyse. Genotypering zal worden uitgevoerd met een GWAS-chip (d.w.z. Gerichte genomische mapping) met behulp van Illumina exomechip verrijkt voor eiwitveranderende, grote effectvarianten. Ultra-zekere varianten (<1/1000) worden niet vastgelegd. Resultaten van genetische analyses in combinatie met klinische gegevens kunnen genen identificeren die geassocieerd zijn met mortaliteit, overleving en ernst van ziekten in een 'risicoprofilering' -context. Genomische analyse omvat gemeenschappelijke varianten en polygene risicoscoreprofilering op gemeenschappelijke varianten. Hele genoomsequencing wordt niet uitgevoerd.

Genetische analyses op bacterieel DNA van ontlasting zullen worden gebruikt voor vergelijkende analyses van de samenspel tussen darmdisfunctie en levercirrose.

Transcriptomics, metabolomics en proteomica voor identificatie van nieuwe potentiële markers die betrokken zijn bij ontwikkeling, progressie en remissie van ALC, transcriptomics, metabolomics en proteomics zullen worden uitgevoerd op leverweefsel en bloed. Analyses zullen expressieniveaus en cellulaire lokalisatie van mogelijke biomarkers evalueren, waaronder receptor- en liganden, evenals stroomafwaartse signaalmoleculen. De toegepaste technieken worden hieronder beschreven. Samen met klinische gegevens zullen de resultaten het begrip van mogelijke stuurprogramma's voor remissie en progressie van ARLD verbeteren.

Het veld van ontdekking omics -tenchnologieën evolueert snel en methoden kunnen worden onderworpen aan aanpassingen om kwaliteit, relevantie en de beste prijzen voor de analyse te beveiligen.

Analyse van proteomica -analyse van plasmamonsters zorgt voor een hoog succespercentage en herhaalde bemonstering in de tijd wordt gemakkelijk door patiënten getolereerd. Snap bevroren leverbiopsies worden verzameld bij aanvang en 12 maanden voor analyse. Bereiding van monsters en vloeistofchromatografie en massaspectrometrie (LC/MS) analyse volgt technologieën die eerder zijn beschreven uit Torben Hansen en Center for Basic Metabolic Research (CBMR), Copenhagen University. In single-shot plasma-proteoomanalyse is het peptidemengsel geëlueerd evoSep One LC-systeem (evosep biosystemen) online gekoppeld aan een orbitrap exploris 480 massaspectrometer.

Lipidomics -analyses:

Analyse wordt uitgevoerd volgens de geavanceerde bestaande procedures en gewijzigd om de best beschikbare technologie toe te passen.

Na PLASMA -preparaat wordt chromatografische scheiding uitgevoerd op Waters Acquity Beh C18 -kolom (1,7 μm x 2,1 mm x 100 mm) met behulp van de gradiënt van twee standaard mobiele fasen (mobiele fase A bevat water, 0,1% mierenzuur en 10 ml ammoniumacetaat, mobiele fase B -composes isopropanol en acetonolie en acetonolie (1: 1) met dezelfde toevoeging van forminezuur en amonium acetaat).

De massaspectrometrie-identificatie van verbindingen is gericht op basis van een vooraf gemaakte bibliotheek van doelmetabolieten in plasma.

Op basis van de resultaten van de lipidomics -analyses zullen we een panel van diagnostische markers selecteren, die de snelheid van de ziekteprogressie het meest efficiënt zullen beschrijven. Voor de geselecteerde biomarkers zullen we een absolute kwantitatieve methode ontwikkelen, gebaseerd op LC-MS-MS (Triple Quadrupole MS in MRM-modus) methodologie, met behulp van commercieel beschikbare standaardverbindingen, waaronder stabiele isotoop-gelabelde verbindingen als interne normen. De methode wordt gevalideerd volgens gestandaardiseerde protocollen. In het geval van succesvolle resultaten zullen we in staat zijn om concentratielimieten van panelbiomarkers in te stellen voor voorspelling van langzame, gemiddelde en snelle ziekteprogressie, en op de lange termijn de methode klaar maken om over te dragen naar klinische laboratoria en gepersonaliseerde geneeskunde.

De biologische analyse en gegevensbeheer van proteomica en lipidomics zullen plaatsvinden bij de CBMR.

Transcriptomics -analyses analyses en biostatistieken zullen worden uitgevoerd in Center for Basic Metabolic Research.

Bulk RNA-sequencing biedt een weefselbrede transcriptielandschap en zorgt voor diep onderzoek naar het transcriptoom, maar het maakt geen onderscheid tussen individuele cellen. Om genen te identificeren die een belangrijke rol spelen bij de progressie of terugvordering van AH, zullen we datasets van bulk -RNA -sequencing in AH vergelijken met reeds vastgestelde datasets van RNS -sequencing van de lever van enkele cellen.

Gebaseerd op genen die tegelijkertijd worden gesuggereerd door bulk-RNA in onze monsters en scrnaseq, kunnen we de belangrijkste transcriptionele regulatoren in ALC verkennen.

We zullen gebruik maken van deze bron om de bulktranscriptoomgegevens van de leverbiopsieën computationeel te deconcriptie om de relatieve overvloed van elk celtype van de lever te schatten (hepatocyten, hepatische stellaatcellen, lever sinusoïdale epitheelcellen, enz.) Bij elke patiënt. Mogelijke ziektegeweerders van zowel progressie als vergoeding zullen worden beoordeeld.

Onderzoeksbiobank Er zal een biobank worden opgericht voor de studie. De biobank zal bloed bevatten die is verzameld bij aanvang, drie maanden, 1 en 3 jaar, en leverweefsel en ontlasting verzameld bij aanvang en na 1 jaar. Op elk tijdstip wordt 15 ml bloed en 3 gram ontlasting verzameld. Bij aanvang en na 1 jaar zal 0,2 gram leverweefsel worden verzameld. Als een deelnemer ascites heeft en paracentese nodig heeft, zal een onderhuidse vetbiopsie worden gehaald vanaf de incisieplek op de buik.

Surplus materiaal uit het onderzoek zal worden overgebracht naar een biobank voor toekomstig onderzoek.

Perspectieven De studie zal bijdragen aan een betere karakterisering van gevorderde leverziekte gerelateerd aan alcohol en bijdragen aan een verbeterde toekomstige organisatie van behandelings- en revalidatieaanbiedingen aan patiënten met leverziekte. Grondige karakterisering en opeenvolgende inclusie zullen ons begrip van de incidentie, prevalentie en impact van ALC op de bevolking vergroten, evenals het gebruik van de middelen voor gezondheidszorg die zijn toegewezen aan de behandeling ervan.

Een dieper inzicht in de moleculaire mechanismen van leverprogressie en remissie zal, in combinatie met klinische gegevens, ons vermogen ondersteunen om resultaten in cirrose te voorspellen, gepersonaliseerde monitoring vergemakkelijken die gericht zijn op de juiste behandeling voor de juiste patiënt op het juiste moment.

De prospectieve cohortstudie zal verder bijdragen aan de identificatie van eerder niet -geïdentificeerde risicofactoren die significant zijn voor overleving en het gebruik van gezondheidszorgdiensten; en daarmee de basis vormen voor het implementeren van veranderingen in gezondheidspraktijken die zowel economische als medische voordelen bieden. Bovendien kan de studie nieuwe gebieden voor interventioneel onderzoek ontdekken met klinisch relevante eindpunten.