알코올 관련 간경변에서 최적화 된 완화 (Pro-ALC)

덴마크에서는 간경변의 발생률이 남성의 경우 5 배 증가하고 지난 40 년 동안 여성의 경우 3 배가 증가합니다. 2008 년에 약 15,000 명이 간경변으로 진단되었습니다. 병원에 재입학을받은 환자는 재 입원을 피하는 환자보다 90 일 사망률이 높습니다.

간경변의 임상 과정에는 복수의 합병증, 간장 병증, 정맥류 출혈, 신장 기능 장애 및 예후를 현저하게 악화시키는 병원 입원이 반복되는 감염이 포함됩니다. 이러한 합병증은 간에서 포털 고혈압의 발달에 의해 주도됩니다. 소보가 더 많은 합병증과 사망의 위험이 현저히 증가하는 것과 관련이 있기 때문에, '보충 된'단계로의 이러한 진행은 질병 과정에서 특징으로 간주됩니다.

몇몇 임상 연구는 포털 고혈압과 관련된 합병증을 예방하거나 간경변의 추가 진행을 늦추는 의학적 치료법을 찾고자했습니다. 그러나 증가하는 증거는 간 질환의 근본 원인의 적극적인 측정 및 간경변을 유발하는 독성 제의 제거가 질병 진행을 늦추거나 간경변의 회귀를 유도 할 수 있음을 나타냅니다. 이 개념은 간 재 보상으로 묘사됩니다.

BMI 및 알부민 수준과 같은 임상 및 생화학 적 특징은 재 보상과 관련이있을 수 있지만, 알코올의 영향없이 간경변의 개선을 예측하고 모니터링 할 수있는 새로운 바이오 마커를 조사하는 임상 연구가 현저한 필요성이있다.

덴마크에서 간경변 환자의 75%에서 80% 사이에 알코올을 유해한 사용했거나 유해한 사람이 있습니다. 알코올의 의존성은 사회적 고립, 실업의 위험 및 건강 관리의 준수 감소로 이어집니다 (8). 간경변은 삶의 질 감소와 관련이 있으며 감정적 및 사회 경제적으로 환자와 친척에게 영향을 미칩니다.

알코올 관련 간 질환 (ARLD)은 환자의 건강과 생명에 큰 영향을 미치며, 치료는 증상 완화 및 추가 합병증 예방에 관한 것입니다. 합병증을 완화 할뿐만 아니라 알코올 관련 간 질환 (ALC)의 심각한 단계에서 알코올 관련 간 질환의 기본 경로를 다루는 치료 옵션을 조사 할 필요가 없다. ARLD의 재 보상을 탐구하는 이전의 연구는 회고 적이며 정확한 목적을 위해 설계되지 않았습니다.

BMI, 여성 성별 및 경미한 포털 고혈압과 같은 요인은 재 보상 가능성 증가와 관련이있는 것으로 알려져 있습니다. 프로테옴 및 지질로부터의 유전자 활성화 및 분자 바이오 마커의 추가 요인은 약간의 관심을 끌었으며, 보상, 포털 고혈압 및 알코올 사용의 동인을 치료하는 데 영향을 미치고 질병의 자연 원인에 미치는 영향은 다루지 않았다.

Amager-Hvidovre Hospital (AHH)의 Gastro Unit은 코펜하겐 남쪽과 서쪽으로 550,000 명의 기록을 가지고 있습니다. Gastro 장치는 앱과 함께 덴마크에서 가장 큰 유닛입니다. 매일 90 개의 입학. 140 명이 일반 관행에서 의뢰하거나 병원 입원 중 질병 데뷔에 의해 매년 간경변으로 진단됩니다. 2019 년 11 월부터 2022 년 3 월까지 357 명의 환자가 Gastro 단위의 간경변에 대해 평가되었습니다. 이 중 20 %는 12 개월 안에 사망했습니다. 75%는 간경변의 주요 원인으로 알코올을 사용했습니다.

새로운 분자 기술 및 위험 예측 ARLD의 분자 병리 생리학은 불완전하게 이해된다. ALD의 스펙트럼에 걸쳐 프로테옴 역학의 특성화는 질병의 진행 및 완화에 대한 질병 메커니즘에 대한 새로운 통찰력을 제공 할 수있다. MS 기반 프로테오믹스의 최근 발전은 생물 의학 및 임상 연구에서 그 영향을 크게 확장했습니다. 그것은 수천 개의 단백질의 식별 및 정량화를 가능하게하여 질병 메커니즘을 연구하고 바이오 마커의 식별에 적합합니다. 사전 연구는 대사 기능 장애 관련 스테에 틱 간 질환 (MASH) 및 알코올 관련 섬유증의 프로테옴을 평가했으며, 프로테오믹스 프로파일은 간 질환의 중증도와 강한 연관성을 보여 주었다. ALC의 심각한 단계에서 연속적으로 후속 조치를 취한 연구는 여전히 누락되었습니다.

MS 기반 프로테오믹스는 특히 질병의 완화 전망에서 클리닉에서 예측 가치의 바이오 마커를 확인할 수 있습니다. 임상 데이터 및 결과에 대한 연계는 AH에서의 완화 예측 및 모니터링 및 ALC에서의 재 보상 예측에서 단백질 바이오 마커의 사용을 지원할 수있다.

염증 및 사이토 카인의 몇몇 마커는 유산을 유도하는 데 관여하며 조기 사망의 위험을 예측할 가능성이 있습니다. 그러한 마커가 ALC와 AH에서의 완화 및 재 보상을 예측할 수 있는지 여부는 알려져 있지 않다. 이전의 연구는 염증과 사망률 사이의 관계를 평가했지만, 신진 대사 바이오 마커와 예후의 연관성을 조사하는 전향 적 연구, ALC에서의 모니터링 및 효능 OG 치료 사이의 연관성을 조사한 전향 적 연구.

간 질환의 진행 및 완화에서의 전 사체 및 유전자 활성화 간 미세 환경의 분자 및 세포 복잡성은 잠재적 치료의 발달을 방해하는 주요 장애물로 남아있다. RNA 시퀀싱의 사전 연구는 작고 추적 관찰이 있습니다.

유전자 칩의 발전과 고 처리량 시퀀싱으로, 간경변의 전체 생존을 예측하기 위해 몇몇 예후 유전자 시그니처가 확립되었다.

최근의 단일 세포 RNA 시퀀싱 및 벌크 RNA 시퀀싱 연구는 특정 중간 엽, 내피 및 단핵구 계통이 간경변 간이 풍부하다는 것을 보여 주었다.

전체 조직 (벌크) RNA 시퀀싱은 샘플의 RNA 함량의 평균 판독 값을 제공하며, 이는 조직 내에 존재하는 상이한 세포로부터 혼합 된 RNA 신호를 나타내며, 따라서 세포 유형 유병률에 의해 상당히 영향을 받는다. 단일 세포 RNA 시퀀싱 (SCRNA-Seq)과 비교하여, 벌크 RNA 시퀀싱은 희귀 세포 집단 또는 특정 병원성 세포 하위 집단을 연구하는 데 사용될 수 없지만, 특히 임상 표현형과 관련이 있고 간 조직의 SCRNA-SEQ 라이브러리와 비교할 때 병원성 유전자 전사 및 세포 기능 장애의 패턴에 대한 통찰력을 제공한다.

독성 제를 제거한 후 간 손상을 유발 한 후 전 사체의 변화를 이전에 비교 한 연구는 이전에 어떤 연구도 없었습니다.

ALC에서는 ARLD의 기본 경로를 다루는 치료 옵션, 심각한 간경변 단계에서도 충족되지 않은 치료 옵션이 필요합니다. 재 보상의 유도는 ALC 환자의 생존과 '입원 자유'일상 생활을 모두 연장시킬 것이다.

목표 본 연구의 전반적인 목표는 간경변의 개인화 된 모니터링 및 후속 조치를 지원하기 위해 ALD가있는 사람의 분자 프로파일 및 경로를 조사하는 것입니다.

가설 ALC의 예후는 연속적이거나 알코올 섭취량에 따라 다릅니다. 알코올은 ALC에서 생존과 재 보상에 영향을 줄 수 있습니다. 알코올은 ALC를 가진 각 사람의 분자 프로파일에 영향을 줄 수 있으므로 간경변의 병원 입원, 재 입원 및 진행에 영향을 미칩니다.

ALC를 가진 사람의 분자 프로파일에 대한 더 나은 지식은 환자의 건강 및 신체적 성능의 임상 적 특징과 함께 ALC와의 사람들의 개인 치료, 모니터링 및 후속 조치를 계획하고 관리 할 수 ​​있습니다.

간 감동 진행 및 간경변의 분자 메커니즘에 대한 더 깊은 통찰력은 임상 데이터와 함께 간경변의 결과를 예측하고, 개인화 된 모니터링 및 후속 조치를 촉진하고, 올바른 환자에 대한 권리 및시기 적절한 치료를 지원하는 능력을 지원합니다. 이 발견은 또한 향후 간경변 치료 및 예방을위한 새로운 분자 약물 표적의 발달을 지원할 수있다.

방법 연구는 환자가 진단에서 사망 또는 코호트로부터의 철수로 추적되는 발병 코호트입니다. 우리는 진단 후 3 개월 이내에 연속적으로 환자를 포함 시키려고합니다. 결과는 스트로브 가이드 라인 후에보고됩니다.

연구 피험자는 위장 단위에서 알코올 관련 간경변의 진단 및 진단에 대한 최초의 추천을받은 모든 사람과 입원 사유와 상관없이 입원 중 알코올 관련 간경변의 데뷔를받은 모든 환자는 포함 할 수 있습니다.

이 연구는 간경변 또는 동반 질환의 진단이나 치료를 손상시키지 않으며, 전향 적 추적 관찰 중 개입 연구에 포함시킬 수 있습니다.

모집 알코올 사용과 관련이있는 것으로 의심되는 간경경 간경변이있는 모든 환자는 진단의 시간과 상황에 관계없이 코호트에 포함 된 동반 질환 및 심각성에 관계없이 제공 될 것입니다. 모든 참가자는 의사 또는 간호사가 치료 표준을 제공하는 간호사가 참여하게됩니다. 모든 참가자는 연구 조사자와 프로젝트 간호사가 구두로 서면으로 알려줍니다.

알코올 중단 중재 및 치료 표준 치료 표준 ALC를 가진 모든 환자는 AHH,이 연구의 모든 참가자에게 치료 치료 표준을 제공 받게됩니다. 여기에는 표준 생화학, 초음파, 섬유소, CT- 스캔 및 내시경 검사뿐만 아니라 영양 보충제, 간경변 및 합병증에 대한 치료 및 동반 질환에 대한 조사가 포함됩니다.

알코올 중단 중재는 ALC 환자에게 표준 치료 치료로 제공됩니다. 중재에는 금단 증상 및 갈망의 치료 및 알코올 치료의 시립 제안에 대한지지가 포함됩니다. 또한, 일차 부문에서 알코올 중단을 촉진하고 추가 알코올 치료를 지원하기 위해 환자는 치료의 일부로 동기 부여 인터뷰 (MI)가 제공 될 것입니다.

환자와 가능한 간병인은 진단 후 처음 3 개월 이내에 간 클리닉의 전문 간호사가 수행 한 3 개의 MI 세션에 초대됩니다.

이 연구에서 환자 저널의 데이터 우리는 서면 동의가 제공되면 환자 저널의 정보를 검색합니다.

동의를 얻기 전에 환자 저널에서 검색 한 데이터는 ALC 진단, 진단 시간 및 ARLD 진단을 초래 한 병원 입원 또는 진료 의뢰의 원인으로 제한됩니다. 참여에 대한 서면 동의 전에 얻은 생체 인식 데이터는 연구를 위해 검색되지 않습니다. 이 데이터는 포함 전 0에서 30 일까지 수집 될 수 있으며 임상의 수사관 및 연구 담당자에게 전달됩니다.

데이터 및 개인 정보는 현재 법률, 데이터 보호법 및 일반 데이터 보호 규정에 의해 언급 된 후 등록 및 모니터링됩니다.

유전자 분석 DNA는 혈액 세포, 전혈 및 참가자의 대변에서 추출 될 것입니다. DNA는 추가 분석까지 -80C로 저장 될 것이다. 유전자형 분석은 GWAS-Chip (즉, 즉 단백질 변화, 큰 효과 변이체를 위해 농축 된 Illumina exomechip을 사용한 표적 게놈 맵핑). 초라 변형 변형 (<1/1000)은 캡처되지 않습니다. 임상 데이터와 결합 된 유전자 분석의 결과는 '위험 프로파일 링'맥락에서 사망률, 생존 및 질병의 중증도와 관련된 유전자를 확인할 수 있습니다. 게놈 분석은 일반적인 변이체에 대한 일반적인 변이체 및 다 유전자 성 위험 점수 프로파일 링을 포함합니다. 전체 게놈 시퀀싱은 수행되지 않습니다.

대변으로부터의 박테리아 DNA에 대한 유전자 분석은 장 기능 장애와 간경변 사이의 상호 작용의 비교 분석에 사용될 것이다.

ALC, 전사학, 대사 및 단백질체의 발달, 진행 및 완화에 관여하는 새로운 잠재적 마커의 식별을위한 전 사체, 대사 및 단백질체는 간 조직 및 혈액에 대해 수행 될 것이다. 분석은 수용체 및 리간드 및 다운 스트림 신호 분자를 포함한 가능한 바이오 마커의 발현 수준 및 세포 국소화를 평가할 것이다. 적용된 기술은 아래에 설명되어 있습니다. 임상 데이터와 함께 결과는 ARLD의 완화 및 진행을위한 가능한 동인에 대한 이해를 향상시킬 것입니다.

Discovery Omics Tenchnologies의 분야는 빠르게 발전하고 있으며 방법은 품질, 관련성 및 분석에 가장 적합한 상을 확보하기위한 적응의 대상이 될 수 있습니다.

혈장 샘플의 프로테오믹스 분석 분석은 환자가 높은 성공률을 보장하고 시간이 지남에 따라 반복 샘플링을 쉽게 허용합니다. 스냅 프로젠 간 생검은 분석을 위해 기준선 및 12 개월에 수집됩니다. 샘플 및 액체 크로마토 그래피 및 질량 분석법 (LC/MS) 분석의 준비는 코펜하겐 대학교의 Torben Hansen과 CBMR (Center for Basic Metabolic Research)에서 이전에 설명한 기술을 따를 것입니다. 단일 샷 혈장 프로테옴 분석에서, 펩티드 혼합물은 온라인으로 Orbitrap Exploris 480 질량 분광계에 결합 된 Evosep One LC 시스템 (Evosep Biosystems)을 용리시킨다.

지질학 분석 :

분석은 최첨단 기존 절차에 따라 수행되며 최상의 기술을 적용하도록 수정됩니다.

혈장 제조 후, 크로마토 그래피 분리는 2 개의 표준 이동 상 (모바일 상 A가 물, 0.1% 포름 산 및 10mL 1M 암모늄 아세테이트를 함유하고, 모바일 B 상 B가 이소 프로 파놀 및 아세토 니트릴 (1 : 1)의 구배를 사용하여 Waters Accity Beh C18 컬럼 (1.7μm x 2.1mm x 100 mm)에서 수행된다.

화합물의 질량 분석법 식별은 혈장에서 표적 대사 산물의 사전 제작 된 라이브러리에 기초하여 표적화된다.

지질학 분석의 결과를 바탕으로, 우리는 진단 마커 패널을 선택할 것입니다. 진단 마커 패널은 질병 진행 속도를 가장 효율적으로 설명합니다. 선택된 바이오 마커의 경우, 우리는 내부 표준으로서 안정적인 동위 원소 표지 된 화합물을 포함하여 상업적으로 이용 가능한 표준 화합물을 사용하여 LC-MS-MS (MRM 모드의 트리플 쿼드 러 솔 MS) 방법론을 기반으로 절대 정량적 방법을 개발할 것이다. 이 방법은 표준화 된 프로토콜에 따라 검증됩니다. 성공적인 결과의 경우, 우리는 느린, 중간 및 빠른 질병 진행을 예측하기 위해 패널 바이오 마커의 농도 한계를 설정할 수있을뿐만 아니라 장기적으로 임상 실험실 및 개인화 된 의약품으로 전달할 수있는 방법을 만들 수 있습니다.

프로테오믹스 및 지질학의 생물학적 분석 및 데이터 관리는 CBMR에서 이루어질 것입니다.

Transcriptomomics Analyzes Analyzes 및 Biostatistics는 기본 대사 연구 센터에서 수행 될 것입니다.

벌크 RNA 시퀀싱은 조직 전체의 전사 환경을 제공하고 전 사체에 대한 깊은 조사를 허용하지만 개별 세포를 구별하지는 않습니다. AH의 진행 또는 재 보상에서 중요한 역할을하는 유전자를 식별하기 위해, 우리는 AH의 벌크 RNA 시퀀싱의 데이터 세트를 간의 단일 세포 RNS 시퀀싱에서 이미 확립 된 데이터 세트와 비교할 것이다.

샘플 및 SCRNaseQ에서 Bulk-RNA에 의해 동시에 제안되는 유전자를 기반으로 ALC의 주요 전사 조절기를 탐색 할 수 있습니다.

우리는이 자원을 사용하여 간 생검의 벌크 전 사체 데이터를 계산하여 각 환자의 각 세포 유형 (간세포, 간 정현 상피 세포 등)의 상대적 풍부도를 추정 할 것입니다. 진행과 보상의 가능한 질병 조절제가 평가 될 것이다.

연구를 위해 Biobank a Biobank가 설립 될 것입니다. Biobank에는 기준선, 3 개월, 1 및 3 년에서 수집 된 혈액이 포함되어 있으며, 기준선 및 1 년 후에 수집 된 간 조직 및 대변이 포함됩니다. 각 시점에서, 15 ml의 혈액과 3 그램의 대변이 수집된다. 기준선 및 1 년 후 0,2 그램의 간 조직이 수집됩니다. 참가자가 복수를 가지고 있고 paracentesis가 필요한 경우, 피하 지방 생검은 복부의 절개 지점에서 가져옵니다.

이 연구의 잉여 자료는 향후 연구를 위해 Biobank로 이전 될 것입니다.

관점은이 연구가 알코올과 관련된 진행된 간 질환의 더 나은 특성화에 기여하고 간 질환 환자에 대한 향후 치료 및 재활 제안 개선에 기여할 것입니다. 철저한 특성화와 연속 포함은 인구에 대한 ALC의 발생률, 유병률 및 영향에 대한 우리의 이해뿐만 아니라 치료에 할당 된 의료 자원의 활용을 향상시킬 것입니다.

간 진행 및 완화의 분자 메커니즘에 대한 더 깊은 통찰력은 임상 데이터와 결합하여 간경변의 결과를 예측하는 능력을 지원하고 적절한 시간에 올바른 환자에게 올바른 치료를 제공하는 것을 목표로하는 개인화 된 모니터링을 용이하게합니다.

전향 적 코호트 연구는 생존과 건강 관리 서비스의 사용에 중요한 이전에 미확인 된 위험 요소의 식별에 더 기여할 것입니다. 따라서 경제 및 의학적 혜택을 모두 제공하는 건강 관행의 변화를 구현하는 기초를 형성합니다. 또한,이 연구는 임상 적으로 관련된 엔드 포인트를 가진 중재 연구를위한 새로운 영역을 발견 할 수 있습니다.