Rémission optimisée dans la cirrhose du foie liée à l'alcool (Pro-ALC)

Au Danemark, l'incidence de la cirrhose du foie est augmentée quinquelle pour les hommes et triplée pour les femmes au cours des quarante dernières années. En 2008, environ 15 000 personnes ont reçu un diagnostic de cirrhose du foie. Les patients réadmis à l'hôpital ont une mortalité plus élevée de 90 jours que ceux qui évitent la réadmission.

L'évolution clinique de la cirrhose du foie comprend des complications de l'ascite, de l'encéphalopathie hépatique, des saignements variquetés, du dysfonctionnement rénal et des infections par des admissions répétées à l'hôpital qui aggravent nettement le pronostic. Ces complications sont motivées par le développement de l'hypertension portale dans le foie. Cette progression vers le stade «décompensé» est considérée comme une caractéristique dans le cours de la maladie, car la décompensation est associée à un risque nettement accru de complications et de décès supplémentaires.

Plusieurs études cliniques ont cherché à trouver des remèdes médicaux qui empêchent les complications liées à l'hypertension portale ou ralentissent une progression supplémentaire dans la cirrhose. Pourtant, des preuves croissantes indiquent que les mesures actives du traitement de la cause sous-jacente de la maladie hépatique et l'élimination des agents toxiques provoquant une cirrhose peuvent ralentir la progression de la maladie ou même induire une régression de la cirrhose. Ce concept est décrit comme une récompensation hépatique.

Les caractéristiques cliniques et biochimiques telles que les niveaux d'IMC et d'albumine peuvent être liées à la récompensation, mais il existe un besoin marqué d'études cliniques étudiant de nouveaux biomarqueurs ayant la capacité de prédire et de surveiller l'amélioration de la cirrhose du foie, avec et sans impact de l'alcool.

Entre 75% et 80% des patients atteints de cirrhose hépatique au Danemark ont ​​ou ont eu une consommation nocive d'alcool. La dépendance de l'alcool conduit à l'isolement social, au risque de chômage et à une diminution de la conformité dans les soins de santé (8). La cirrhose est liée à une diminution de la qualité de vie et affecte les patients et les proches émotionnels et socioéconomiques.

Les maladies hépatiques liées à l'alcool (ARLD) ont un impact majeur sur la santé et la vie des patients, et le traitement tourne autour du soulagement symptomatique et de la prévention de nouvelles complications. Il existe un besoin non satisfait d'étudier les options de traitement qui non seulement soulage les complications, mais également aborder les voies sous-jacentes des maladies hépatiques liées à l'alcool, également à des stades graves de la cirrhose liée à l'alcool (ALC). Des études antérieures explorant la récompensation dans ARLD sont rétrospectives et non conçues dans le but exact.

Des facteurs tels que l'IMC, le sexe féminin et l'hypertension portale mineure sont connus pour être associés à une probabilité accrue de récompensation. Des facteurs supplémentaires d'activation génétique et de biomarqueurs moléculaires du protéome et du lipidome n'ont attiré l'attention mineure, et l'impact du traitement des moteurs de la décompensation, de l'hypertension portale et de la consommation d'alcool, et leur impact sur la cause naturelle de la maladie, n'ont pas été abordés.

L'unité gastro, l'hôpital Amager-Hvidovre (AHH), a une superficie record de 550 000 citoyens au sud et à l'ouest de Copenhague. L'unité gastro est la plus grande du Danemark, avec app. 90 admissions quotidiennement. 140 personnes sont diagnostiquées chaque année avec une cirrhose du foie dans notre département, soit par renvoi de la pratique générale, soit par les débuts de la maladie lors de l'admission à l'hôpital. De novembre 2019 à mars 2022, 357 patients ont été évalués pour la cirrhose du foie dans l'unité gastro. 20% de ceux-ci sont morts dans les douze mois. 75% avaient la consommation d'alcool comme principale cause de cirrhose du foie.

De nouvelles technologies moléculaires et une prédiction des risques La physiopathologie moléculaire de l'ARLD est incomplètement comprise. La caractérisation de la dynamique du protéome à travers le spectre de l'ALD pourrait fournir de nouvelles informations sur les mécanismes de la maladie à la fois de progression et de rémission de la maladie. Les progrès récents de la protéomique basée sur la SEP ont considérablement étendu son impact sur la recherche biomédicale et clinique. Il permet l'identification et la quantification de milliers de protéines, ce qui le rend adapté à l'étude des mécanismes de la maladie et à l'identification des biomarqueurs. Des études antérieures ont évalué le protéome dans les maladies hépatiques stéatotiques associées au dysfonctionnement métabolique (la purée) et la fibrose liée à l'alcool, et les profils protéomiques ont montré une forte association à la gravité de la maladie du foie. Des études avec un suivi consécutif dans les stades graves de l'ALC sont toujours manquantes.

La protéomique basée sur la SEP peut identifier les biomarqueurs de la valeur prédictive dans la clinique, en particulier dans la perspective d'une rémission de la maladie. Le lien avec les données cliniques et les résultats peut soutenir l'utilisation de biomarqueurs protéomiques dans la prédiction et la surveillance de la rémission en AH et la récompensation dans ALC.

Plusieurs marqueurs de l'inflammation et des cytokines sont impliqués dans la conduite de la décompensation et ont le potentiel de prédire le risque de décès précoce. On ne sait pas si ces marqueurs peuvent prédire la rémission et la récompensation dans ALC et AH. Des études antérieures ont évalué les relations entre l'inflammation et la mortalité, mais des études prospectives étudiant les associations entre les biomarqueurs du métabolisme et du pronostic, la surveillance et l'efficacité du traitement OG dans l'ALC sont manquantes.

Transcriptomique et activation des gènes dans la progression et la rémission de la maladie du foie La complexité moléculaire et cellulaire du microenvironnement hépatique reste un obstacle clé entravant le développement de traitements potentiels. Les études antérieures sur le séquençage de l'ARN sont faibles et sans suivi.

Avec les progrès des puces génétiques et du séquençage à haut débit, plusieurs signatures de gènes pronostiques ont été établies pour prédire la survie globale dans la cirrhose du foie.

Des études récentes de séquençage d'ARN à cellule unique et de séquençage d'ARN en vrac ont montré que des lignées spécifiques mésenchymateuses, endothéliales et monocytes sont enrichies dans des foies cirrhotiques.

Le séquençage d'ARN des tissus entiers (en vrac) fournit une lecture moyenne de la teneur en ARN d'un échantillon, qui représente des signaux d'ARN mixtes à partir des différentes cellules présentes dans le tissu et est donc significativement influencée par la prévalence de type cellulaire. Par rapport au séquençage d'ARN unique (SCRNA-SEQ), le séquençage de l'ARN en vrac ne peut pas être utilisé pour étudier les populations de cellules rares, ou des sous-populations de cellules pathogènes spécifiques, mais elle donne un aperçu des modèles de transcription des gènes pathogènes et de dysfonctionnement cellulaire, en particulier lorsqu'il est lié au phénotype clinique et par rapport à un bibliothèque de tissus animés SCRNA de SCRNA.

Aucune étude n'a précédemment comparé les changements dans le transcriptome après l'élimination des agents toxiques causant des lésions hépatiques.

Dans l'ALC, il est nécessaire d'étudier les options de traitement qui traitent des voies sous-jacentes de l'ARLD, également à des stades graves de la cirrhose. L'induction de la récompensation prolongera à la fois la survie et la vie quotidienne «sans admission» des patients atteints d'ALC.

Objectifs L'objectif global de la présente étude est d'étudier le profil moléculaire et les voies chez les personnes atteintes de l'ALD pour soutenir la surveillance et le suivi personnalisés dans la cirrhose du foie.

Hypothèse Le pronostic de l'ALC varie en fonction de l'apport continu ou cessé d'alcool. L'alcool peut influencer la survie et la récompensation dans l'ALC. L'alcool peut influencer le profil moléculaire de chaque personne atteinte d'ALC et donc un impact sur les admissions, les réadmissions et la progression de l'hôpital de la cirrhose du foie.

Une meilleure connaissance du profil moléculaire des personnes atteintes d'ALC, en combinaison avec les caractéristiques cliniques de la santé et de la performance physique du patient, nous permettra de planifier et d'administrer des actions de traitement, de suivi et de suivi personnalisés des personnes atteintes d'ALC.

Un aperçu plus approfondi des mécanismes moléculaires de la progression de la conduite du foie et de la rémission de la cirrhose - en combinaison avec les données cliniques - soutenons notre capacité à prédire les résultats dans la cirrhose, faciliter la surveillance et le suivi personnalisés et soutenir le traitement droit et opportun pour le bon patient. Les résultats peuvent également soutenir le développement de nouvelles cibles de médicaments moléculaires pour le traitement et la prévention de la cirrhose à l'avenir.

Méthodes L'étude est une cohorte d'incidence dans laquelle les patients seront suivis du diagnostic à la mort ou du retrait de la cohorte. Nous chercherons à inclure des patients consécutivement dans les trois mois suivant le diagnostic. Les résultats seront rapportés après les directives stroboscopiques.

Sujets de l'étude Toutes les personnes ayant une référence initiale à l'étude pour et diagnostiquer de la cirrhose du foie liée à l'alcool dans l'unité gastro, et tous les patients avec les débuts de la cirrhose du foie liée à l'alcool pendant l'admission, quelle que soit la raison de l'admission, sont éligibles à l'inclusion.

Cette étude ne compromet pas le diagnostic ou le traitement de la cirrhose ou des comorbidités, et l'inclusion dans les études interventionnelles pendant le suivi prospectif est possible.

Recrutement Tous les patients avec les débuts de la cirrhose du foie soupçonnés d'être liés à la consommation d'alcool, et quel que soit le temps et les circonstances de diagnostic, les comorbidités et la gravité de la maladie seront offertes à l'inclusion dans la cohorte. Tous les participants seront engagés par le médecin ou l'infirmière assurant une norme de soins. Tous les participants seront informés par écrit ainsi que par voie orale par les enquêteurs de l'étude et les infirmières du projet.

Intervention de l'arrêt de l'alcool et norme de soins Tous les patients atteints d'ALC traités dans l'unité gastro, AHH, et donc tous les participants de cette étude se verront offrir la norme de traitement des soins. Cela comprend des investigations avec la biochimie standard, l'échographie, le fibroscan, le CT-scan et l'endoscopie, ainsi que les suppléments nutritionnels, le traitement médical pour la cirrhose et les complications et les comorbidités.

L'intervention de l'arrêt de l'alcool sera offerte en tant que traitement de la norme de soins à tous les patients atteints d'ALC. L'intervention comprend le traitement médical des symptômes et de la soif de sevrage, et un soutien à la référence aux offres municipales de traitement de l'alcool. En outre, dans le but de faciliter l'arrêt de l'alcool et de soutenir un traitement supplémentaire de l'alcool dans le secteur primaire, les patients se verront offrir des entretiens de motivation (MI) dans le cadre de leur traitement.

Les patients et les soignants possibles seront invités à trois séances MI menées par des infirmières spécialisées de la clinique hépatique dans les trois premiers mois suivant le diagnostic.

Données des revues de patients Dans cette étude, nous récupérerons les informations du Journal du patient après le consentement écrit.

Les données extraites des revues de patients avant d'obtenir le consentement sont limitées au diagnostic de l'ALC, au temps du diagnostic et à la cause de l'admission ou de la référence à l'hôpital qui a conduit au diagnostic de l'ARLD. Les données biométriques obtenues avant le consentement écrit à la participation ne seront pas récupérées pour l'étude. Ces données peuvent être collectées d'une période de zéro à trente jours avant l'inclusion et seront transmises aux chercheurs des cliniciens et au personnel de l'étude.

Les données et les informations personnelles sont enregistrées et surveillées après la législation actuelle, la loi sur la protection des données, et comme indiqué par le règlement général sur la protection des données.

Les analyses génétiques de l'ADN seront extraites des cellules sanguines, du sang total et des selles des participants. L'ADN sera stocké à -80C, jusqu'à une analyse plus approfondie. Le génotypage sera effectué avec un GWAS-Chip (c'est-à-dire Cartographie génomique ciblée) utilisant Illumina Exomechip enrichie pour les variantes à changement de protéine à grands effets. Les variantes ultra-rare (<1/1000) ne seront pas capturées. Les résultats des analyses génétiques combinées à des données cliniques peuvent identifier les gènes associés à la mortalité, à la survie et à la gravité de la maladie dans un contexte de «profilage des risques». L'analyse génomique comprend des variantes communes et un profilage de score de risque polygénique sur des variantes communes. Le séquençage du génome entier ne sera pas effectué.

Les analyses génétiques sur l'ADN bactérien à partir des selles seront utilisées pour des analyses comparatives de l'interaction entre le dysfonctionnement intestinal et la cirrhose hépatique.

Les transcriptomiques, la métabolomique et la protéomique pour l'identification de nouveaux marqueurs potentiels impliqués dans le développement, la progression et la rémission de l'ALC, la transcriptomique, la métabolomique et la protéomique seront effectués sur le tissu hépatique et le sang. Les analyses évalueront les niveaux d'expression et la localisation cellulaire de biomarqueurs possibles, y compris les récepteurs et les ligands ainsi que les molécules de signalisation en aval. Les techniques appliquées sont décrites ci-dessous. Avec les données cliniques, les résultats amélioreront la compréhension des facteurs possibles pour la rémission et la progression de l'ARLD.

Le domaine des tanchnologies omiques de découverte évolue rapidement, et les méthodes peuvent être soumises à des adaptations à la qualité sécurisée, à la pertinence et aux meilleurs prix pour l'analyse.

Analyse de la protéomique L'analyse des échantillons de plasma garantit un taux de réussite élevé et un échantillonnage répété au fil du temps est facilement toléré par les patients. Des biopsies hépatiques à dérivation instantanée seront collectées au départ et à 12 mois pour analyse. La préparation des échantillons et de la chromatographie liquide et de l'analyse de la spectrométrie de masse (LC / MS) suivra les technologies décrites précédemment depuis Torben Hansen et Center for Basic Metabolic Research (CBMR), Copenhagen University. Dans l'analyse du protéome plasmatique à un seul coup, le mélange de peptides est un système LC élué sur Evosep One (Evosep Biosystems) en ligne à un spectromètre de masse Orbitrap Exploris 480.

Analyses lipidomiques:

L'analyse est effectuée conformément aux procédures existantes de pointe et modifiées pour appliquer la meilleure technologie disponible.

Après la préparation du plasma, la séparation chromatographique est effectuée sur la colonne CO18 ACQUITY des eaux (1,7 μm x 2,1 mm x 100 mm) en utilisant le gradient de deux phases mobiles standard (la phase mobile A contient de l'eau, 0,1% d'acide formique et 10 ml de l'acétate d'ammonium 1m, la phase mobile B composent l'isopropanol et l'acétonitrile (1: 1) avec le même addition de l'acide formel et de l'acétonitle).

L'identification de la spectrométrie de masse des composés est ciblée sur la base d'une bibliothèque préfabriquée de métabolites cibles dans le plasma.

Sur la base des résultats des analyses lipidomiques, nous sélectionnerons un panel de marqueurs de diagnostic, qui décrira le plus efficacement la vitesse de la progression de la maladie. Pour les biomarqueurs sélectionnés, nous développerons une méthode quantitative absolue, basée sur la méthodologie LC-MS-MS (triple quadrupol MS en mode MRM), en utilisant des composés standard disponibles dans le commerce, y compris les composés étiquetés à isotope stable comme normes internes. La méthode sera validée en fonction des protocoles standardisés. Dans le cas de résultats réussis, nous serons en mesure de fixer des limites de concentration des biomarqueurs du panel pour la prédiction de la progression lente, moyenne et rapide de la maladie, ainsi que à long terme, rendez la méthode prête à transférer dans les laboratoires cliniques et la médecine personnalisée.

L'analyse biologique et la gestion des données de la protéomique et de la lipidomique auront lieu au CBMR.

Les analyses des transcriptomomiques et les biostatistiques seront effectuées au Center for Basic Metabolic Research.

Le séquençage de l'ARN en vrac fournit un paysage de transcription à l'échelle du tissu et permet une étude profonde sur le transcriptome, mais il ne distingue pas entre les cellules individuelles. Pour identifier les gènes qui jouent un rôle important dans la progression ou la récompensation de l'AH, nous comparerons les ensembles de données du séquençage d'ARN en vrac dans AH à des ensembles de données déjà établis à partir du séquençage des RN à cellule unique du foie.

Sur la base de gènes qui sont simultanément suggérés par l'ARN en vrac dans nos échantillons et SCRNASEQ, nous pouvons explorer les principaux régulateurs transcriptionnels de l'ALC.

Nous utiliserons cette ressource pour déconvoluter par calcul les données du transcriptome en vrac des biopsies hépatiques pour estimer l'abondance relative de chaque type cellulaire du foie (hépatocyte, cellules stellées hépatiques, cellules épithéliales sinusoïdales hépatiques, etc.) chez chaque patient. Les régulateurs possibles de la maladie de la progression et de la récompensation seront évalués.

Recherche Biobank Une biobanque sera établie pour l'étude. La biobanque contiendra du sang recueilli au départ, trois mois, 1 et 3 ans, et les tissus du foie et les selles collectées au départ et après 1 an. À chaque instant, 15 ml de sang et 3 grammes de selles sont collectés. Au départ et après 1 an, 0,2 gramme de tissu hépatique sera collecté. Si un participant a une ascite et a besoin d'une paracentèse, une biopsie des graisses sous-cutanées sera tirée du point d'incision sur l'abdomen.

Le matériau excédentaire de l'étude sera transféré dans une biobanque pour de futures recherches.

Perspectives L'étude contribuera à une meilleure caractérisation des maladies hépatiques avancées liées à l'alcool et contribuera à une future organisation améliorée des offres de traitement et de réhabilitation aux patients atteints d'une maladie du foie. Une caractérisation approfondie et une inclusion consécutive amélioreront notre compréhension de l'incidence, de la prévalence et de l'impact de l'ALC dans la population, ainsi que de l'utilisation des ressources de soins de santé attribuées à son traitement.

Un aperçu plus approfondi des mécanismes moléculaires de la progression et de la rémission du foie, en combinaison avec les données cliniques, soutiendra notre capacité à prédire les résultats dans la cirrhose, facilitera une surveillance personnalisée visant à fournir le bon traitement pour le bon patient au bon moment.

L'étude de cohorte prospective contribuera en outre à l'identification de facteurs de risque non identifiés auparavant importants pour la survie et l'utilisation de services de santé; et constituent ainsi la base de la mise en œuvre des changements dans les pratiques de santé qui offrent des avantages économiques et médicaux. De plus, l'étude peut découvrir de nouveaux domaines de recherche interventionnelle avec des critères d'évaluation cliniquement pertinents.