Optimalizált remisszió az alkohollal kapcsolatos májcirrózisban (Pro-ALC)

Dániában a májcirrhosis előfordulási gyakorisága ötszörösére növekszik a férfiak számára, és az elmúlt negyven évben megháromszorozódott a nők számára. 2008 -ban körülbelül 15 000 embert diagnosztizáltak májcirrózisban. A kórházba visszafogadott betegek magasabb 90 napos halálozással rendelkeznek, mint azok, akik elkerülik a visszafogadást.

A májcirrózis klinikai lefolyása magában foglalja az ascites szövődményeit, a máj encephalopathia, a varicealis vérzést, a vese diszfunkciót és a kórházba történő ismételt befogadással rendelkező fertőzéseket, amelyek jelentősen romlanak a prognózissal. Ezeket a szövődményeket a májban a portális hipertónia kialakulása vezérli. Ezt a „dekompenzált” szakaszba való előrehaladást a betegség kurzusának fémjelének tekintik, mivel a dekompenzáció a további szövődmények és halál jelentősen megnövekedett kockázatával jár.

Számos klinikai vizsgálat arra törekedett, hogy olyan orvosi gyógyszereket találjon, amelyek megakadályozzák a portális hipertóniával kapcsolatos szövődményeket, vagy lassítják a cirrhosis további progresszióját. Ugyanakkor a növekvő bizonyítékok azt mutatják, hogy a májbetegség mögöttes okának és a cirrhosisot okozó mérgező szerek eltávolításának aktív mérései lassíthatják a betegség előrehaladását, vagy akár a cirrhosis regresszióját indukálhatják. Ezt a koncepciót májkompenzációnak nevezik.

A klinikai és biokémiai tulajdonságok, például a BMI és az albumin szintek összekapcsolhatók a kompenzációval, de jelentős szükség van a klinikai vizsgálatokra, amelyek új biomarkereket vizsgálnak, amelyek képesek az alkohollal és anélkül a májcirrhosis javulásának előrejelzésére és monitorozására.

A Dániában a májcirrózisban szenvedő betegek 75 és 80% -a között káros az alkohol. Az alkoholfüggőség a társadalmi elszigeteltséghez, a munkanélküliség kockázatához és az egészségügyi ellátás csökkentésének csökkentéséhez vezet (8). A cirrhosis a csökkent életminőséghez kapcsolódik, és érzelmi és társadalmi -gazdasági szempontból is érinti a betegeket és a rokonokat.

Az alkohollal kapcsolatos májbetegség (ARLD) jelentős hatással van a betegek egészségére és életére, és a kezelés a tüneti enyhítés és a további szövődmények megelőzése körül forog. Kielégítetlen szükség van a kezelési lehetőségek kivizsgálására, amelyek nemcsak enyhítik a szövődményeket, hanem az alkohollal kapcsolatos májbetegség alapjául szolgáló útvonalakkal is foglalkoznak, az alkohollal kapcsolatos cirrhosis (ALC) súlyos szakaszaiban is. Az ARLD -ben a kompenzációt feltáró korábbi tanulmányok retrospektív és nem a pontos célra készültek.

Az olyan tényezők, mint a BMI, a nők neme és a kisebb portális hipertónia, ismertek, hogy a kompenzáció megnövekedett valószínűségével járnak. A genetikai aktiválás és a proteom és a lipidóm molekuláris biomarkerek további tényezői csak kisebb figyelmet fordítottak, és nem foglalkoztak a dekompenzáció, a portális hipertónia és az alkoholfogyasztás hajtóerejének kezelésére, valamint a betegség természetes okára gyakorolt ​​hatásaikat.

A Gastro egység, az Amager-Hvidovre Kórház (AHH) rekordterülete 550 000 állampolgár, Koppenhága déli és nyugati részén. A gastro egység a legnagyobb Dániában, az alkalmazásban. 90 felvételi naponta. Az osztályunkban évente 140 embert diagnosztizálnak májcirrózissal, akár az általános gyakorlatból, akár a kórházi felvétel során a betegség debütálásával. 2019 novemberétől 2022 márciusáig 357 beteget értékeltek a Gastro egység májcirrózisában. Ezek 20 % -a tizenkét hónapon belül halt meg. 75% -uk volt alkoholfogyasztás a májcirrózis elsődleges okaként.

Új molekuláris technológiák és kockázat -előrejelzés Az ARLD molekuláris patofiziológiája nem teljes mértékben érthető. A proteomdinamika jellemzése az ALD spektrumában új betekintést nyújthat a betegség progressziójának és a betegség remissziójának betegségmechanizmusaiba. Az MS-alapú proteomika legújabb fejlődése jelentősen meghosszabbította hatását az orvosbiológiai és klinikai kutatásokra. Ez lehetővé teszi több ezer fehérje azonosítását és számszerűsítését, így alkalmassá teszi a betegségmechanizmusok tanulmányozására és a biomarkerek azonosítására. A korábbi vizsgálatok a metabolikus diszfunkcióval összefüggő szteatotikus májbetegség (MASH) és az alkohollal kapcsolatos fibrózis proteomáját vizsgálták, és a proteomikus profilok szorosan összefüggést mutattak a májbetegség súlyosságával. Az ALC súlyos szakaszaiban egymást követő nyomon követéssel végzett vizsgálatok még mindig hiányoznak.

Az MS-alapú proteomika azonosíthatja a prediktív értékű biomarkereket a klinikán, különösen a betegség remissziójának kilátásában. A klinikai adatokhoz és az eredményekhez való kapcsolódás támogathatja a proteomikus biomarkerek használatát az AH -ban a remisszió előrejelzésében és monitorozásában és az ALC -ben történő felvételek során.

A gyulladás és a citokinek számos markere részt vesz a dekompenzáció vezetésében, és megjósolhatja a korai halál kockázatát. Nem ismert, hogy az ilyen markerek képesek -e megjósolni a remissziót és a felvételeket az ALC -ben és az AH -ban. A korábbi vizsgálatok értékelték a gyulladás és a mortalitás közötti kapcsolatokat, de a metabolizmus biomarkerei és a prognózis, a monitorozás és a hatékonyságú kezelést vizsgáló prospektív vizsgálatok az ALC -ben hiányoznak az OG -kezelés között.

Transzkriptika és gén aktiválása a májbetegség progressziójában és remissziójában A máj mikrokörnyezetének molekuláris és sejtkomplexitása továbbra is kulcsfontosságú akadály, amely akadályozza a potenciális kezelések kialakulását. Az RNS szekvenálással végzett korábbi vizsgálatok kicsik és nyomon követik.

A gén chipek és a nagy áteresztőképességű szekvenálás fejlődésével számos prognosztikai gén aláírást állapítottak meg a májcirrózis általános túlélésének előrejelzésére.

A legújabb sejt RNS -szekvenálási és ömlesztett RNS -szekvenálási vizsgálatok kimutatták, hogy a specifikus mezenchimális, endothel és monocita vonal dúsul a cirrhotikus májban.

A teljes szövet (ömlesztett) RNS -szekvenálás a minta RNS -tartalmának átlagos leolvasását biztosítja, amely a szövetben lévő különböző sejtek vegyes RNS -jeleit képviseli, és így szignifikánsan befolyásolja a sejttípus prevalenciája. Az egysejtű RNS szekvenáláshoz (SCRNA-SEQ) összehasonlítva a tömeges RNS szekvenálás nem használható fel ritka sejtpopulációk vagy specifikus patogén sejtek alpopulációinak tanulmányozására, de betekintést nyújt a patogén gén-transzkripció és a celluláris diszfunkció mintáiba, és összehasonlítva a májtiszku ScRNA-seq könyvtárával.

Korábban egyetlen tanulmány sem hasonlította össze a transzkriptom változásait a májkárosodást okozó mérgező szerek eltávolítása után.

Az ALC -ben kielégítetlen szükség van az ARLD alapjául szolgáló, a cirrhosis súlyos szakaszaiban is. A kompenzáció indukciója meghosszabbítja az ALC -ben szenvedő betegek túlélését és „befogadásától mentes” mindennapi életét.

CÉLKITŰZÉSEK A jelen tanulmány általános célja az ALD-ben szenvedő személyek molekuláris profiljának és útvonalainak vizsgálata a személyre szabott megfigyelés és nyomon követés támogatása érdekében a májcirrózisban.

Hipotézis Az ALC prognózisa a folyamatos vagy abbahagyott alkoholfogyasztástól függően változik. Az alkohol befolyásolhatja az ALC túlélését és kompenzációját. Az alkohol befolyásolhatja az ALC -vel rendelkező személyek molekuláris profilját, és ezáltal befolyásolhatja a kórházi felvételt, visszafogadást és a májcirrózis progresszióját.

Az ALC-vel rendelkező személyek molekuláris profiljának jobb ismerete a beteg egészségének és fizikai teljesítményének klinikai jellemzőivel kombinálva lehetővé teszi számunkra, hogy megtervezzük és elvégezzük a személyre szabott kezelés, az ALC-vel rendelkező emberek személyre szabott intézkedéseit és nyomon követését.

A májmolekuláris mechanizmusok mélyebb betekintése a cirrhosis progressziójának és remissziójának a klinikai adatokkal való kombinációjába-alátámasztja a cirrhosis kimenetelének előrejelzésének képességét, megkönnyíti a személyre szabott monitorozást és nyomon követést, és támogatni kell a megfelelő betegek jobb és időben történő kezelését. Az eredmények támogathatják az új molekuláris gyógyszercélok fejlesztését a cirrhosis kezelésére és megelőzésére a jövőben.

Módszerek A vizsgálat egy olyan incidencia kohort, amelyben a betegeket a diagnózistól a halálig vagy a kohortból való kilépésig tartják. Arra törekszünk, hogy a diagnózistól számított három hónapon belül egymást követően beépítsük a betegeket. Az eredményeket a Strobe irányelvei után kell jelenteni.

A vizsgálati alanyok minden olyan személyt, aki kezdeti áttekintést nyújt az alkohollal kapcsolatos májcirrózis vizsgálatához és diagnosztizálásához a gastro egységben, és minden olyan beteg, aki az alkohollal kapcsolatos májcirhosis debütálása során debütál a befogadás során, a befogadás okától függetlenül jogosult a felvételre.

Ez a tanulmány nem veszélyezteti a diagnosztikát vagy a cirrhosis vagy a komorbiditások kezelését, és lehetséges az intervenciós vizsgálatokba való beillesztés a prospektív nyomon követés során.

Toborzás Az összes beteg, a májcirrhosis debütáló betegének az alkoholfogyasztással kapcsolatos, és függetlenül a diagnózis, a komorbiditások és a betegség súlyosságától függetlenül a kohorszba történő beillesztést. Az összes résztvevőt az orvos vagy a nővér foglalkoztatja, aki gondoskodást nyújt. Minden résztvevőt írásban és orálisan tájékoztatnak a vizsgálók és a projekt ápolók.

Alkohol abbahagyás beavatkozása és az ellátás standardja Az AHH gastro egységben kezelt összes beteget, és ezért a tanulmány minden résztvevőjét felajánlják az ápolási kezelés színvonalán. Ez magában foglalja a szokásos biokémiai, ultrahang, fibroszkán, CT-scan és endoszkópiával, valamint táplálkozási kiegészítőkkel, cirrhosis és szövődmények orvosi kezeléssel, valamint komorbiditásokkal végzett vizsgálatokat.

Az alkohol abbahagyási beavatkozását az ALC -ben szenvedő betegek számára az ápolási kezelés standard formájában kínálják. A beavatkozás magában foglalja az elvonási tünetek orvosi kezelését és a vágyat, valamint az alkoholkezelés önkormányzati ajánlataihoz való támogatást. Ezenkívül az alkoholszünet megkönnyítése és az elsődleges ágazat további alkoholkezelésének támogatása céljából a betegeket motivációs interjút (MI) kínálják kezelésük részeként.

A betegeket és az esetleges gondozókat a diagnózis utáni első három hónapban meghívják három MI -ülésre, amelyet a májklinika speciális ápolók végeznek.

Ebben a tanulmányban szereplő betegek folyóiratokból származó adatok az írásbeli hozzájárulás után az információkat a Páciens Journal -ból szerezzük be.

A beteg folyóiratokból származó, a beleegyezés megszerzése előtt beolvasott adatok az ALC diagnosztizálására, a diagnózis idejére, valamint a kórházi felvételre vagy áttételre korlátozódnak, amely az ARLD diagnosztizálásához vezetett. A részvételhez az írásbeli hozzájárulás előtt beszerzett biometriai adatokat nem kapják meg a vizsgálathoz. Ezeket az adatokat a beillesztést megelőzően nulla és harminc nappal összegyűjthetik, és továbbadhatják a klinikusok nyomozóinak és a vizsgálati személyzetnek.

Az adatokat és a személyes információkat a jelenlegi jogszabályok, az adatvédelmi törvény, valamint az általános adatvédelmi rendelet szerinti szabályozás szerint regisztrálják és ellenőrzik.

Genetikai elemzések A DNS -t a vérsejtekből, a teljes vérből és a székletből a résztvevőkből extrahálják. A DNS -t -80 ° C -on tároljuk a további elemzésig. A genotípus-készítést GWAS-chip-rel végezzük (azaz Célzott genomi feltérképezés) az Illumina exomechip alkalmazásával, amelyet dúsított a fehérjékváltozó, nagy hatású variánsok. Az ultra-ritka variánsokat (<1/1000) nem fogják elfogni. A klinikai adatokkal kombinált genetikai elemzések eredményei azonosíthatják a mortalitással, a túléléssel és a betegség súlyosságával kapcsolatos géneket a „kockázati profilozás” kontextusban. A genomialis elemzés a közös variánsok általános variánsokat és a poligén kockázati pontszám profilját foglalja magában. A teljes genom szekvenálást nem hajtják végre.

A széklet baktérium -DNS -jének genetikai elemzéseit a bél diszfunkció és a májcirrózis közötti kölcsönhatás összehasonlító elemzésére fogják használni.

Transzkriptika, metabolomika és proteomika az új potenciális markerek azonosításához, amelyek részt vesznek az ALC fejlődésében, progressziójában és remissziójában, a transzkriptika, a metabolomika és a proteomika, a májszövet és a vér területén. Az elemzések értékelik a lehetséges biomarkerek expressziós szintjét és a sejtek lokalizációját, beleértve a receptorokat és a ligandumokat, valamint a downstream jelátviteli molekulákat. Az alkalmazott technikákat az alábbiakban ismertetjük. A klinikai adatokkal együtt az eredmények javítják az ARLD remissziójának és progressziójának lehetséges mozgatórugóinak megértését.

A Discovery omics Tenchnologies területe gyorsan fejlődik, és a módszereket a biztonságos minőséghez, relevanciához és az elemzéshez való legjobb díjakhoz adaptálhatják.

A plazmaminták proteomikai elemzésének elemzése biztosítja a magas sikerességi sebességet, és az ismételt mintavételt az idő múlásával a betegek könnyen tolerálhatják. A pillanatnyi májbiopsziákat az alapvonalon és 12 hónapon belül összegyűjtik az elemzés céljából. A minták, valamint a folyadékkromatográfia és a tömegspektrometria (LC/MS) elemzése előkészítése a Torben Hansen és az Alapvető Metabolikus Kutatóközpont (CBMR), a Koppenhágai Egyetemen korábban leírt technológiákat követi. Az egylövésű plazma proteom elemzés során a peptidkeveréket eluálták EVOSEP ONE LC rendszer (EVOSEP Biosystems), amely online az Orbitrap Exporis 480 tömegspektrométerhez kapcsolódik.

Lipidomics elemzések:

Az elemzést a legmodernebb meglévő eljárások szerint hajtják végre, és módosítják a rendelkezésre álló legjobb technológia alkalmazására.

A plazma előkészítése után kromatográfiás elválasztást hajtunk végre a Waters Acquity BEH C18 oszlopon (1,7 μm x 2,1 mm x 100 mm), két standard mobilfázis gradiensével (az A mozgó fázisú, 0,1% -os formidsavat és 10 ml 1 m ammónium -acetátot tartalmaz, a B fázisú B fázis az izopropanolt és acetonitonitrilt (1: 1).

A vegyületek tömegspektrometriás azonosítását a plazmában egy előre elkészített cél metabolitok könyvtára alapján célozzák meg.

A lipidomikai elemzések eredményei alapján kiválasztunk egy diagnosztikai markerek panelt, amely a leghatékonyabban leírja a betegség előrehaladásának sebességét. A kiválasztott biomarkerekhez abszolút kvantitatív módszert dolgozunk ki, amely az LC-MS-MS (hármas négyszer MS MRM módban) módszertanon alapul, a kereskedelemben kapható standard vegyületek felhasználásával, beleértve a stabil izotóp-jelölt vegyületeket belső standardként. A módszert a szabványosított protokollok szerint validálják. A sikeres eredmények esetén képesek leszünk beállítani a panel biomarkerek koncentrációs határait a lassú, közepes és gyors betegség előrehaladásának előrejelzésére, valamint hosszú távon, és készen állunk arra, hogy a módszer készen álljon a klinikai laboratóriumokba és a személyre szabott orvoslásba való áttéréshez.

A proteomika és a lipidomika biológiai elemzését és adatkezelését a CBMR -en fogják megtartani.

A transzkriptomomikai elemzések elemzéseket és biostatisztikákat végeznek az alapvető metabolikus kutatások központjában.

Az ömlesztett RNS szekvenálás szövetszintű transzkripciós tájat biztosít, és lehetővé teszi a transzkriptom mély vizsgálatát, de nem különbözteti meg az egyes sejteket. Az AH progressziójában vagy felvételében fontos szerepet játszó gének azonosítása érdekében összehasonlítjuk az AH tömeges RNS -szekvenálásának adatkészleteit a már kialakult adatkészletekkel a máj egysejtű RNS szekvenálásából.

A mintáinkban és az SCRNASEQ-ban egyidejűleg javasolt gének alapján, amelyeket az ömlesztett-RNS egyidejűleg javasol, feltárhatjuk a legfontosabb transzkripciós szabályozókat az ALC-ben.

Ezt az erőforrást felhasználjuk a májbiopsziák ömlesztett transzkriptom adatainak számítására, hogy megbecsüljük a máj minden sejttípusának relatív mennyiségét (májsejtek, májsejt -sejtek, máj szinuszos hámsejtek stb.) Az egyes betegekben. Megvizsgálják mind a progresszió, mind a kompenzáció esetleges betegségszabályozóit.

Kutatási biobank biobankot fognak létrehozni a vizsgálathoz. A biobank a kiindulási, három hónap, 1 és 3 év, valamint a májszövet és a széklet alapvonalon és egy év után összegyűjtött vért tartalmaz. Minden időpontban 15 ml vért és 3 gramm székletet gyűjtünk. A kiindulási állapotban és 1 év után 0,2 gramm májszövetet gyűjtünk. Ha egy résztvevőnek Ascites és paracentesisre van szüksége, akkor szubkután zsírbiopsziát vesznek a has bemetszéséből.

A tanulmány többlet anyagát a jövőbeli kutatás céljából biobankba továbbítják.

Perspektívák A tanulmány hozzájárul az alkohollal kapcsolatos előrehaladott májbetegségek jobb jellemzéséhez, és hozzájárul a májbetegségben szenvedő betegek számára a kezelési és rehabilitációs ajánlatok javításához. Az alapos jellemzés és az egymást követő beilleszkedés javítja az ALC előfordulásának, prevalenciájának és hatásainak megértésének megértését, valamint a kezeléshez kiosztott egészségügyi erőforrások felhasználását.

A máj progressziójának és remissziójának molekuláris mechanizmusainak mélyebb betekintése a klinikai adatokkal kombinálva alátámasztja a cirrhosis kimenetelének előrejelzésének képességét, megkönnyíti a személyre szabott monitorozást, amelynek célja a megfelelő beteg megfelelő kezelésének biztosítása a megfelelő időben.

A prospektív kohorsz -tanulmány tovább hozzájárul a túléléshez és az egészségügyi szolgáltatásokhoz szignifikáns azonosítatlan kockázati tényezők azonosításához; Ezáltal az egészségügyi gyakorlatokban bekövetkező változások végrehajtásának alapját képezi, amelyek mind gazdasági, mind orvosi előnyöket nyújtanak. Ezenkívül a tanulmány új területeket fedezhet fel az intervenciós kutatásokhoz klinikailag releváns végpontokkal.