酒精相关肝硬化的优化缓解 (Pro-ALC)

在丹麦，肝硬化的发生率增加了5倍，而在过去的四十年中，女性的发生率增加了两倍。 2008年，大约有15,000人被诊断出患有肝硬化。 被送往医院的患者的死亡率比避免再入院的患者高90天。

肝肝硬化的临床过程包括腹水并发症，肝脑病，静脉曲张出血，肾功能障碍以及反复入院的医院感染，这显着恶化了预后。 这些并发症是由肝脏中门户高血压的发展驱动的。 到“代偿性”阶段的这种进展被认为是疾病病程中的标志，因为代偿性与进一步并发症和死亡的风险显着增加有关。

几项临床研究试图找到可以防止与门户高血压有关的并发症或减缓肝硬化进展的医疗疗法。 然而，越来越多的证据表明，肝病的根本原因治疗的主动测量和导致肝硬化的有毒药物的去除可能会减缓疾病进展，甚至诱发肝硬化的消退。 这个概念被描述为肝脏的补偿。

临床和生化特征（例如BMI和白蛋白水平）可能与重新补偿有关，但是对研究新型生物标志物的临床研究有明显的需求，该研究能够预测和监测肝硬化，且没有酒精的影响。

丹麦肝硬化患者中有75％至80％的患者对酒精有害或有害使用。 酒精的依赖会导致社会隔离，失业风险和医疗保健的依从性下降（8）。 肝硬化与生活质量降低有关，并在情感和社会经济上影响患者和亲戚。

酒精相关的肝病（ARLD）对患者的健康和生活产生了重大影响，治疗围绕着症状缓解和预防进一步的并发症。 在不仅可以缓解并发症的治疗方案，而且还针对酒精相关的肝病的潜在途径，还需要调查治疗方案，在酒精相关的肝硬化（ALC）中也是如此。 先前探索ARLD重新补偿的研究是回顾性的，并非出于确切目的而设计。

已知BMI，女性性别和次要门户高血压等因素与重新补偿的可能性增加有关。 来自蛋白质组和脂肪组的遗传激活和分子生物标志物的其他因素仅吸引了较小的注意力，并且尚未解决治疗失代偿，门户高血压和酒精使用驱动因素及其对疾病自然原因的影响。

Amager-Hvidovre医院（AHH）的胃部单位拥有哥本哈根南部和西部550,000名公民的创纪录面积。 胃部单位是丹麦最大的，带有应用程序。 每天90次入院。 140人在我们部门每年被诊断出患有肝硬化，无论是从一般执业中转诊还是在住院期间首次诊断疾病。 从2019年11月到2022年3月，对357例胃部肝硬化评估了357名患者。 其中20％在十二个月内死亡。 75％的人将酒精用作肝硬化的主要原因。

新颖的分子技术和风险预测ARLD的分子病理生理学尚不完全理解。 在ALD范围内的蛋白质组动力学的表征可以为疾病进展和缓解疾病的疾病机制提供新的见解。 基于MS的蛋白质组学的最新进展极大地扩展了其在生物医学和临床研究中的影响。 它可以鉴定和量化数千种蛋白质，使其适合研究疾病机制和生物标志物的鉴定。 先前的研究已经评估了代谢功能障碍相关的脂肪分裂性肝病（MASH）和与酒精相关的纤维化的蛋白质组，蛋白质组学特征表现出与肝病严重程度的密切相关性。 在ALC的严重阶段进行连续随访的研究仍然缺失。

基于MS的蛋白质组学可以鉴定诊所中的预测价值生物标志物，尤其是在疾病缓解的前景中。 与临床数据和结果的联系可能支持使用蛋白质组学生物标志物在AHC中的AH和RECONSENTICTICT和ALC复位中的缓解中使用。

炎症和细胞因子的几种标记参与驱动代偿化，并有可能预测早期死亡的风险。 尚不清楚此类标记是否可以预测ALC和AH中的缓解和重复。 先前的研究已经评估了炎症与死亡率之间的关系，但是研究了代谢和预后生物标志物之间关联，ALC中的监测和功效治疗之间的关联。

转录组学和基因激活在肝病的进展和缓解中，肝微环境的分子和细胞复杂性仍然是阻碍潜在治疗发展的关键障碍。 先前在RNA测序中的研究很小，随访。

随着基因芯片和高通量测序的进步，已经建立了几种预后基因特征，以预测肝肝硬化的总体存活。

最近的单细胞RNA测序和大量RNA测序研究表明，特定的间质，内皮和单核细胞谱系富含肝硬化肝脏。

整体组织（大量）RNA测序提供了样品中RNA含量的平均读数，该读数代表了组织中存在的不同细胞的混合RNA信号，因此受细胞类型的患病率显着影响。 与单细胞RNA测序（SCRNA-SEQ）相比，大量RNA测序不能用于研究罕见的细胞群或特定的致病细胞亚群，但它确实提供了对致病基因转录和细胞功能障碍模式的见解，尤其是在与临床表型链接时以及与Scrna-scrna-scrna-seq-seq livivir compul of Liver issue comble of Liver-seq of Liver组织相比。

先前没有研究比较去除引起肝损害的有毒药物后转录组的变化。

在ALC中，在严重的肝硬化阶段也没有必要调查解决ARLD潜在途径的治疗方案。 诱导重新补偿将延长ALC患者患者的生存和“无入院”日常生活。

目的是本研究的总体目标是研究ALD患者的分子谱和途径，以支持肝肝硬化的个性化监测和随访。

假设ALC的预后因连续或停止的酒精摄入而异。 酒精可能会影响ALC中的生存和复位。 酒精可能会影响每个人患有ALC的人的分子特征，从而影响医院的入院，再入院和肝肝硬化的进展。

更好地了解ALC患者的分子概况，将结合患者的健康和身体表现的临床特征，使我们能够计划和管理个性化治疗，监测和随访ALC患者的动作。

对肝脏驱动进展和肝硬化的缓解的分子机制的更深入了解将与临床数据结合使用 - 支持我们预测肝硬化结果的能力，促进个性化监测和随访，并支持正确的治疗，并及时治疗正确的患者。 这些发现还可能支持开发新的分子药物靶标，以便将来治疗和预防肝硬化。

方法该研究是一个发生率队列的方法，其中将遵循从诊断到死亡或退出队列的患者。 我们将寻求在诊断后的三个月内连续包括患者。 结果将在频闪指南之后报告。

研究对所有人进行了最初转介的人的研究对胃单位的肝脏肝硬化的研究和诊断，并且在入院期间，所有与酒精相关的肝脏肝硬化的患者均不论入院理由，均符合纳入。

这项研究不会损害肝硬化或合并症的诊断或治疗，并且可以在前瞻性随访期间纳入介入研究。

招募所有患有肝硬化的患者涉嫌与酒精的使用有关，无论诊断时间和诊断情况如何，合并症和疾病的严重程度如何。 所有参与者将由提供护理标准的医师或护士聘请。 研究调查员和项目护士将以书面形式和口头告知所有参与者。

酒精戒烟干预和护理标准所有在胃部单位AHH中接受过ALC治疗的患者，因此，本研究的所有参与者都将获得护理标准。 这包括对标准生物化学，超声，纤维纤维，CT扫描和内窥镜检查的研究，以及营养补充剂，肝硬化和并发症的医疗以及合并症。

酒精戒烟干预将作为所有ALC患者提供护理标准治疗。 干预措施包括治疗戒断症状和渴望的医疗，并支持转介到市政酒精治疗。 此外，为了促进饮酒并支持初级部门的进一步酒精治疗，将为患者提供动机访谈（MI）作为治疗的一部分。

诊断后的头三个月内，将邀请患者和可能的护理人员参加肝诊所专门护士进行的三个MI疗程。

本研究中的患者期刊的数据我们将在提供书面同意后从患者期刊中检索信息。

从患者期刊获得同意之前从患者期刊中获取的数据仅限于诊断ALC的诊断，诊断时间以及导致ARLD诊断的住院或转诊原因。 在研究书面同意之前获得的生物识别数据将不会用于研究。 该数据可以从纳入前的零到三十天收集，并将转移给临床医生研究人员和研究人员。

在当前立法，《数据保护法》以及《通用数据保护法规》中所述，数据和个人信息在当前立法之后进行注册和监视。

遗传分析将从血细胞，全血和参与者的粪便中提取DNA。 DNA将存储在-80C，直到进一步分析。 基因分型将使用GWAS-CHIP进行（即 使用Illumina Exomehip富含蛋白质改变的大型变体的靶向基因组映射）。 将不会捕获超稀有变体（<1/1000）。 遗传分析与临床数据相结合的结果可能会在“风险分析”环境中鉴定与疾病的死亡率，生存和严重程度相关的基因。 基因组分析包括常见变体的常见变体和多基因风险评分分析。 整个基因组测序将不会进行。

对粪便细菌DNA的遗传分析将用于对肠道功能障碍和肝肝硬化之间相互作用的比较分析。

转录组学，代谢组学和蛋白质组学用于鉴定参与ALC的发育，进展和缓解，转录组学，代谢组学和蛋白质组学的新型潜在标记，将在肝组织和血液上进行。 分析将评估包括受体和配体以及下游信号分子在内的可能生物标志物的表达水平和细胞定位。 应用技术如下所述。 与临床数据一起，结果将改善对ARLD缓解和进展的可能驱动因素的理解。

Discovery Omics Tenchologies的领域正在迅速发展，方法可能需要适应以确保质量，相关性和分析的最佳奖品。

血浆样品的蛋白质组学分析可确保患者很容易耐受成功率和随时间重复的抽样率。 将在基线和12个月的分析时收集快速肝活检。 样品和液相色谱和质谱法（LC/MS）分析的制备将遵循哥本哈根大学Torben Hansen和基本代谢研究中心（CBMR）先前描述的技术。 在单发等离子体蛋白质组分析中，将肽混合物在线耦合到Orbitrap Exploris 480质谱仪。

脂质分析分析：

根据现有的最新程序进行分析，并修改以应用最佳的技术。

After plasma preparation, chromatographic separation is performed on Waters Acquity BEH C18 column (1.7μm X 2.1mm X 100 mm) using the gradient of two standard mobile phases (mobile phase A contains water, 0.1% formic acid and 10 ml 1M ammonium acetate, mobile phase B composes isopropanol and acetonitrile (1:1) with the same addition of formic acid and ammonium acetate).

化合物的质谱鉴定是基于等离子体中靶代谢物的预制库。

根据脂质分析分析的结果，我们将选择一组诊断标记，最有效地描述了疾病进展的速度。 对于所选的生物标志物，我们将使用市售标准化合物（包括稳定的同位素标记化合物作为内部标准品，基于LC-MS-MS（MRM模式下的三重四极MS）方法开发一种绝对定量方法。 该方法将根据标准化协议进行验证。 在成功结果的情况下，我们将能够设定面板生物标志物的浓度限制，以预测缓慢，中和快速疾病进展，从而使这种方法可以使该方法准备转移到临床实验室和个性化医学中。

蛋白质组学和脂质组学的生物分析和数据管理将在CBMR进行。

转录组学分析分析和生物统计学将在基本代谢研究中心进行。

大量RNA测序提供了整个组织的转录景观，并可以深入研究转录组，但不能区分单个细胞。 为了确定在AH的进展或重新补偿中起重要作用的基因，我们将比较从AH中的散装RNA测序到已经从肝脏的单细胞RNS测序中建立的数据集进行比较。

基于我们的样品和SCRNASEQ中大量RNA同时提出的基因，我们可以探索ALC中的关键转录调节剂。

我们将利用该资源来计算肝活检的大量转录组数据，以估计每种患者的肝脏类型的相对丰度（肝细胞，肝脏肝脏上皮上皮细胞等）的相对丰度。 将评估进展和复位的可能疾病调节剂。

研究生物库将建立生物库进行研究。 生物库将包含在基线，三个月，1和3年时收集的血液，以及在基线和1年后收集的肝组织和粪便。 在每个时间点，收集15 mL的血液和3克凳子。 在基线和1年后，将收集1,2克肝组织。 如果参与者有腹水和需要穿梭化，则从腹部的切口斑点进行皮下脂肪活检。

研究中的盈余材料将转移到生物库中以进行未来的研究。

该研究的观点将有助于更好地描述与酒精有关的晚期肝病，并有助于改善对肝病患者的治疗和康复提供的未来组织。 彻底的表征和连续包含将增强我们对ALC在人群中的发病率，流行和影响以及分配给其治疗的医疗资源的利用的理解。

对肝脏进展和缓解的分子机制的深入了解将与临床数据结合使用，支持我们预测肝硬化结果的能力，促进了个性化监测，旨在在正确的时间为正确的患者提供正确的治疗方法。

前瞻性队列研究将进一步促进以前未知的危险因素，对生存和使用医疗服务的使用显着；因此，构成了实施提供经济和医疗福利的健康实践变化的基础。 此外，该研究可能会发现具有临床相关终点的介入研究的新领域。