牛乳タンパク質アレルギーを持つ乳児における除去食の腸管粘液バリアへの影響

本研究には、アレルギー専門医により新規非IgE介在性CMPAと診断され、除去食療法を実施し、トルコで指定された2つの病院に申請した、生後26週未満の母乳栄養児が含まれました。アレルギーやアトピー性疾患のない同年齢・同性の乳児とその母親が対照群に含まれました。G*Powerを用いて実施した検出力分析によると、中程度の差を検出するためには、タイプI誤差率5％、検出力85％で合計32名の乳児が必要でした。研究開始時はCMPA乳児20名、健康乳児18名でした。食事遵守不良と脱落により、研究終了時は各群17名ずつとなりました。

データは研究開始時と終了時の2時点で収集されました。各時点で、母親に面接調査を実施し、母親と乳児の3日間の食事記録を取得し、乳児の人体測定値、牛乳タンパク質関連症状スコア（CoMiSS）、便サンプルを収集しました。

症例群の母親は、牛乳タンパク質（CMP）除去食と補完食に関する詳細な指導を受け、1日1000mgのカルシウム補給を受けました。対照群は補完食の指導のみを受けました。遵守状況を監視するため、月次フォローアップを実施しました。症例群の除去食は栄養士により処方・監督され、平均1.9±0.79ヶ月後に「ミルクラダー」プロトコルに従って再導入されました。対照群では、ベースラインから3ヶ月後に最終評価を実施しました。研究終了時には、すべての初期測定を繰り返し、2回目の便サンプルを収集しました。

乳児の体重（kg）、身長（cm）、頭囲（cm）の測定は、医師が世界保健機関が推奨する方法に従い、標準化された体重計、乳児用身長計、伸縮しない巻尺を用いて実施しました。人体測定値［年齢別身長（LFA）、年齢別体重（WFA）、身長別体重（WFL）、年齢別頭囲（HCFA）］は、WHO ANTHROソフトウェアを使用し、Zスコア（zスコア＝患者の値－平均値／標準偏差）に基づいて評価しました。

母親と乳児から3日間の食事記録（平日2日、週末1日）を収集しました。母親の記録は除去食の遵守状況を評価するために使用され、食事療法中に乳製品を摂取した参加者は除外されました。食事量は食事量写真帳を使用して推定しました。1日のエネルギーと栄養素摂取量はBeBiSソフトウェア（バージョン9.0）を用いて分析しました。乳児の摂取量は、食事摂取基準（DRI）の適切な摂取量（AI）基準値と比較して評価しました。母乳摂取量はALSPAC法を用いて推定しました：10分以上の授乳で100mL、5分未満の授乳で50mLとし、0-6ヶ月で780mL/日、7-12ヶ月で600mL/日を基準値としました。

乳児の臨床症状はCoMiSSを用いて評価しました。CoMiSSは、啼泣、逆流、便の性状（ブリストル便スケール）、皮膚症状、呼吸器症状を評価するスコアリングシステムで、総合スコアは0から33の範囲です。

便サンプルは、研究開始時と終了時にスプーン付き容器で収集し、十分な量（≧50mg）を確保しました。サンプルは生物活性の喪失と汚染を防ぐため、-80℃で保存しました。MUC2とsIgA分析は、サンドイッチ酵素免疫測定法により、ヒトMUC2およびヒトsIgA ELISAキットを用いた酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）で実施しました。ヒトMUC2 ELISAキットの感度は0.57 ng/mL、測定範囲は1.57-100 ng/mLです。ヒトsIgA ELISAキットの感度は0.098 µg/mL、測定範囲は0.312-20 µg/mLです。分析プロトコルに従い、サンプルと標準品をマイクロタイタープレートのウェルに複数添加しました。次に、ビオチン標識特異抗体とアビジン-HRP結合体を添加しました。TMB基質で発色後、硫酸を含む停止液で反応を停止しました。吸光度は波長450±10 nmで測定しました。濃度は、得られた光学密度値に基づく標準曲線を用いて算出しました。