消除饮食对牛奶蛋白过敏婴儿肠道黏液屏障的影响

该研究纳入了26周以下经母乳喂养、由过敏专科医生诊断为新发非IgE介导的CMPA、接受消除饮食并申请了土耳其指定两家医院的婴儿。无过敏或特应性疾病的婴儿及其母亲，年龄和性别相似，被纳入对照组。根据使用G*Power进行的功效分析，总共需要32名婴儿才能以5%的I类错误率和85%的功效检测到中等大小的差异。研究开始时包括20名CMPA婴儿和18名健康婴儿。经过饮食不依从和退出后，研究结束时每组各有17名婴儿。

数据在两个时间点收集：研究开始和结束时。在每个时间点，对母亲进行面对面调查，获取母亲和婴儿的三天食物记录，并收集婴儿的人体测量数据、牛乳蛋白相关症状评分（CoMiSS）以及粪便样本。

病例组的母亲接受了关于牛乳蛋白（CMP）消除饮食和辅食喂养的详细培训，并补充了1000毫克/天的钙。对照组仅接受辅食喂养指导。每月进行随访以监测依从性。病例组的消除饮食由营养师开具和监督，平均1.9±0.79个月后按照“牛奶阶梯”方案重新引入。对照组在基线后三个月进行最终评估。研究完成时，重复所有初始测量，并收集第二次粪便样本。

婴儿的体重（公斤）、身长（厘米）和头围（厘米）测量由医生使用标准化秤、婴儿身长计和非弹性卷尺，按照世界卫生组织推荐的方法进行。人体测量指标[年龄别身长（LFA）、年龄别体重（WFA）、身长别体重（WFL）和年龄别头围（HCFA）]使用WHO ANTHRO软件根据Z评分（z评分=患者值-平均值/标准差）进行评估。

从母亲和婴儿处收集三天食物记录（两个工作日，一个周末日）。母亲的记录用于评估消除饮食的依从性，饮食期间摄入乳制品的参与者被排除。使用份量图片书估算份量大小。使用BeBiS软件（版本9.0）分析每日能量和营养摄入量。婴儿的摄入量根据膳食参考摄入量（DRI）的适宜摄入量（AI）参考值进行评估。母乳摄入量使用ALSPAC方法估算：喂养>10分钟为100毫升，喂养<5分钟为50毫升，参考值为0-6个月780毫升/天和7-12个月600毫升/天。

婴儿的临床症状使用CoMiSS评估。CoMiSS是一个评分系统，评估哭闹、反流、粪便类型（布里斯托粪便量表）、皮肤和呼吸道症状，总分范围从0到33。

在研究开始和结束时，使用带勺的容器收集粪便样本，以确保获得足够数量（≥50毫克）。样本在-80°C下储存以防止生物活性丧失和污染。使用人类MUC2和人类sIgA ELISA试剂盒，通过酶联免疫吸附测定（ELISA）方法，采用夹心酶免疫分析法进行MUC2和sIgA分析。人类MUC2 ELISA试剂盒的灵敏度为0.57纳克/毫升，测量范围为1.57-100纳克/毫升。人类sIgA ELISA试剂盒的灵敏度为0.098微克/毫升，测量范围为0.312-20微克/毫升。根据分析协议，样品和标准品以重复形式添加到微孔板孔中。然后，应用生物素缀合的特异性抗体和亲和素-HRP缀合物。在用TMB底物显色后，用含硫酸的终止液停止反应。在450±10纳米波长下测量吸光度。然后使用基于获得的光密度值的标准曲线计算浓度。