Effekt av eliminasjonsdiett på tarmens slimhinnebarrière hos spedbarn med kumelkeproteinallergi

Studien inkluderte ammede spedbarn under 26 uker gamle som ble diagnostisert med ny ikke-IgE-mediert CMPA av en allergolog, hadde en eliminasjonsdiett, og søkte til to sykehus spesifisert i Tyrkia. Spedbarn og deres mødre uten allergier eller atopiske sykdommer, like i alder og kjønn, var i kontrollgruppen. Ifølge kraftanalysen utført med G*Power, var det totalt behov for 32 spedbarn for å oppdage en middels stor forskjell med en type I-feilrate på 5 % og 85 % styrke. Studien startet med 20 spedbarn med CMPA og 18 friske spedbarn. Etter diettoverholdelsesbrudd og frafall, konkluderte studien med 17 spedbarn i hver gruppe.

Data ble samlet inn på to tidspunkter: begynnelsen og slutten av studien. Ved hvert tidspunkt ble det gjennomført ansikt-til-ansikt-spørreundersøkelser til mødrene, tre-dagers matvareopptegnelser ble innhentet for både mødre og spedbarn, og spedbarnenes antropometriske målinger, Cow's Milk Protein-relaterte symptomscore (CoMiSS), og avføringsprøver ble samlet inn.

Mødre i kasusgruppen fikk detaljert opplæring i kuemelkprotein (CMP)-eliminasjonsdieter og tilleggsernæring og ble supplementert med 1000 mg/dag kalsium. Kontrollgruppen fikk kun veiledning i tilleggsernæring. Månedlige oppfølginger ble utført for å overvåke overholdelse. Eliminasjonsdieten i kasusgruppen ble foreskrevet og overvåket av en dietist, med reintroduksjon etter "melkestige"-protokollen etter i gjennomsnitt 1,9±0,79 måneder. I kontrollgruppen ble sluttvurderinger utført tre måneder etter baseline. Ved studiens slutt ble alle innledende målinger gjentatt, og en andre avføringsprøve ble samlet inn.

Spedbarnenes kroppsvekt (kg), lengde (cm) og hodeomkrets (cm) målinger ble tatt av en lege ved bruk av en standardisert vekt, spedbådsmåler og ikke-strekkmålebånd, i samsvar med metoden anbefalt av Verdens helseorganisasjon. Antropometriske målinger [lengde-for-alder (LFA), vekt-for-alder (WFA), vekt-for-lengde (WFL) og hodeomkrets-for-alder (HCFA)] ble vurdert ved bruk av WHO ANTHRO-programvaren i henhold til Z-scorer (z-score=pasientens verdi-gjennomsnittsverdi/standardavvik).

Tre-dagers matvareopptegnelser (to ukedager, én helgedag) ble samlet inn fra mødre og spedbarn. Mødrenes opptegnelser ble brukt til å vurdere overholdelse av eliminasjonsdieten, og deltakere som inntok meieriprodukter under dietten ble ekskludert. Porsjonsstørrelser ble estimert ved bruk av en porsjonsstørrelses billedbok. Daglig energi- og næringsstoffinntak ble analysert ved bruk av BeBiS-programvare (versjon 9.0). Spedbarnenes inntak ble vurdert mot tilstrekkelig inntak (AI) referanseverdier fra Dietary Reference Intakes (DRI). Morsmelkinntak ble estimert ved bruk av ALSPAC-metoden: 100 mL for måltider >10 minutter og 50 mL for måltider <5 minutter, med referanseverdier på 780 mL/dag for 0-6 måneder og 600 mL/dag for 7-12 måneder.

De kliniske symptomene til spedbarn ble vurdert ved bruk av CoMiSS. CoMiSS er et scoringssystem som vurderer gråt, regurgitasjon, avføringstype (Bristol avføringsskala), hud- og luftveissymptomer, med en totalscore som varierer fra 0 til 33.

Avføringsprøver ble samlet inn i en beholder med en skje i begynnelsen og slutten av studien for å sikre at en tilstrekkelig mengde (≥50 mg) ble oppnådd. Prøvene ble lagret ved -80°C for å forhindre tap av bioaktivitet og forurensning. MUC2- og sIgA-analyser ble utført ved bruk av sandwich-enzymimmunoassay-metoden med Human MUC2- og Human sIgA ELISA-kits via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)-metoden. Human MUC2 ELISA-kitten har en sensitivitet på 0,57 ng/mL og et måleområde på 1,57-100 ng/mL. Human sIgA ELISA-kitten har en sensitivitet på 0,098 µg/mL og et måleområde på 0,312-20 µg/mL. Ifølge analyseprotokollen ble prøver og standarder tilsatt i duplikat til mikrotiterbrønner. Deretter ble biotin-konjugert spesifikk antistoff og avidin-HRP-konjugat påført. Etter at fargen utviklet seg med TMB-substratet, ble reaksjonen stoppet med en stoppløsning som inneholdt svovelsyre. Absorbanse ble målt ved en bølgelengde på 450±10 nm. Konsentrasjoner ble deretter beregnet ved bruk av en standardkurve basert på de oppnådde optiske tetthetsverdiene.