Wpływ diety eliminacyjnej na barierę śluzową jelit u niemowląt z alergią na białka mleka krowiego

Badanie obejmowało karmione piersią niemowlęta poniżej 26 tygodnia życia, u których alergolog zdiagnozował nową nie-IgE-zależną alergię na białka mleka krowiego (ABMK), stosujące dietę eliminacyjną i zgłoszone do dwóch wyznaczonych szpitali w Turcji. Niemowlęta i ich matki bez alergii lub chorób atopowych, podobne pod względem wieku i płci, stanowiły grupę kontrolną. Zgodnie z analizą mocy statystycznej przeprowadzoną za pomocą programu G*Power, do wykrycia średniej wielkości różnicy przy 5% błędzie I rodzaju i mocy 85% potrzebnych było łącznie 32 niemowląt. Badanie rozpoczęto z 20 niemowlętami z ABMK i 18 zdrowymi niemowlętami. Po nieprzestrzeganiu diety i wycofaniach, badanie zakończono z 17 niemowlętami w każdej grupie.

Dane zbierano w dwóch punktach czasowych: na początku i na końcu badania. W każdym punkcie przeprowadzano z matkami ankietę bezpośrednią, uzyskiwano trzydniowe zapisy żywieniowe zarówno matek, jak i niemowląt, oraz zbierano pomiary antropometryczne niemowląt, wyniki punktacji objawów związanych z białkami mleka krowiego (CoMiSS) i próbki stolca.

Matki w grupie badanej otrzymały szczegółowe szkolenie dotyczące diet eliminacyjnych białek mleka krowiego (BKM) i żywienia uzupełniającego oraz suplementowano je 1000 mg/dobę wapnia. Grupa kontrolna otrzymała jedynie wskazówki dotyczące żywienia uzupełniającego. Prowadzono comiesięczne kontrole w celu monitorowania przestrzegania zaleceń. Dieta eliminacyjna w grupie badanej była przepisana i nadzorowana przez dietetyka, z ponownym wprowadzaniem zgodnie z protokołem "drabiny mlecznej" po średnio 1,9±0,79 miesiącach. W grupie kontrolnej końcowe oceny przeprowadzono trzy miesiące po punkcie wyjściowym. Po zakończeniu badania powtórzono wszystkie początkowe pomiary i pobrano drugą próbkę stolca.

Pomiary masy ciała (kg), długości (cm) i obwodu głowy (cm) niemowląt były wykonywane przez lekarza przy użyciu standaryzowanej wagi, infantometru i nierozciągliwej taśmy mierniczej, zgodnie z metodą zalecaną przez Światową Organizację Zdrowia. Pomiary antropometryczne [długość do wieku (LFA), masa do wieku (WFA), masa do długości (WFL) i obwód głowy do wieku (HCFA)] oceniano za pomocą oprogramowania WHO ANTHRO według wyników Z (wynik Z=wartość pacjenta-wartość średnia/odchylenie standardowe).

Trzydniowe zapisy żywieniowe (dwa dni powszednie, jeden dzień weekendowy) zbierano od matek i niemowląt. Zapisy matek wykorzystano do oceny przestrzegania diety eliminacyjnej, a uczestniczki spożywające nabiał podczas diety zostały wykluczone. Wielkości porcji szacowano przy użyciu książki obrazkowej z wielkościami porcji. Dzienne spożycie energii i składników odżywczych analizowano za pomocą oprogramowania BeBiS (wersja 9.0). Spożycie niemowląt oceniano w odniesieniu do wartości referencyjnych Wystarczającego Spożycia (AI) z Dietary Reference Intakes (DRI). Spożycie mleka matki szacowano metodą ALSPAC: 100 mL dla karmień >10 minut i 50 mL dla karmień <5 minut, z wartościami referencyjnymi 780 mL/dzień dla 0-6 miesięcy i 600 mL/dzień dla 7-12 miesięcy.

Objawy kliniczne niemowląt oceniano za pomocą CoMiSS. CoMiSS to system punktacji oceniający płacz, ulewanie, rodzaj stolca (skala Bristol), objawy skórne i oddechowe, z łącznym wynikiem od 0 do 33.

Próbki stolca pobierano do pojemnika z łyżeczką na początku i na końcu badania, aby zapewnić uzyskanie odpowiedniej ilości (≥50 mg). Próbki przechowywano w temperaturze -80°C, aby zapobiec utracie bioaktywności i zanieczyszczeniu. Analizy MUC2 i sIgA wykonano metodą immunoensymatyczną typu sandwich z wykorzystaniem zestawów Human MUC2 i Human sIgA ELISA metodą testu immunoenzymatycznego (ELISA). Zestaw Human MUC2 ELISA ma czułość 0,57 ng/mL i zakres pomiarowy 1,57-100 ng/mL. Zestaw Human sIgA ELISA ma czułość 0,098 µg/mL i zakres pomiarowy 0,312-20 µg/mL. Zgodnie z protokołem analizy, próbki i wzorce dodawano w duplikatach do studzienek mikropłytkowych. Następnie aplikowano specyficzne przeciwciało sprzężone z biotyną i koniugat awidyna-HRP. Po rozwinięciu barwy z substratem TMB, reakcję zatrzymywano roztworem stopującym zawierającym kwas siarkowy. Absorbancję mierzono przy długości fali 450±10 nm. Następnie stężenia obliczano przy użyciu krzywej standardowej na podstawie uzyskanych wartości gęstości optycznej.