Vliv eliminační diety na střevní mukózní bariéru u kojenců s alergií na bílkovinu kravského mléka

Studie zahrnovala kojené děti mladší 26 týdnů, kterým byl alergologem diagnostikován nový ne-IgE zprostředkovaný CMPA, které držely eliminační dietu a které se přihlásily do dvou nemocnic určených v Turecku. Kojenci a jejich matky bez alergií nebo atopických onemocnění, podobní věkem a pohlavím, byli ve kontrolní skupině. Podle analýzy síly provedené s G*Power bylo potřeba celkem 32 kojenců k detekci středně velkého rozdílu s 5% chybou I. typu a 85% silou. Studie začala s 20 kojenci s CMPA a 18 zdravými kojenci. Po dietní nekomplianci a odstoupeních studie skončila s 17 kojenci v každé skupině.

Data byla sbírána ve dvou časových bodech: na začátku a na konci studie. V každém bodě byly matkám provedeny osobní dotazníky, byly získány třídenní záznamy o stravě pro matky i kojence a byly provedeny antropometrická měření kojenců, skóre příznaků souvisejících s bílkovinou kravského mléka (CoMiSS) a byly odebrány vzorky stolice.

Matky ve skupině případů obdržely podrobné školení o eliminačních dietách na bílkovinu kravského mléka (CMP) a doplňkovém stravování a byly doplněny 1000 mg/den vápníku. Kontrolní skupina obdržela pouze pokyny k doplňkovému stravování. Byly prováděny měsíční kontroly ke sledování compliance. Eliminační dieta ve skupině případů byla předepsána a dohlížena dietologem, s opětovným zavedením podle protokolu "mléčného žebříčku" po průměrně 1,9±0,79 měsících. V kontrolní skupině byly závěrečná hodnocení provedena tři měsíce po výchozím stavu. Po ukončení studie byla všechna počáteční měření opakována a byl odebrán druhý vzorek stolice.

Měření tělesné hmotnosti (kg), délky (cm) a obvodu hlavy (cm) kojenců provedl lékař pomocí standardizované váhy, dětského měřidla a nepružného metru, v souladu s metodou doporučenou Světovou zdravotnickou organizací. Antropometrická měření [délka-věk (LFA), hmotnost-věk (WFA), hmotnost-délka (WFL) a obvod hlavy-věk (HCFA)] byla hodnocena pomocí softwaru WHO ANTHRO podle Z-skóre (z-skóre=hodnota pacienta-průměrná hodnota/směrodatná odchylka).

Třídenní záznamy o stravě (dva všední dny, jeden víkendový den) byly sbírány od matek a kojenců. Záznamy matek byly použity k posouzení dodržování eliminační diety a účastníci konzumující mléčné výrobky během diety byli vyloučeni. Velikosti porcí byly odhadnuty pomocí obrázkové knihy velikostí porcí. Denní příjem energie a živin byl analyzován pomocí softwaru BeBiS (verze 9.0). Příjmy kojenců byly hodnoceny vůči referenčním hodnotám Adekvátního příjmu (AI) z Dietary Reference Intakes (DRI). Příjem mateřského mléka byl odhadnut pomocí metody ALSPAC: 100 mL pro krmení >10 minut a 50 mL pro krmení <5 minut, s referenčními hodnotami 780 mL/den pro 0-6 měsíců a 600 mL/den pro 7-12 měsíců.

Klinické příznaky kojenců byly hodnoceny pomocí CoMiSS. CoMiSS je bodovací systém, který hodnotí pláč, regurgitaci, typ stolice (Bristolská stupnice stolice), kožní a respirační příznaky, s celkovým skóre v rozsahu 0 až 33.

Vzorky stolice byly odebrány do nádoby s lžičkou na začátku a na konci studie, aby bylo zajištěno získání dostatečného množství (≥50 mg). Vzorky byly skladovány při -80°C, aby se zabránilo ztrátě bioaktivity a kontaminaci. Analýzy MUC2 a sIgA byly provedeny pomocí sendvičové enzymové imunoanalýzy s ELISA soupravami Human MUC2 a Human sIgA metodou enzymové imunoanalýzy (ELISA). ELISA souprava Human MUC2 má citlivost 0,57 ng/mL a měřicí rozsah 1,57-100 ng/mL. ELISA souprava Human sIgA má citlivost 0,098 µg/mL a měřicí rozsah 0,312-20 µg/mL. Podle analytického protokolu byly vzorky a standardy přidány do mikrotitračních jamek v duplikátech. Poté byla aplikována biotinem konjugovaná specifická protilátka a avidín-HRP konjugát. Po vyvinutí barvy s TMB substrátem byla reakce zastavena zastavovacím roztokem obsahujícím kyselinu sírovou. Absorbance byla měřena při vlnové délce 450±10 nm. Koncentrace byly poté vypočteny pomocí standardní křivky na základě získaných hodnot optické hustoty.