Влияние элиминационной диеты на кишечный слизистый барьер у младенцев с аллергией на белок коровьего молока

В исследовании участвовали дети на грудном вскармливании младше 26 недель, у которых был диагностирован новый не-IgE-опосредованный АБКМ аллергологом, которые соблюдали элиминационную диету и обращались в две больницы, назначенные в Турции. Младенцы и их матери без аллергий или атопических заболеваний, схожие по возрасту и полу, составили контрольную группу. Согласно анализу мощности, проведенному с помощью G*Power, для обнаружения средней разницы с ошибкой I типа 5% и мощностью 85% требовалось в общей сложности 32 младенца. Исследование началось с 20 младенцев с АБКМ и 18 здоровых младенцев. После случаев несоблюдения диеты и выбывания исследование завершилось с 17 младенцами в каждой группе.

Данные собирались в двух временных точках: в начале и в конце исследования. В каждой точке проводились личные опросы матерей, получались трехдневные записи питания как для матерей, так и для младенцев, а также собирались антропометрические измерения младенцев, баллы симптомов, связанных с белком коровьего молока (CoMiSS), и образцы стула.

Матери в группе случаев получили подробное обучение по элиминационным диетам на белок коровьего молока (БКМ) и прикорму, а также получали добавку 1000 мг/день кальция. Контрольная группа получала только рекомендации по прикорму. Ежемесячно проводились контрольные визиты для мониторинга соблюдения. Элиминационная диета в группе случаев назначалась и контролировалась диетологом, с повторным введением по протоколу «молочной лестницы» в среднем через 1,9±0,79 месяцев. В контрольной группе итоговые оценки проводились через три месяца после исходного уровня. По завершении исследования все первоначальные измерения повторялись, и собирался второй образец стула.

Измерения массы тела (кг), длины (см) и окружности головы (см) младенцев проводились врачом с использованием стандартизированных весов, инфантометра и нерастяжимой сантиметровой ленты в соответствии с методом, рекомендованным Всемирной организацией здравоохранения. Антропометрические измерения [длина по возрасту (LFA), масса по возрасту (WFA), масса по длине (WFL) и окружность головы по возрасту (HCFA)] оценивались с использованием программного обеспечения WHO ANTHRO по Z-показателям (z-показатель=значение пациента-среднее значение/стандартное отклонение).

Трехдневные записи питания (два будних дня, один выходной день) собирались от матерей и младенцев. Записи матерей использовались для оценки соблюдения элиминационной диеты, и участники, употреблявшие молочные продукты во время диеты, исключались. Размеры порций оценивались с использованием книги изображений размеров порций. Суточное потребление энергии и питательных веществ анализировалось с помощью программного обеспечения BeBiS (версия 9.0). Потребление младенцев оценивалось по сравнению с референтными значениями Адекватного Потребления (AI) из Диетических Референсных Потреблений (DRI). Потребление грудного молока оценивалось с использованием метода ALSPAC: 100 мл для кормлений >10 минут и 50 мл для кормлений <5 минут, с референтными значениями 780 мл/день для 0-6 месяцев и 600 мл/день для 7-12 месяцев.

Клинические симптомы младенцев оценивались с использованием CoMiSS. CoMiSS — это система баллов, которая оценивает плач, срыгивания, тип стула (Бристольская шкала стула), кожные и респираторные симптомы, с общим баллом от 0 до 33.

Образцы стула собирались в контейнер с ложечкой в начале и в конце исследования, чтобы обеспечить достаточное количество (≥50 мг). Образцы хранились при -80°C для предотвращения потери биологической активности и загрязнения. Анализы MUC2 и sIgA проводились с использованием метода сэндвич-ферментного иммуноанализа с наборами Human MUC2 и Human sIgA ELISA методом иммуноферментного анализа (ELISA). Набор Human MUC2 ELISA имеет чувствительность 0,57 нг/мл и диапазон измерений 1,57-100 нг/мл. Набор Human sIgA ELISA имеет чувствительность 0,098 мкг/мл и диапазон измерений 0,312-20 мкг/мл. Согласно протоколу анализа, образцы и стандарты добавлялись в дубликатах в микролунки. Затем применялись специфическое антитело, конъюгированное с биотином, и конъюгат авидин-HRP. После развития цвета с субстратом TMB реакция останавливалась стоп-раствором, содержащим серную кислоту. Оптическая плотность измерялась на длине волны 450±10 нм. Затем концентрации рассчитывались с использованием стандартной кривой на основе полученных значений оптической плотности.