Effetto della dieta di eliminazione sulla barriera mucosa intestinale nei lattanti con allergia alle proteine del latte vaccino

Lo studio ha incluso bambini allattati al seno di età inferiore a 26 settimane a cui è stata diagnosticata una nuova CMPA non IgE-mediata da un allergologo, che hanno seguito una dieta di eliminazione e che si sono rivolti a due ospedali designati in Turchia. I neonati e le loro madri senza allergie o malattie atopiche, simili per età e sesso, erano nel gruppo di controllo. Secondo l'analisi di potenza eseguita con G*Power, erano necessari un totale di 32 neonati per rilevare una differenza di media entità con un tasso di errore di tipo I del 5% e una potenza dell'85%. Lo studio è iniziato con 20 neonati con CMPA e 18 neonati sani. A seguito di mancata compliance dietetica e ritiri, lo studio si è concluso con 17 neonati in ciascun gruppo.

I dati sono stati raccolti in due momenti: all'inizio e alla fine dello studio. In ogni momento, sono stati somministrati questionari faccia a faccia alle madri, sono stati ottenuti registri alimentari di tre giorni sia per le madri che per i neonati, e sono state raccolte le misurazioni antropometriche dei neonati, i punteggi dei sintomi correlati alle proteine del latte vaccino (CoMiSS) e i campioni di feci.

Le madri nel gruppo caso hanno ricevuto una formazione dettagliata sulle diete di eliminazione delle proteine del latte vaccino (CMP) e sull'alimentazione complementare e sono state integrate con 1000 mg/giorno di calcio. Il gruppo di controllo ha ricevuto solo indicazioni sull'alimentazione complementare. Sono stati effettuati follow-up mensili per monitorare la compliance. La dieta di eliminazione nel gruppo caso è stata prescritta e supervisionata da un dietista, con la reintroduzione seguendo il protocollo "scala del latte" dopo una media di 1,9±0,79 mesi. Nel gruppo di controllo, le valutazioni finali sono state eseguite tre mesi dopo la baseline. Al termine dello studio, tutte le misurazioni iniziali sono state ripetute ed è stato raccolto un secondo campione di feci.

Il peso corporeo (kg), la lunghezza (cm) e la circonferenza cranica (cm) dei neonati sono stati misurati da un medico utilizzando una bilancia standardizzata, un infantometro e un metro a nastro non elastico, in conformità con il metodo raccomandato dall'Organizzazione Mondiale della Sanità. Le misurazioni antropometriche [lunghezza per età (LFA), peso per età (WFA), peso per lunghezza (WFL) e circonferenza cranica per età (HCFA)] sono state valutate utilizzando il software WHO ANTHRO secondo i punteggi Z (z-score=valore del paziente-valore medio/deviazione standard).

Sono stati raccolti registri alimentari di tre giorni (due giorni feriali, un giorno del fine settimana) dalle madri e dai neonati. I registri delle madri sono stati utilizzati per valutare l'adesione alla dieta di eliminazione, e i partecipanti che consumavano latticini durante la dieta sono stati esclusi. Le dimensioni delle porzioni sono state stimate utilizzando un libro illustrato delle dimensioni delle porzioni. L'apporto giornaliero di energia e nutrienti è stato analizzato utilizzando il software BeBiS (versione 9.0). L'apporto dei neonati è stato valutato rispetto ai valori di riferimento di Assunzione Adeguata (AI) dai Dietary Reference Intakes (DRI). L'assunzione di latte materno è stata stimata utilizzando il metodo ALSPAC: 100 mL per poppate >10 minuti e 50 mL per poppate <5 minuti, con valori di riferimento di 780 mL/giorno per 0-6 mesi e 600 mL/giorno per 7-12 mesi.

I sintomi clinici dei neonati sono stati valutati utilizzando CoMiSS. CoMiSS è un sistema di punteggio che valora il pianto, la rigurgitazione, il tipo di feci (scala delle feci di Bristol), i sintomi cutanei e respiratori, con un punteggio totale che va da 0 a 33.

I campioni di feci sono stati raccolti in un contenitore con un cucchiaio all'inizio e alla fine dello studio per garantire che fosse ottenuta una quantità adeguata (≥50 mg). I campioni sono stati conservati a -80°C per prevenire la perdita di bioattività e la contaminazione. Le analisi di MUC2 e sIgA sono state eseguite utilizzando il metodo immunoenzimatico sandwich con i kit ELISA Human MUC2 e Human sIgA tramite il metodo del saggio immunoassorbente legato all'enzima (ELISA). Il kit ELISA Human MUC2 ha una sensibilità di 0,57 ng/mL e un intervallo di misurazione di 1,57-100 ng/mL. Il kit ELISA Human sIgA ha una sensibilità di 0,098 µg/mL e un intervallo di misurazione di 0,312-20 µg/mL. Secondo il protocollo di analisi, i campioni e gli standard sono stati aggiunti in duplicato nei pozzetti della micropiastra. Quindi, sono stati applicati l'anticorpo specifico coniugato con biotina e il coniugato avidina-HRP. Dopo lo sviluppo del colore con il substrato TMB, la reazione è stata fermata con una soluzione di stop contenente acido solforico. L'assorbanza è stata misurata a una lunghezza d'onda di 450±10 nm. Le concentrazioni sono state quindi calcolate utilizzando una curva standard basata sui valori di densità ottica ottenuti.