Effekten af eliminationsdiæt på tarmslimhindebarrieren hos spædbørn med komælksproteinallergi

Studiet inkluderede ammede spædbørn under 26 uger, som blev diagnosticeret med ny ikke-IgE-medieret CMPA af en allergolog, havde en eliminationsdiæt og ansøgte til to hospitaler i Tyrkiet. Spædbørn og deres mødre uden allergier eller atopiske sygdomme, der var sammenlignelige i alder og køn, udgjorde kontrolgruppen. Ifølge effektanalysen udført med G*Power var der behov for i alt 32 spædbørn for at påvise en mellemstor forskel med en type I-fejlrate på 5 % og en styrke på 85 %. Studiet startede med 20 spædbørn med CMPA og 18 raske spædbørn. Efter diætnonoverholdelse og frafald blev studiet afsluttet med 17 spædbørn i hver gruppe.

Data blev indsamlet på to tidspunkter: i begyndelsen og slutningen af studiet. På hvert tidspunkt blev der gennemført ansigt-til-ansigt spørgeskemaer til mødrene, tre-dages kostregistreringer blev indhentet for både mødre og spædbørn, og spædbørnenes antropometriske målinger, komælksproteinrelaterede symptomscore (CoMiSS) og afføringsprøver blev indsamlet.

Mødre i casegruppen modtog detaljeret træning i komælksprotein (CMP) eliminationsdiæter og tilskudsernæring og blev supplementeret med 1000 mg/dag calcium. Kontrolgruppen modtog kun vejledning i tilskudsernæring. Der blev gennemført månedlige opfølgninger for at overvåge overholdelse. Eliminationsdiæten i casegruppen blev ordineret og overvåget af en diætist, med genindførsel efter "mælketrappe"-protokollen efter gennemsnitligt 1,9±0,79 måneder. I kontrolgruppen blev de endelige vurderinger udført tre måneder efter baseline. Ved studiafslutning blev alle indledende målinger gentaget, og en anden afføringsprøve blev indsamlet.

Spædbørnenes kropsvægt (kg), længde (cm) og hovedomfang (cm) blev målt af en læge ved hjælp af en standardiseret vægt, infantometer og ikke-strækket målebånd i overensstemmelse med metoden anbefalet af Verdenssundhedsorganisationen. Antropometriske målinger [længde-for-alder (LFA), vægt-for-alder (WFA), vægt-for-længde (WFL) og hovedomfang-for-alder (HCFA)] blev vurderet ved hjælp af WHO ANTHRO Software ifølge Z-scorer (z-score=patientens værdi-gennemsnitsværdi/standardafvigelse).

Tre-dages kostregistreringer (to hverdage, en weekenddag) blev indsamlet fra mødre og spædbørn. Mødrenes registreringer blev brugt til at vurdere overholdelse af eliminationsdiæten, og deltagere, der indtog mælkeprodukter under diæten, blev ekskluderet. Portionsstørrelser blev estimeret ved hjælp af en portionsstørrelsesbilledbog. Dagligt energi- og næringsstofindtag blev analyseret ved hjælp af BeBiS software (version 9.0). Spædbørnenes indtag blev vurderet mod tilstrækkeligt indtagsreferenceværdier (AI) fra Dietary Reference Intakes (DRI). Modermælksindtaget blev estimeret ved hjælp af ALSPAC-metoden: 100 mL for fodringer >10 minutter og 50 mL for fodringer <5 minutter, med referenceværdier på 780 mL/dag for 0-6 måneder og 600 mL/dag for 7-12 måneder.

De kliniske symptomer hos spædbørnene blev vurderet ved hjælp af CoMiSS. CoMiSS er et scoringssystem, der vurderer gråd, regurgitation, afføringstype (Bristol afføringsskala), hud- og respiratoriske symptomer, med en totalscore fra 0 til 33.

Afføringsprøver blev indsamlet i en beholder med en ske i begyndelsen og slutningen af studiet for at sikre, at der blev opnået en tilstrækkelig mængde (≥50 mg). Prøverne blev opbevaret ved -80°C for at forhindre tab af bioaktivitet og forurening. MUC2- og sIgA-analyser blev udført ved hjælp af sandwich enzymimmunoassay-metoden med Human MUC2 og Human sIgA ELISA-kits via enzym-linked immunosorbent assay (ELISA)-metoden. Human MUC2 ELISA-kittet har en følsomhed på 0,57 ng/mL og en måleområde på 1,57-100 ng/mL. Human sIgA ELISA-kittet har en følsomhed på 0,098 µg/mL og en måleområde på 0,312-20 µg/mL. Ifølge analyseprotokollen blev prøver og standarder tilsat i duplikat til mikrotiterbrønde. Derefter blev biotin-konjugeret specifikt antistof og avidin-HRP-konjugat anvendt. Efter at farven udviklede sig med TMB-substratet, blev reaktionen stoppet med en stopopløsning indeholdende svovlsyre. Absorbans blev målt ved en bølgelængde på 450±10 nm. Koncentrationer blev derefter beregnet ved hjælp af en standardkurve baseret på de opnåede optiske densitetsværdier.